PAI－1糖基化位点突变体的构建及其在哺乳动物细胞中表达

Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制剂（ＰＡＩ－１）是一种Ｍｒ为５０×１０３的单链糖蛋白，有３７９个氨基酸残基，３个Ｎ型糖基化位点。构建ＰＡＩ－１糖基化突变体，以便研究糖链的功能。用寡核苷酸定位突变技术将３个糖基化位点２０９，２６５，３２９位进行突变，把３个糖基化位点都发生了突变的ＰＡＩ－１ｃＤＮＡ组装到真核表达载体ｐＳＶ２中，得到真核表达质粒ｐＺＨ－ｐ１－Ｍ３Ｅ；在二氢叶酸还原酶缺陷型中国仓鼠卵巢细胞（ＣＨＯｄｈｆｒ－）中进行短暂表达，用发色底物法和夹心ＥＬＩＳＡ方法检测培养液中ＰＡＩ－１的活性和含量。结果：糖基化位点突变的ＰＡＩ－１能在ＣＨＯ细胞中表达，但表达水平及活性较低。非糖基化ＰＡＩ－１的活性和抗原分别为４．３４ＩＵ／ｍｌ和３．１５μｇ／Ｌ结论：用寡核苷酸定位突变方法获得了ＰＡＩ－１糖基化突变体，并且在ＣＨＯ细胞中得到表达。     

尿毒症患者血小板聚集功能和血小板膜糖蛋白变化及其意义

用流式细胞仪对尿毒症患者血小板糖蛋白(GP)Ⅰ_b和GPⅡ_b/Ⅲ_a进行分析,同时测定了患者血小板聚集率及血浆纤维蛋白原含量。结果显示尿毒症组与对照组相比,血小板膜GPⅠb、GPⅡ_b/Ⅲ_a和血浆纤维蛋白原含量均无明显差异,而尿毒症组血小板计数和血小板聚集率均极显著低于对照组(P<0.01;P<0.01)。提示尿毒症患者血小板功能缺陷并非血小板膜糖蛋白变化所致,而可能与血小板数量减少及活性改变有关。     

糖蛋白Ⅱb／Ⅲa受体与肿瘤转移

糖蛋白Ⅱｂ／Ⅲａ受体在于血小板及肿瘤细胞表面，肿瘤细胞糖蛋白Ⅱｂ／Ⅲａ受体的表达与其聚集血小板，肿瘤转移的能力有关；血小板表面糖蛋白Ⅱｂ／Ⅲａ受体激活并形成血栓可促进肿瘤转移，阻断糖蛋白Ⅱｂ／Ⅲａ受体与配体结合可抑制肿瘤转移。     

Effects of Diazepam,Phenobarbital,Propranolol,and Cimetidine on Diazepam Oxidizing Isoenzymes in Rat Liver Microsomes

研究地西泮、苯巴比妥、普萘洛尔和西咪替丁对地西泮氧化代谢的影响及其药酶蛋白的初步分析，应用ＨＰＬＣ，ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳和薄层扫描测定地西泮及其代谢物，并对大鼠肝微粒体和酶蛋白进行分离和含量测定。结果表明地西泮、普萘洛尔和西咪替丁使肝微粒体中Ｐ４５０含量明显降低。地西泮和普萘洛尔明显抑制地西泮Ｃ３羟化活性，大剂量普萘洛尔尚能抑制地西泮Ｎ脱甲基。苯巴比妥明显诱导Ｐ４５０生成，增强地西泮Ｎ脱甲基和Ｃ３羟化酶活性及分子量为５１，０００和５９，０００的电泳蛋白带，而地西泮、普萘洛尔则呈抑制作用。并发现，地西泮Ｎ脱甲基酶活性和分子量为５９，０００蛋白含量呈线性相关（Ｐ＜０．０５），而Ｃ３羟化酶活性则与５１，０００蛋白含量呈线性相关（Ｐ＜０．０１）。因此地西泮Ｃ３羟化代谢可能与５１，０００的Ｐ４５０酶蛋白有关，而Ｎ脱甲基代谢则可能与５９，０００的Ｐ４５０酶蛋白有关。     

慢性心房颤动患者P-选择素水平及内皮功能障碍

目的　研究慢性心房颤动 (房颤 )患者血小板活化和内皮功能障碍的有关标志物 ,探讨其临床意义。方法　采用酶联免疫双抗体夹心法测定心脏病患者房颤组 (30例 )、无房颤组 (2 0例 )和正常对照组 (17例 )的血浆P -选择素及血管性血友病因子 (vWF)的水平。结果　房颤组血浆P -选择素及vWF水平显著高于无房颤组及正常对照组 (P均 <0 .0 1) ,无房颤组与正常对照组比较上述指标亦增高 (P <0 .0 1)。结论　慢性房颤组患者存在血小板激活和内皮功能障碍 ,这些异常可能参与了房颤患者血栓的形成。     

血小板膜糖蛋白IαC807T基因多态性与非致命性心肌梗死的相关性

目的 :探讨血小板膜糖蛋白 (GP)IαC80 7T基因多态性与非致命性心肌梗死危险性之间相关性 .方法 :采用病例 对照研究 ,包括 10 0例心肌梗死患者及 110例具有相同民族的对照人群 ;采用等位基因特异性多聚酶链式反应对GPIαC80 7T基因多态性进行检测 .结果 :在年龄小于 6 0岁的非致命性心肌梗死患者中 ,GPIαT80 7为其一独立的危险因素 (OR值 =2 .4 9,P <0 .0 5 ) ;在年龄大于 6 0岁患者中 ,高血压是一个独立的危险因素 ;高密度脂蛋白胆固醇是心肌梗死一个保护因素 .结论 :血小板表面胶原受体GPIα IIαT80 7等位基因可能对血栓性疾病的发病具有重要作用     

活化血小板葡萄糖摄取及血小板膜整合素对其的影响

目的 :了解活化血小板葡萄糖摄取过程及血小板膜整合素对其影响 ,探讨整合素与血小板能量代谢的关系 ,旨在研究血小板能量代谢涉及的信号传导 ,并为目前临床应用血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa(GPⅡb/Ⅲa)单抗抗血小板活化提供新的理论依据。方法 :用液态闪烁计数方法检测在血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa单抗 10E5及血小板整合素αυβ3 单抗 6 0 9干预与否情况下凝血酶激活后血小板摄取氚标 2 脱氧葡萄糖 ([3 H]2 DG)率。结果 :在生理浓度范围内活化血小板 [3 H]2 DG摄取率较静息时明显升高 ,单抗 10E5可充分阻断活化血小板葡萄糖摄取 ,单抗 6 0 9可部分阻断。结论 :整合素家族单抗可抑制血小板激活后葡萄糖摄取 ,提示其可能参与血小板能量代谢信号传导过程 ,并可能以GPⅡb/Ⅲa为主     

基质辅助激光解吸离子化飞行时间质谱法测定重组人促红细胞生成素

采用基质辅助激光解吸离子化飞行时间质谱法（ＭＡＬＤＩ／ＴＯＦＭＳ）准确测定了基因工程人促红细胞生成素（ｒｈＥＰＯ）的分子量、纯度、糖基化程度和胰酶消解肽图；提出了以ＭＡＬＤＩ／ＴＯＦ质谱峰半峰宽作为判断不均一程度的指标。初步研究了ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ／ＭＳ基质种类和浓度对测定的影响。     

血液肿瘤P—糖蛋白表达的初步研究

采用ＰＨＭＡＯ２单克隆抗体及细胞免疫化学法检测５４例血液肿瘤患者Ｐ－糖蛋白（Ｐ－ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ，Ｐｇｐ）表达情况，以了解Ｐｇｐ这一多药耐药指标在临床上的意义。Ｐｇｐ表达与临床疗效的阳性符合率８９．４７％，阴性符合率９１．４３％，总符合率达９０．７４％。其中５０岁以上及反复化疗后的患者Ｐｇｐ阳性率显著增高（Ｐ＜０．０２；Ｐ＜０．００１）。慢性粒细胞白血病急变，骨髓增生异常综合征转化的白血病及急性非淋巴细胞性白血病Ｍ４亚型这几种类型血液肿瘤Ｐｇｐ出现高表达。提示Ｐｇｐ表达在判断血液肿瘤患者的疗效、预后以及指导治疗等方面具有一定意义