靶向XIAP的shRNA重组质粒的构建

目的:设计以X染色体连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)为靶向的shRNA,构建携带此shRNA的重组质粒,检测其抑制XIAP表达的效应,筛选RNA干扰作用最强的shRNA片段.方法:设计4对针对XIAP基因不同位点的shRNA片段,构建携带此shRNA片段的真核表达载体psiRNA-Hhneo-XIAP,通过脂质体介导的方法将重组质粒转染到肝癌细胞株HepG2细胞中.采用逆转录酶链式反应(RT-PCR)及蛋白印迹(Western blotting)方法检测XIAP的mRNA及蛋白表达情况,比较转染前后其表达差异,以判断各shRNA的干扰效应.结果:成功构建含shRNA片段的重组质粒.经质粒测序证实,插入的DNA片段的序列与设计序列完全一致.重组质粒转染HepG2细胞后,XIAP基因的mRNA水平及蛋白表达水平明显下调,其中以1号重组质粒效应最强.shRNA作用48h后,对HepG2细胞中XIAP mRNA和蛋白的抑制率与3,4号重组质粒相比,均具有显著性差异(mRNA:94.5% vs 81.5%,82.6%,均P<0.01:蛋白:92.6% vs 80.7%,82.9%,均P<0.01).结论:成功构建了携带以XIAP为靶向的shRNA的重组质粒,其对肝癌细胞内XIAP的表达具有显著抑制效应.X染色体连锁凋亡抑制蛋白;;短发夹状RNA;;肝癌;;逆转录聚合酶链式反应;;免疫蛋白印迹     

丙戊酸钠诱导人结肠癌细胞HT-29自噬及其机制研究

目的对丙戊酸钠诱导人结肠癌细胞HT-29发生自噬性死亡的过程进行观察,并初步探讨其可能的机制。方法用不同浓度、不同作用时间的丙戊酸钠处理人结肠癌细胞系HT-29,用细胞计数试剂盒CCK8法观察其对细胞增殖的抑制作用,丹酰戊二胺染色法观察细胞自噬,荧光测试仪检测自噬水平,荧光定量PCR法检测以下基因表达水平的变化：微管相关蛋白轻链3Ⅱ（LC3-Ⅱ）、自噬相关基因Beclin-1、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）和磷酸化核糖体蛋白S6激酶（p-p70S6K）。结果随着丙戊酸钠处理浓度的递增及作用时间的延长,其对人结肠癌细胞HT-29的增殖抑制率逐渐提高,呈剂量依赖性及时间依赖性（P均﹤0.01）;同时,随着药物浓度的增加,细胞中自噬泡数量增多,荧光强度增强,与对照组比较,差异有统计学意义（P均〈0.05）。经丙戊酸钠处理后,自2 mmol/L浓度始,人结肠癌细胞系HT-29自噬相关基因LC3-Ⅱ和Beclin-1表达水平明显升高（P均〈0.01）,而mTOR、p-Akt和p-p70S6K表达水平明显降低（P均〈0.01）。结论丙戊酸钠可诱导结肠癌细胞发生自噬,其诱导结肠癌细胞发生自噬的机制可能与阻断mTOR-Akt信号转导通路及激活Beclin-1信号转导通路有关。     

鲨骨精抗黑色素瘤肺转移及调节免疫功能的研究

鲨骨精(shark cartilage active extract．SCAE)是鲨鱼软骨提取物。本项研究评价其抗黑色素瘤B16肺脏转移及调节机体免疫功能的作用。小鼠口服SACE后d7，经尾静脉注射黑色素细胞瘤B16细胞悬液；3w后计数黑色素瘤肺脏转移结节，测定脾细胞的免症功能。结果表明，SCAE能抑制黑色素瘤B16肺转移，抑制率为33%能提高脾脏有核细胞总数、淋巴细胞增殖能力和LAK细胞活性。证实了SCAE能抑制黑色素癌转移及提高机体免疫功能。     

黄芪健中汤加减方对大白鼠胃溃疡疗效的实验研究

采用中药黄芪健中汤治疗小白鼠实验性醋酸型胃溃疡模型的抑制率，结果其溃疡抑制率为86．05％。     

香蕉粉抗胃溃疡作用的实验研究

大鼠灌胃６ｇ／ｋｇ香蕉粉对应激性和消炎胃溃疡模型有良好的保护作用，其溃疡抑制率分别为５０％，３８％。对乙酸法慢性胃溃疡模型有明显促进愈合作用，其溃疡抑制率为７２％，香蕉粉抗溃疡作用的机理可能与香蕉粉含有多巴胺类物质有关。     

人红细胞钠泵活性及大黄浸液对其影响

用(86)~Rb~ 摄入法测定了70例健康人红细胞钠泵活性和大黄浸液对其抑制作用。结果:70例健康人红细胞钠泵活性为0.449±0.007mmol/L RBC·h。大黄浸液浓度lO~(-1)mg/ml 时。表现出抑制作用,抑制率为1.1%;浓度10~2mg/ml 时,抑制率达100%。还对大黄抑制钠泵与其药性作用关系进行了探讨。     

苦参生物硷抗小鼠移植性肿瘤的实验研究

中药苦参又名地槐、野槐、牛参等,为豆科原植物苦参(Sophora Flavescens Ait)的干燥根。我国大部地区均有分布,是传统药材之一。东汉时期的名著《神农本草经》中记述:"苦参性苦、寒","主心腹结气,癥瘕积聚"。具有"燥湿、解毒"之功能。因此,我们根据山西野生苦参资源丰富的特点,将原植物苦参分离、纯制而得到的苦参硷(Matrine),脱氢苦参硷     

抑制剂对酪氨酸酶影响的初步研究

采用酶动力学及聚丙烯酰胺凝胶电永方法研究了NaHSOa、NaN3、KSCN、DDC对酪氨酸酶的抑制作用。NaHSO3、NaN3、KSCN为非竞争性抑制作用．随着抑制剂浓度增加，酶活性逐渐减弱。当NaHSO3、NaN3、KSCN的浓度分别达到1．2mmol/L、12．5mmol／L、12．5mmol／L时．酶活性的抑制率为100%、50％、24%。DDC对酪氨酸酶的抑制作用为竞争性抑制作用，其浓度达4mmol／L时，酶活性100%受到抑制。     

注射用丹参(冻干)抗人血小板聚集标准研究

目的以确定注射用丹参(冻干)对血小板聚集抑制率的限度标准为目的 ,确定血小板聚集率指标符合生产和临床实际。方法采集人血进行初步处理,将测定样品制成适宜浓度的溶液,将适宜用量的样品溶液和人血混合后测定血小板聚集率,计算其血小板聚集抑制率。进行重复性试验和重现性试验,确定血小板聚集抑制率限度标准。结果本实验的注射用丹参(冻干)对血小板聚集抑制率限度标准的下限为25.1±9.2。结论该试验提供的方法可行,可以确定小板聚集抑制率的限度标准。