C2株蓝氏贾第鞭毛虫SUMO特异性蛋白酶基因的克隆、生物信息学分析及其催化活性区的原核表达

目的 克隆C2株蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia,简称贾第虫)的SUMO-Specific Protease(SENP)基因,并对其序列进行生物信息学分析,原核表达贾第虫SENP的催化活性区。方法 提取C2株贾第虫基因组DNA,以基因组DNA为模板获得SENP编码区全长片段,连入克隆载体pGM-T,测序后进行生物信息学分析;根据分析结果克隆SENP的催化活性区,构建其原核表达载体pET-28a(+)-SENPc,在E.coli Rosetta(DE3)中诱导表达,SDS-PAGE及Western blot观察表达结果。结果 成功克隆了C2株贾第虫SENP编码区全长序列,生物信息学分析显示C2株贾第虫SENP蛋白序列与WB株相同,二级结构以无规则卷曲为主,其催化活性区位于126-497aa,被一段插入序列分割成两个部分;构建了SENP催化活性区原核表达载体并在大肠杆菌中高效表达,在相对分子量约43 kD的位置出现目的 蛋白条带,与理论值相符。结论 成功克隆了贾第虫SENP基因并原核表达了其催化活性区,为贾第虫SENP蛋白功能的研究提供了基础。     

姜春华治疗慢性肾炎的经验

姜春华老师治疗慢性肾炎,以中医辨证为主,参考实验室指标,病证结合,揆度邪正,创用新法,巧裁效方,疗效显著。现整理其治法5则,并附验案,以公同好。     

志谢

<正>~~     

C2株蓝氏贾第鞭毛虫组蛋白H3基因的克隆表达与基因分析

目的 克隆表达C2株蓝氏贾第鞭毛虫H3组蛋白基因,与WB株蓝氏贾第鞭毛虫进行同源分析,构建C2株蓝氏贾第鞭毛虫H3组蛋白分子进化树。方法 PCR扩增获取H3组蛋白基因,构建pGM-T-H3重组载体,转化E. coli TOP10感受态宿主细胞,挑选阳性克隆并进行序列分析,利用限制性内切酶NcoⅠ和 XhoⅠ构建pET28a(+)-H3重组载体,转化E. coli Rosetta( DE3),IPTG诱导组蛋白H3表达,Western blotting鉴定表达,与美国WB株蓝氏贾第鞭毛虫及模式生物H3组蛋白基因和蛋白序列进行同源分析。结果 成功克隆表达C2株蓝氏贾第鞭毛虫H3组蛋白基因,同源比对结果显示C2株蓝氏贾第鞭毛虫基因序列与美国WB株完全一致,但与其他现存真核生物亲缘关系较为疏远。结论 C2株蓝氏贾第鞭毛虫H3组蛋白分子进化树分析表明贾第虫H3组蛋白基因在进化过程中与其他物种分化较早,本研究结果为进一步研究蓝氏贾第鞭毛虫的生物进化地位提供有价值的实验资料。     

蓝氏贾第鞭毛虫的免疫逃避机制

蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia,简称贾第虫)是一种世界性分布的机会性致病原虫,能够引起以腹泻为主要表现的贾第虫病,严重影响人类尤其是儿童的健康和发育。在贾第虫感染过程中,宿主的非特异性和特异性免疫系统均会产生强烈的抗贾第虫效应,但贾第虫通过抗原漂变、L-精氨酸饥饿等机制逃避和抑制宿主的免疫反应,引起宿主的长期或反复感染。本文对宿主的抗贾第虫免疫以及贾第虫的免疫逃避机制做一综述。     

贾第虫病免疫学诊断方法及其应用研究进展

蓝氏贾第鞭毛虫(简称贾第虫)是一种重要的肠道致病原虫,人体感染后可引起腹泻等症状。目前,贾第虫感染诊断主要有病原学、免疫学及分子生物学等方法;其中免疫学诊断技术因快速、简便、敏感性高、特异性强等优点,具有良好的应用前景。本文主要就常用贾第虫感染免疫学诊断技术及其应用情况作一综述。     

隐孢子虫抗原和蓝氏贾第鞭毛虫抗原的快速检测方法及临床应用

目的 介绍一种可同时检测隐孢子虫抗原和蓝氏贾第鞭毛虫抗原的快速方法以便及早确诊病人腹泻原因,从而为临床提供良好的治疗依据.同时通过参加CAP能力比对试验对该方法进行了评价.方法 采用美国Meridian诊断试剂公司生产的Immuno Card STAT Crypto/Giardia试剂盒,对2 344份腹泻病人粪便标本进行隐孢子虫抗原和蓝氏贾第鞭毛虫抗原检测.所有标本均按标准方法采集并立即送往实验室按照标准操作规程进行测定.为评价该试剂质量,采用该试剂参加美国CAP能力比对试验,共比对了26份质控标本.结果 2 344例腹泻病人粪便标本中,隐孢子虫抗原阳性率为1.28%（30/2 344）;蓝氏贾第鞭毛虫抗原阳性率为1.58%（37/2 344）.63.3%（19/30）阳性隐孢子虫标本和73%（27/37）阳性蓝氏贾第鞭毛虫标本集中在夏秋季.隐孢子虫抗原阳性和蓝氏贾第鞭毛虫抗原阳性的病人主要分布在18～60岁青壮年,分别占70%（21/30）和73%（27/37）. 26份CAP质控标本中隐孢子虫抗原和蓝氏贾第鞭毛虫抗原阳性各7份,阴性各19份.采用该试剂盒检测所有质控标本两种抗原结果均与预期结果一致,没有出现一例假阳性或假阴性,灵敏度和特异度均为100%.结论 采用美国Meridian公司生产的快速免疫层析法试剂盒检测隐孢子虫抗原和蓝氏贾第鞭毛虫15 min内,可同时确定标本中是否有蓝氏贾第鞭毛虫或隐孢子虫两种病原体,有利于疾病的早期诊断、治疗和预防,防止社区/区域性流行.     

深圳市村镇级水厂水源水中隐孢子虫和贾第鞭毛虫调查

目的调查深圳市村镇级水厂水源水中贾第鞭毛虫和隐孢子虫污染情况,评价小型供水的生物安全性,并为制订我国饮用水原虫卫生标准提供依据。方法采集深圳市供水规模0.5～5×104t的8家村镇级水厂的水源水,应用美国环保局(EPA)的标准检测方法,水样经抽滤、淘洗、磁分离、染色鉴定等步骤检测其贾第鞭毛虫包囊和隐孢子虫卵囊含量。结果深圳市8家村镇水厂中,有6家水厂的水源水检出贾第鞭毛虫包囊眼0.05～0.65个/L(1～13个/20L)演,1家水厂的水源水检出隐孢子虫卵囊眼0.1个/L(2个/20L)演。结论目前,深圳市村镇级水厂水源水存在原虫污染,在处理工艺不完善的情况下存在介水疾病传播的可能。     

蜀贾卖药

四川有三个商人,都在市场上卖药.其中一个人专门选取上等好药,计算着自己的收入出售药材,不说虚假的价钱,也不过分赚钱.另一个人好药次药都选取.药价的贵贱,只看买者的需求,从而拿好药或次药来对待顾客.又一个人不选取好药,只希望多卖,就降低药价,顾客要求增添就给增添,不加计较.于是顾客争着到他店铺来,他店铺的门槛,每月就得更换一次,一年多就大富起来.那个好药次药都选取的人,去他的店铺的人就少一些,但两年之后也富起来了.     

贾第虫病的实验室诊断

贾第虫(Giardia)是一种鞭毛虫,由列文*虎克(Leeuwenhoek)发现于1681年,作为人类一种重要的病原体,贾第虫直至最近40年才被认识[1].贾第虫目前发现存在于40多种动物体内,虽然它的分类还存在争议,但多数学者认为贾第虫分为三大类.其中的蓝氏贾第虫(Giardia lamblia)又称十二指肠贾第虫(G.duodenalis)或小肠贾第虫(G.intestinalis),主要寄生于人类和哺乳动物的小肠,可引起以腹痛、腹泻、吸收不良为临床表现的肠道寄生虫病--贾第虫病[2](giardiasis).