吗啡依赖模型大鼠脑cDNA文库的构建

目的:构建吗啡依赖模型大鼠脑cDNA文库.方法:建立大鼠吗啡躯体依赖模型后,取鼠脑进行总RNA的抽提、mRNA的纯化,以mRNA为模板合成第一链cDNA后用LD-PCR方法合成双链cDNA,用限制性内切酶SfiⅠA、B分别双酶切双链cDNA与pTRG载体,连接后的cDNA文库转化XL1-Blue MRF′ Kan 超级感受态并收菌,完成cDNA文库构建.结果与结论:PCR结果显示,cDNA片段连接效率＞90%,cDNA插入片段在1 kb左右.吗啡依赖大鼠脑cDNA文库总容量为3.05×106,满足下一步细菌双杂交文库筛选要求.     

hTERT-siRNA表达载体的构建及对MCF-7细胞生长、端粒酶活性的抑制作用

目的 构建人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的RNA干扰(RNAi)表达载体,并研究该载体对乳腺癌MCF-7细胞端粒酶活性及细胞增殖的影响,为针对端粒酶的乳腺癌基因治疗提供新的途径.方法 设计针对人端粒酶逆转录酶催化亚基(hTERT)的干扰靶序列TGTTCAGCGTGCTCAACTA,构建重组siRNA表达质粒pGenesil-hTERT,同时构建不针对任何基因的阴性对照重组pGenesiL-HK.两种重组质粒经酶切、电泳分析和测序鉴定后,用脂质体转染法分别转染乳腺癌MCF-7细胞,应用端粒酶重复序列扩增聚合酶链反应(TRAP-PCR)及聚丙烯酰胺凝胶电泳检测端粒酶活性,流式细胞仪测定细胞凋亡率.结果 酶切电泳测序分析表明插入序列正确,重组质粒构建成功.转染pGenesil-hTERT的MCF-7细胞,凝胶电泳见端粒酶特征性条带明显减少,端粒酶活性受到明显抑制pGenesil-hTERT转染细胞后凋亡率较对照组明显升高(P＜0.01),且转染48h凋亡率最高,达54.7%±2.41%.结论 hTERT-siRNA可有效抑制乳腺癌MCF-7细胞端粒酶活性、促进细胞凋亡,此法有望应用于肿瘤基因治疗.     

前列腺癌细胞系LNCaP中的新型雄激素调节基因Prosaposin

雄激素调节基因（ARG）在正常前列腺和前列腺肿瘤中起着调节细胞生长的作用。近来，作者报道了在雄激素非依赖性或转移前列腺癌细胞／组织中对先前已知的神经营养因子prosaposin的基因组扩增和／或过表达。正如多效生长因子一样，prosaposin及它的活性分子微生物（如saposin C）的功能更侧重于前列腺癌细胞的恶性表型。另外，在LNcaP细胞中prosaposin或saposin C上调雄激素受体（AR）和AR靶基因的表达和激活（如PSA等）。在该项研究中，作者检测了雄激素调节基因prosaposin，在DHT双氢睾酮干预的LNCaP细胞中，prosaposin的表达上调。另外，研究揭示了prosaposin启动子的雄激素反应性因为雄激素受体的激素反应元件位于prosaposin启动子近侧区。此研究首次证实了prosaposin是一种雄激素调节基因。此项观察及prosaposin的多效生长因子活性一起揭示了此种分子在雄激素受体依赖的前列腺肿瘤进展中的作用。     

大肠癌组织中癌相关基因的表达及其启动子低甲基化的实验研究

大肠癌是最常见的消化系恶性肿瘤之一，近年来其发病率有逐年上升趋势。大肠癌的治疗关键在于早期诊断，而目前惟一的根治方法是早期切除肿瘤。癌相关基因（CAGE）是2002年发现的与癌症有关的基因，其在多种癌组织及肿瘤细胞系中呈高表达，在除睾丸组织外的正常组织中均无表达。现回顾性分析大肠癌、大肠腺瘤及正常黏膜组织中CAGE的表达及其启动子低甲基化情况。     

短发卡RNA对人胃癌细胞STAT3基因的沉默作用

目的:探讨STAT3基因小发夹RNA（shRNA）表达质粒对胃癌MKN-45细胞STAT3基因的干扰作用。方法:根据STAT3 mRNA 编码序列，设计RNA干扰靶点，构建STAT3基因的特异性小RNA干扰质粒（psiRNA-H1/STAT3），使用脂质体转染人胃癌细胞系（MKN-45细胞）。实验分为对照（A）组，psiRNA-H1转染（B）组和psiRNA-H1/STAT3转染（C）组。通过RT-PCR和Western Blot检测STAT3特异性小RNA干扰基因对胃癌细胞STAT3基因mRNA和蛋白表达的影响。结果:psiRNA-H1/STAT3经限制性酶切及部分序列分析证明基因插入正确，并经测序证实。将其成功转染MKN-45细胞后，该细胞的STAT3 mRNA和蛋白表达均明显下降(P<0.05)。 结论:将成功构建的针对STAT3基因的shRNA表达载体转染MKN-45细胞，能有效抑制该细胞的STAT3 mRNA和蛋白表达，为STAT3基因靶向治疗提供一定的实验依据。     

Inhibiting effect of antisense hTRT on telomerase activity of human liver cancer cell line SMMC-7721

Objective: To induce changes in biological character of human liver cancer cell line SMMC-7721 by blocking the expression of telomerase genes hTRT and to explore its value in cancer gene therapy. Methods: The vehicle for eukaryotic expression of antisense hTRT was constructed and then transfected into SMMC-7721 cells. The effects of antisense hTRT gene on telomerase activity, cancer cell growth and malignant phenotypes were analyzed. Results: The obtained transfectants that could express antisense hTRT gene stably showed marked decrease in telomerase activity;the shortening of telomere was obvious; cells presented contact growth inhibition; in nude mice transplantation, the rate of tumor induction dramatically decreased. Conclusion : Antisense hTRT gene expression can significantly inhibit telomerase activity of cancer cells and decrease malignant phenotypes in vitro and in vivo. Therefore, as a telomerase inhibitor, antisense hTRT gene may be a new pathway for cancer therapy.     

人卵巢癌HO—8910细胞系胸内多胺水平的动态变化

采用丹酰氯薄膜层析法测定体外培养人卵巢癌ＨＯ－８９１０细胞系８天时胞内多胺水平，结果提示：其细胞多胺水平与细胞分裂增殖呈显著平行的关系。     

水中脊髓灰质炎病毒细胞感染模中病毒株与细胞株的筛选

根据５种细胞系对脊髓灰质炎病毒１型５个毒株的敏感性性筛选适用于病毒消毒实验的病毒株和细胞系。方法比较各毒株在不同细胞系中增殖３ｄ－７ｄ后的细胞病变作用、半数组织培养感染量、     

加强和改进老干部思想政治工作之我见

老干部工作是党的干部工作的重要组成部分,加强和改进老干部思想政治工作,是巩固社会安全、稳定大局、发挥老干部政治优势、构建和谐社会的需要.新时期老干部思想政治工作有其自身特点,必须与提高思想认识相结合,与落实老干部两项待遇相结合,与开展丰富多彩的娱乐活动相结合,与提高老干部工作者能力素质相结合.