兔自体细胞-载体复合物修复关节软骨缺损的实验研究

目的 研究兔MSCs向软骨细胞方向诱导后复合自体双相骨基质明胶(bone matrix gelatin,BMG)对膝关节软骨缺损的修复作用.方法 健康成年新西兰大白兔24只,雌雄不限,体重2～3 kg,随机分为A、B、C组,每组8只.取A组骨髓行原代培养,胰酶消化按12比例传至第5代,倒置相差显微镜观察细胞形态.取1、3、5代细胞绘制生长曲线.于第3代MSCs生长密集时加入TGF-a1 10 ng/mL、IGF-1 10 ng/mL、维生素C 50 ng/mL诱导8 d后倒置相差显微镜下观察,爬片行免疫组织化学及Mallory染色.取A组髂骨按Urist方法 制备双相BMG,将第3代经诱导8 d得到的种子细胞以5 X 106/mL密度接种于自体BMG制备细胞.载体复合物,体外培养3 d后扫描电镜观察.制作膝关节软骨直径3 mm,深3 mm的缺损模型,A组植入自体细胞.载体复合物,B组植入自体BMG,C组不作处理,第8、12周取材行大体观察、HE染色、免疫组织化学染色观察,Wakitani法组织学评分.结果 倒置相差显微镜观察MSCs原代细胞呈短梭形;传代细胞呈长梭形.传代细胞1～3 d增殖缓慢,3 d后增殖旺盛,7～8 d进入平台期,第3代增殖最为旺盛.诱导后MSCs细胞呈椭圆形,Ⅱ型胶原、S-100免疫组织化学染色阳性,Mallory染色胞浆蓝染.细胞-载体复合物扫描电镜观察BMG结构符合细胞载体要求,细胞种植于BMG后生长良好.动物实验大体观察A组术后8、12周缺损处均由透明软骨样组织修复,8周较12周表面稍凹陷;B、C组术后8、12周均为纤维样组织修复,表面凹凸不平.组织学观察HE染色A组术后8、12周修复组织与周围软骨组织结合良好,以圆形、椭圆形透明软骨样细胞为主,12周较8周细胞数多且大B、C组均为纤维样组织修复,12周较8周纤维样组织增厚.Ⅱ型胶原免疫组织化学染色A组术后8周呈阳性、12周呈强阳性;B、C组均无表达.Wakitani评分术后8周A、B、C组分别为(3.50±1.51)、(10.00±1.41)、(12.00±0.93)分,术后12周分别为(1.13±0.99)、(8.38±1.30)、(10.13±1.64)分,A组优于B、C组,B组优于C组,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 自体MSCs向软骨细胞方向诱导后,复合自体BMG对关节软骨缺损有较好的修复作用.     

血浆制剂在儿科临床的应用——儿科疾病(16)

1 引言 血浆制品是指用一定的方法将健康人血浆的主要成分制备成的各种制剂,供临床按需选用,一般多用于出血性疾病的替代治疗,从而达到止血作用.目前临床常用的血浆制剂有新鲜冰冻血浆、新鲜液体血浆、冷沉淀物、因子Ⅷ浓缩制剂、因子Ⅸ浓缩制剂、凝血酶原复合物浓缩制剂、猪因子Ⅷ浓缩制剂、抗凝血酶Ⅲ浓缩制剂、白蛋白制剂等9种.     

发挥中西医结合优势 提高IgA肾病的临床疗效

慢性肾脏病已经成为威胁全世界公共健康的主要疾病之一。IgA肾病是我国最常见的原发性肾小球疾病,占30％～40％,临床表现多以血尿、蛋白尿为主,肾脏病理以系膜细胞和基质增生,以IgA为主的免疫复合物沉积于系膜区为特征,病程迁延,为慢性肾衰的主要原因之一,因此对IgA肾病采取积极有效的治疗,延缓其发展具有重要的意义。     

IgA肾病中西医诊疗进展和体会

IgA肾病（IgA nephropathy,IgAN）是一种系膜增生性肾小球肾炎,其特征是以IgA或IgA为主的免疫复合物在肾小球系膜区沉积的一类肾小球疾病,是导致终末期肾衰竭的一个主要原因。发病率占原发性肾小球疾病的30％～40％。本病可见于任何年龄,常见于青壮年,男女比例为2：1。     

结直癌组织中GP-96肽复合物的提取纯化和体外免疫效应

目的 建立从人结直癌组织中提取gp-96肽复合物方法,并检测体外免疫效应.方法 采取三步蛋白纯化法,即硫酸铵沉淀法、ConA亲和层析法、阴离子交换蛋白亲和层析法,从10例结直癌组织提取、纯化gp-96肽复合物;SDS-PAGE和Western blot鉴定gp-96肽复合物;检测GP-96肽复合物的体外免疫效应.结果 该方法提取的蛋白质经SDS-PAGE和Western blot鉴定,证实是gp-96肽复合物,蛋白质得率为50μg/g;体外免疫效应分析:肿瘤组中gp96肽复合物组肿瘤坏死因子(TNF)-α浓度为(801.54±109.25)ng/L,与阳性对照组(509.17±65.34)ng/L、阴性对照组(156.19±32.08)ng/L比较明显升高,差异有统计学意义(P<0.01);健康人对照组与肿瘤组比较,gp96肽复合物组比较差异有统计学意义(P<0.01).肿瘤组中gp96肽复合物组IL-10浓度为(95.71±17.55)ng/L,与阳性对照组(334.55±69.00)ng/L、阴性对照组(205.75±42.04)ng/L比较,差异有统计学意义(P<0.01);健康人对照组和肿瘤组比较,sp96肽复合物组比较差异有统计学意义(P<0.01).结论 使用该方法提取结直癌组织中gp-96肽复合物具有操作简单、重复性好、获得率高、体外免疫效应强等特点.     

蔗糖铁联合大剂量红细胞生成素对血液透析患者肾性贫血的疗效观察

目的比较静脉补铁与口服补铁分别联合应用大剂量基因重组人红细胞生成素治疗维持血液透析患者贫血的疗效,探讨血液透析患者的补铁途径和方法。方法选择55例慢性肾功不全的血透患者,试验前检查每位患者的血红蛋白(Hb)、红细胞比容(Hct)、血清铁蛋白(SF)、转铁蛋白饱和度(TS)。将患者随机分为静脉补铁组(27例)和口服补铁组(28例),静脉补铁组予以氢氧化铁蔗糖复合物注射液100 mg每周一次,共10次;口服补铁组口服维铁控释片525 mg,每日2次,共10周。两组均予以EPO 10 000单位/周,皮下注射。4、8、10周后复查上述指标。结果试验结束时,静脉补铁组各项铁参数指标明显高于口服补铁组;静脉补铁组贫血改善较口服服补铁组好,两组Hb和Hct上升有明显差异。结论在使用EPO的同时,静脉补铁较口服补铁能更快、更好地改善肾性贫血。     

慢病毒介导RNA干扰Cdh1的表达对大鼠脊髓损伤的修复作用

目的：观察大鼠脊髓损伤后皮层体感运动区Cdh1 mRNA的表达变化,探讨慢病毒介导RNA干扰Cdh1的表达对脊髓损伤修复的作用．方法：15只雄性SD大鼠随机分成对照组和手术组,手术组采用Allen氏法建立脊髓打击损伤模型（T10-T11）．荧光定量PCR检测脊髓损伤后大鼠体感运动皮层区Cdh1 mRNA表达变化．30只雄性SD大鼠随机分为A组、B组和C组,建模1wk时分别注射生理盐水、空慢病毒和重组慢病毒．术后每周进行BBB评分,荧光定量PCR检测注射10d后Cdh1 mRNA的表达,损伤后6wk同法注射BDA．TR,8wk取脊髓冰冻切片．结果：手术组的Cdh1 mRNA表达高于对照组（P〈0．05）,注射药物10d后C组Cdh1 mRNA表达低于A组及B组（P〈0．05）．损伤6wk后C组运动功能评分均高于另两组（P〈0．05）,且在脊髓空洞区可见更多神经纤维通过．结论：APC—Cdh1在抑制轴突生长方面可能起着重要的作用．     

多西环素对脂多糖-帕金森病模型大鼠多巴胺能神经元的保护作用

目的 探讨多西环素对脂多糖(LPS)-帕金森病(PD)模型大鼠多巴胺能神经元的保护作用及其机制.方法 动物随机分为3组:正常对照组、LPS组和多西环素干预组;采用LPS黑质内立体定向注射建立PD模型;免疫组化染色法观察多西环素干预前后黑质多巴胺能神经元和MHCⅡ阳性小胶质细胞的变化;高效液相色谱-电化学检测仪检测纹状体多巴胺(DA)、DOPAC(二羟苯乙酸)含量的变化;Western 印迹检测黑质小胶质细胞MHCⅡ(主要组织相容性复合物Ⅱ)蛋白的表达.结果 多西环素干预后,黑质残存多巴胺神经元由LPS组的38%±5%上升到79%±4%(P<0.01);纹状体DA及DOPAC含量分别由LPS组的4.89±0.27和0.70±0.07上升到7.00±0.34和1.10±0.10(P<0.01);腹腔注射阿朴吗啡诱导动物旋转的平均圈数由LPS组的(208±14)次/30 min减少到(80±12)次/30 min(P<0.01);而黑质致密部MHCⅡ阳性细胞数量由LPS组的835±82减少到354±59(P<0.01);Western 印迹检测MHCⅡ蛋白的表达也明显减少.结论 多西环素能够抑制LPS诱导的黑质多巴胺能神经元变性,它可以通过下调小胶质细胞MHCⅡ的表达来实现其神经保护作用.     

抗氧化低密度脂蛋白自身抗体与冠心病的关系

目的:研究抗氧化低密度脂蛋白自身抗体对冠心病发病的影响.方法:对稳定型心绞痛(SAP组,30例)、不稳定型心绞痛(UAP组,32例)、急性心肌梗死(AMI组,28例)和对照组(38例)采用7%聚乙二醇(PEG6000)沉淀法分离血清中抗氧化低密度脂蛋白免疫复合物(OX-LDL-IC).建立抗氧化低密度脂蛋白自身抗体酶联免疫测定方法,同时测定氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)、血清上清中游离的OX-LDL-Ab和沉淀里OX-LDL-IC的OX-LDL-Ab.结果:氧化低密度脂蛋白组OX-LDL、游离OX-LDL-Ab以及OX-LDL-IC水平及其阳性率均高于对照组(P<0.01);AMI组游离OX-LDL-Ab和OX-LDL-IC水平及其阳性率均高于SAP组和UAP组(P<0.05);SAP组和UAP组OX-LDL和OX-LDL-Ab水平及其阳性率差异无统计学意义(P>0.05),而OX-LDL-IC的水平及其阳性率UAP组比SAP组增高(P<0.05).结论:检测患者OX-LDL-IC比单纯测定游离OX-LDL-Ab能更好地判定冠心病病变的严重程度,指导临床治疗.     

关节镜下应用骨-髌腱-骨复合物重建舰艇官兵膝前交叉韧带

前交叉韧带（anterior cruciate ligament,ACL）损伤在舰艇官兵中发病率很高,且有上升趋势,严重影响官兵的训练及生活质量。随着医疗水平的提高,尤其是关节镜技术的成熟,关节镜下ACL重建已替代原有切开手术ACL重建,提高了患者的治愈率,减少了致残率[2]。2005—08／2008-08月作者医院在关节镜下应用中1／3骨-髌腱-骨复合物重建ACL共46例,取得了良好的效果。