补肾益智方治疗阿尔茨海默病斑马鱼模型的作用及机制研究

目的 通过阿尔茨海默病斑马鱼模型,探讨补肾益智方的作用机制。方法 选取6月龄斑马鱼,随机分成5组,分为空白对照组（n=12）、模型组（n=10）、阳性药组（n=10）、补肾益智方高剂量组（n=11）和低剂量组（n=12）。除空白对照组,其余各组均用AlCl₃·6H₂O配制成浓度为100 μg/L的溶液持续浸泡斑马鱼30 d,每天更换一半的染毒培养液。染毒结束后利用T迷宫实验剔除染毒失败的斑马鱼。造模结束后,分别给予阳性药组多奈哌齐20 μg/mL,高、低剂量组补肾益智方30、10 μg/mL浸泡14 d。给药结束后,通过T迷宫实验检测斑马鱼学习记忆能力;免疫组化染色观察神经元变化;qPCR检测相关基因的表达;Western blot检测相关蛋白的表达。结果 ①在T迷宫测试第4天,模型组潜伏时间为（198.00±45.78）s,补肾益智方低剂量组为（12.75±2.29）s,补肾益智方高剂量组为（7.27±0.90）s,补肾益智方治疗组斑马鱼的潜伏时间明显低于模型组,差异有统计学意义（P<0.05）;②补肾益智方治疗组斑马鱼的端脑神经元数量较模型组明显增多、排列变整齐,星型胶质细胞增多;③补肾益智方组斑马鱼脑ACHE活力显著降低（P<0.01）、ChAT活力显著增加（P<0.05）;④补肾益智方治疗组斑马鱼脑组织中appb、bace1表达显著降低（P<0.01）,sod、cat、nrf2基因表达显著增加（P<0.01）,keap1基因表达显著降低（P<0.01）;⑤补肾益智方治疗组斑马鱼脑组织蛋白表达情况与qPCR结果一致,APP、BACE1表达显著降低（P<0.01）,Nrf2表达显著增加（P<0.01）,Keap1表达显著降低（P<0.01）。结论 补肾益智方能有效改善AD斑马鱼的学习记忆能力,减少Aβ生成,减轻氧化应激。      

Clinical Experience in Treatment of Alzheimer's Disease with Jiannao Yizhi Formula (健脑益智方) and Routine Western Medicine

Objective: To investigate the long-term therapeutic effects of the Chinese medicine Jiannao Yizhi Formula(健脑益智方, JYF) in the treatment of Alzheimer's disease(AD). Methods: Sixty mild-to-moderate AD participants were recruited and randomly allocated to the treatment(30 with JYF) and the control groups(30 with donepezil) for 6 months with the random numbers. The primary outcomes were scores of Alzheimer's Disease Rating Scale-Cognitive(ADAS-Cog) and Chinese Medicine Symptom Scale(CM-SS). The secondary outcomes were scores of Mini Mental State Examination(MMSE), Montreal Cognitive Assessment(MoCA), and Activities of Daily Living(ADL). Safety assessments were conducted at baseline and the 6 th month of treatment. Serum levels of acetylcholine(Ach), amyloid-β protein 42(Aβ_(42)), and the microtubule-associated protein tau(Tau) were also determined by enzyme-liked immunosorbent assay. Results: Fifty-one participants were included in the final analyses(JYF n=27; donepezil n=24). Compared with baseline, both JYF and donepezil increased the MoCA and MMSE scores and decreased the ADAS-Cog and CM-SS scores(P0.05 or P0.01). Both drugs increased the serum levels of Ach and decreased the serum levels of Aβ_(42) and Tau(all P0.05). There was no significant difference in these variables between the two groups, which showed that JYF was not inferior to donepezil. No obviously significant changes were observed in the ADL. No severe adverse events were observed in both groups. Conclusion: The effect and safety of JYF for the treatment of AD were not inferior to those of donepezil.     

健脾活络方治疗脾虚络瘀型的糖尿病远端对称性多发性神经病变的临床研究

目的探讨健脾活络方治疗脾虚络瘀型的糖尿病远端对称性多发性神经病变(DSPN)的临床疗效。方法将80例脾虚络瘀型的DSPN患者随机分为治疗组和对照组,各40例。两组均给予基础治疗配合甲钴胺片治疗(500μg,3次/d,口服),治疗组在对照组治疗基础上加用健脾活络方煎服治疗。治疗8周后,观察比较两组治疗前后多伦多临床评分(TCSS)、震动感觉阈值(VPT)检查结果、生活质量评分及疗效。结果治疗后,两组TCSS评分、VPT检查结果、生活质量评分均明显改善,差异有统计学意义(P<0.05),两组之间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。临床疗效方面,治疗组总有效率85.00%、对照组60.00%,两组之间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论健脾活络方明显改善脾虚络瘀型DSPN患者神经功能和生活质量,提高疗效。     

降糖增效方对糖尿病大鼠肝脏胰岛素信号通路IRS1位点磷酸化的影响

目的通过观察降糖增效方对糖尿病大鼠肝脏胰岛素受体底物1(insulin receptor substrates 1,IRS1)磷酸化的影响来探讨该方发挥降糖增效作用的机制。方法将40只6~8周龄雄性ZDF(fa/fa)大鼠随机分为模型组、二甲双胍组(0.134 g/kg)、降糖增效方组(0.64 g/kg)、联合组(降糖增效方0.64 g/kg+二甲双胍0.134 g/kg),另选ZDF(fa/+)大鼠10只为正常组,连续干预6周;实验结束检测体空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、血清胰岛素水平(fasting insulin,FINS)、胰岛素抵抗指数(homeostatic model assessment of insulin resistance,HOMA-IR)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、血肌酐(serum creatinine,Scr)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、口服葡萄糖耐量试验(oral glucose tolerance test,OGTT);蛋白免疫印迹法(Western bloting)检测IRS1丝氨酸磷酸化位点ser307、ser612、ser1101表达。结果与模型组相比较,各治疗组大鼠FBG、FIns、HOMA-IR、OGTT2 h血糖水平、AUC、SCr、BUN显著降低(P<0.05,P<0.01);肝组织p-IRS1 Ser307、p-IRS1 ser612、p-IRS1 ser1101蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01);与二甲双胍、降糖增效方组比较,联合组大鼠FBG、FIns、HOMA-IR显著降低(P<0.05,P<0.01);OGTT2 h血糖水平以及AUC显著降低(P<0.05,P<0.01);肝组织p-IRS1 Ser307、p-IRS1 ser612、p-IRS1 Ser1101蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论降糖增效方降低糖尿病大鼠肝脏IRS1 ser307/612/1101位点磷酸化水平,这可能是其增加降糖疗效的机制。     

左金方对幽门螺旋杆菌感染的人GES-1细胞增殖与凋亡的作用研究

目的研究左金方对幽门螺旋杆菌引起人正常胃黏膜上皮(GES-1)细胞增殖与凋亡的影响。方法幽门螺旋杆菌以不同的感染复数(1∶1、50∶1、100∶l、200∶1、300∶1)感染GES-1细胞,于12、24、48 h后,CCK-8检测细胞的增殖活性;以不同质量浓度(0.5、1.0、2.0、4.0μg/m L)左金方作用幽门螺旋杆菌感染的GES-1细胞12、24、48 h后,收集细胞,CCK-8检测细胞的增殖活性,流式细胞仪和Western blotting检测细胞的凋亡率;Hochest染色检测凋亡细胞的形态学改变。结果幽门螺旋杆菌感染GES-1细胞后,感染复数越大,侵染时间越长,抑制细胞生长和促进细胞凋亡的作用越强,幽门螺旋杆菌以100∶1的感染复数作用人GES-1细胞12、24、48 h后,细胞存活率分别降低到(80.57±1.21)%、(70.04±3.21)%、(67.74±2.91)%,细胞的凋亡率分别增加到(23.74±1.71)%、(53.60±1.87)%、(70.67±2.87)%;与1.0μg/m L左金方共培养24 h后,细胞存活率上升到(97.67±1.04)%,细胞凋亡率降低到(31.04±1.02)%,与相应模型组对比,差异显著(P0.01);Westernblotting结果表明,左金方各处理组细胞Caspase-3蛋白水平表达均明显降低;Hochest荧光染色,从形态学的角度进一步验证了这一结果。结论幽门螺旋杆菌感染人GES-1细胞后,可以抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,左金方可以降低幽门螺旋杆菌引起的细胞损伤,保护GES-1细胞。     

基于UPLC结合比色法的葛桑降糖胶囊质量控制研究

目的构建葛桑降糖胶囊的质量控制方法。方法采用比色法测定葛桑降糖胶囊粗多糖、总皂苷和总黄酮含量;采用UPLC建立葛桑降糖胶囊的指纹图谱,测定了10个批次产品;并利用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版本)进行相似度评价,确定共有峰。结果 3批次葛桑降糖胶囊中粗多糖平均质量分数为4.56%,总皂苷平均质量分数为2.97%,总黄酮平均质量分数为2.61%;建立了10批次葛桑降糖胶囊的UPLC指纹图谱,确立15个共有峰,经对照品指认出7个共有峰,分别是葛根素、芦丁、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、商陆苷、人参皂苷Rb1、商陆黄素,对应1、5、8、10、12、14、15号峰。结论此方法可用于葛桑降糖胶囊的质量控制。     

补肾活血方对去卵巢大鼠子宫ER及Cyclin B表达影响的实验研究

目的观察补肾活血方对去卵巢大鼠子宫的雌激素受体及周期蛋白(Cyclin)B表达的影响,探讨其治疗围绝经期综合征的作用机制。方法选择SD雌性大鼠54只,随机分为假手术组、模型组、雌二醇组、补肾活血方组、联合用药组、补肾活血方+假手术组,每组9只。以双侧卵巢切除法建立大鼠围绝经期模型。各组灌胃给药40 d后取血清和子宫称重;酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清中雌二醇(E2)、黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)浓度;HE染色观察子宫组织病理改变并测定子宫内膜厚度;免疫组化法观察雌激素受体(ER)α、ERβ在子宫组织中分布与表达情况;蛋白质印迹法(Western blot)法检测子宫组织中周期蛋白(Cyclin B)蛋白表达。结果补肾活血方治疗40 d后,与模型组比较,血清LH、FSH明显降低(P0.05或P0.01),血清E2水平升高(P0.05);同时,子宫脏器指数、子宫内膜厚度、子宫组织中ERα、ERβ和Cyclin B蛋白表达均明显升高(P0.05),与雌激素组呈现相似的作用,但作用强度均低于雌激素;补肾活血方+假手术组大鼠各项指标与假手术组比较无明显差异。结论补肾活血方具有雌激素样作用,但作用强度弱于雌激素,对正常大鼠子宫组织无显著影响。     

《中国药典》“维生素D测定法”中计算公式的讨论

目的：对《中国药典》（2015年版）四部通则0722“维生素D测定法”中计算维生素D总量公式进行了深入探讨。方法：在检验中发现所得结果与根据标准公式计算所得存在着差异。经过推算,并考察比较了近几版中国药典和几种国外药典（USP,EP,BP,JP）中的文本描述,分析了产生差异的原因,给出了改进建议。结果与结论：本工作可为完善《中国药典》维生素D含量计算方法提供参考。 ?     

星点设计-效应面法优化盐酸溴己新吸入粉雾剂的处方

摘 要 目的：优化盐酸溴己新吸入粉雾剂的处方。方法: 采用冷冻干燥 气流粉碎法制备盐酸溴己新吸入粉雾剂,通过星点设计考察甘露醇（X1）,亮氨酸（X2）和泊洛沙姆188（X3）在辅料中的用量对盐酸溴己新吸入粉雾剂的休止角（Y1）、细微粒子剂量（Y2）和空气动力学粒径（Y3）的影响。根据最佳数学模型绘制效应面,通过重叠等高线图确定最优处方。结果:影响因素和考察指标之间存在定量关系,优化处方为甘露醇：亮氨酸：泊洛沙姆188在处方中的比例为2.4∶〖KG-*2〗2.22∶〖KG-*2〗0.05。较优处方的各指标实测值与预测值较接近。结论:采用星点设计 效应面法完成了盐酸溴己新吸入粉雾剂的多目标同步优化。     

玉蓝降糖胶囊联合二甲双胍治疗2型糖尿病的疗效观察

目的探讨玉蓝降糖联合二甲双胍治疗2型糖尿病患者的有效性和安全性。方法选取河北省第七人民医院2015年12月—2016年12月收治的2型糖尿病患者125例,随机分成对照组(62例)和治疗组(63例)。对照组患者口服盐酸二甲双胍片,2片/次,2次/d,根据病情适当调整剂量。治疗组在对照组基础上口服玉蓝降糖胶囊,4粒/次,3次/d。所有患者均治疗3个月。观察两组患者临床疗效,比较治疗前后两组患者空腹血糖(FPG)、餐后2 h血糖(2 h PG)和糖化血红蛋白(Hb A1c)以及临床指标水平和不良反应情况。结果治疗后,对照组临床总有效率为82.26%,显著低于治疗组的96.83%,两组比较差异具有统计学意义(P0.05)。治疗后,两组患者血清FPG、2 h PG和Hb A1c水平显著降低(P0.05);且治疗组患者FPG、2 h PG和Hb A1c水平明显低于对照组(P0.05)。治疗后,两组患者BMI指数、收缩压(SBP)、尿酸(UA)和三酰甘油(TG)水平均显著降低(P0.05);且治疗组患者各指标改善情况均要明显低于对照组(P0.05)。治疗期间,对照组不良反应发生率为19.35%,明显高于治疗组的4.76%,两组比较差异具有统计学意义(P0.05)。结论玉蓝降糖联合二甲双胍治疗2型糖尿病疗效好,安全性高,具有一定的临床推广应用价值。