MRP3基因参与卵巢癌细胞拓扑替康耐药机制形成的研究

目的:分析人卵巢癌SKOV3/TPT多药耐药的分子机制,寻找可能参与拓扑替康(TPT)耐药机制的新基因。方法:采用大剂量间歇诱导法,对SKOV3细胞株用TPT反复冲击诱导培养,获得稳定的SKOV3/TPT;利用Affymetrix U133A基因表达谱芯片,比较SKOV3及SKOV3/TPT细胞的基因表达;从中选择高表达的MRP3基因进行RT-PCR验证。再将MRP3反义及正义寡核苷酸片段分别用脂质体转染进耐药细胞,用MTT法、流式细胞仪及半定量RT-PCR检测体外转染后细胞内TPT的荧光强度、耐药指数及MRP3 mRNA表达的改变。结果:基因芯片检测发现,有7个差异表达基因可能参与了SKOV3/TPT细胞的耐药,其中4个基因被上调,3个基因被下调,MRP3为上调最明显的基因。MRP3反义寡核苷酸转染SKOV3/TPT细胞后,可明显降低细胞内TPT的浓度及耐药指数(P<0.05),细胞内MRP3 mRNA的表达较未转染细胞下降了60.16%(P<0.05)。结论:SKOV3/TPT细胞耐药表型的形成涉及多个基因表达的改变。MRP3的高表达导致细胞内药物浓度降低,可能是卵巢癌细胞对TPT耐药的主要原因。     

出入境人员3种蚊媒病毒性传染病快速检测基因芯片的研究项目设计

流行性乙型脑炎、登革热、西尼罗热是3种重要的蚊媒病毒性传染病。近年来这3种传染病的流行态势日益严峻,引起了全球世界的广泛关注。快速识别病原微生物是目前检验检疫机构在国境口岸对出入境人员实施卫生检疫时所亟需解决的问题,近年来出现的生物芯片技术解决这一问题成为可能。本研究其目的在于用基因芯片检测多种蚊媒病毒性传染病的病原体,可实现大规模集成化的快速检验,从而适应对国境口岸出入境人员卫生检疫的需要。     

基因芯片筛选同时参与肺腺癌不同癌变进程的分子靶标

目的 探讨同时参与肺腺癌不同癌变进程的基因群，以期进一步筛选出肺腺癌的分子靶标。方法 选取术后临床分期为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期的肺腺癌组织标本共10例为实验组，相应的癌旁组织10例为对照组。与含13824个基因的基因芯片进行杂交，最后结合分期和临床预后对海量数据进行数据挖掘。在不同分期及不同预后的标本中均差异表达的基因即为入选基因。结果 10例肺腺癌标本共差异表达基因119条，其中，含已报道与肺癌相关的基因26条，尚未报道与肺癌相关的基因46条，完全未知功能的新基因47条。结论 119条基因是肺腺癌发生、发展过程中的重要分子标记，是肺腺癌分子靶的候选基因。     

碳酸缓冲液对光气损伤大鼠AT-Ⅱ细胞基因表达的影响

目的观察碳酸缓冲液干预对光气染毒后大鼠AT-Ⅱ细胞基因表达的影响,以深入探讨其作用的分子机制.方法分别抽提正常组、损伤组及干预组AT-Ⅱ细胞总RNA,通过逆转录方法,进行荧光标记后,制备成cDNA探针,与表达谱芯片进行杂交及扫描测定,通过计算机进行数据处理、基因库对比并筛选出差异表达基因.结果经碳酸缓冲液干预后,筛选出的差异表达基因数由单纯损伤组的161条降低到了115条,且大部分与肺损伤相关基因的异常表达均得到了抑制,并出现了新的差异基因.结论碳酸缓冲液在干预光气中毒中具有一定的保护作用,为探讨光气中毒和临床治疗机制提供了新的思路.     

超保守区非编码RNA在银屑病外周血单个核细胞中差异表达的初步研究

目的:用高通量Arraystar T-UCR芯片研究超保守区非编码RNA(T-UCR)在银屑病外周血单个核细胞(PBMC)中的差异表达谱。方法:抽取7例寻常型银屑病患者及3例正常人的外周血,分离PBMC后提取总RNA,将总RNA纯化,转录合成荧光标记的cRNA,cRNA样本片段化后与芯片杂交,使用Agilent G2505C芯片扫描仪扫描芯片,配合数据处理软件读取、处理数据,筛选出1.5倍及以上差异表达基因。结果:共有109种已知T-UCR在PBMC中表达,银屑病组与健康对照组相比,有5个T-UCR呈共同差异表达,其中上调1个,下调4个;有2 043种可能是新的T-UCR在PBMC中表达,共182种呈共同差异表达,其中上调100个,下调82个;与UCR区域重叠的mRNAs和UCR邻近基因分别有232个和67个表达有差异,Gene Ontology分析发现在参与细胞生理过程的36个差异表达的与UCR区域重叠的mRNAs中,有5个参与T细胞免疫活性相关的生物过程,例如T细胞活化、免疫反应中T细胞的分化等。结论:T-UCR可能参与寻常型银屑病的发病。     

基因芯片技术检测方法对耐多药肺结核治疗的指导价值研究

目的探讨基因芯片技术在肺结核耐药检测中的应用及指导临床治疗的价值。方法河北省胸科医院结核科住院的83位复治菌阳肺结核患者为选例对象,根据既往药敏试验结果,择符合条件的56例耐多药肺结核患者作为研究对象,随机分为基因芯片组24例根据基因芯片检测结果制定抗结核化疗方案,常规药敏组32例根据常规药敏试验结果制定抗结核化疗方案,观察评价两组在治疗后痰菌阴转情况及肺部病灶吸收情况。结果痰菌阴转情况基因芯片组58.3%(14/24),常规药敏组53.2%(17/32),基因芯片组略高于常规药敏组,组间相比无显著性差异(P0.05);X线肺部病灶吸收情况基因芯片组45.9%(11/24),常规药敏组43.8%(14/32),组间相比无显著性差异(P0.05)。结论基因芯片技术快速准确,可用于肺结核的耐药检测,指导临床用药。     

基于随机聚合酶链反应的病原菌基因芯片检测技术

目的建立一种基于随机聚合酶链反应的病原细菌基因芯片筛查检测技术。方法用生物学软件分析7种病原菌特异性基因序列的保守性区域,利用Oligo 6.0软件设计针对靶细菌的一系列探针,制备检测用基因芯片。细菌基因组DNA在随机引物扩增中掺入氨基丙烯-dUTP,产物偶联荧光染料后与芯片上探针杂交,通过芯片扫描仪和图像分析软件对结果进行判断。选取19种病原菌基因组DNA进行芯片特异性验证和灵敏度评价,使用问号钩端螺旋体对应靶探针进行基因芯片检测方法重复性验证,并制备问号钩端螺旋体模拟水污染样本进行芯片检测。结果在均一的杂交条件下4种靶细菌均能得到相应特异性杂交图谱,其他非目的细菌均为阴性结果,3种靶细菌基因组DNA最低检测浓度为14.43～363.4 pg/μl,芯片重复性变异系数CV值〈15%,最低可检测含问号钩端螺旋体7×105条/ml模拟水污染样本。结论初步建立的随机聚合酶链反应结合芯片技术的检测方法可用于多种病原菌筛查检测,为细菌高通量筛查与鉴定技术提供了新的思路和实验依据。     

基因芯片技术在心血管疾病研究中的应用

<正>基因芯片(Gene chip)也被称之为DNA阵列(DNA array)。基因芯片技术被誉为继大规模集成电路后又一次意义深远的科技革命[1]。目前,国内外多家提供基因芯片的知名公司不断开发提供了多种先进的基因芯片,如寡核苷酸芯片(Oligo芯片),mRNA表达谱芯片、miRNA芯片、DMET芯片、Cytogenetics芯片等,涉及基因表达、miRNA、药物代谢和染色体遗传分析等多个研究领域,促进了转化医学的发展。目前,越来越多的实验室开始将这项技术应用到心血管研究领域,并取得了不小的进展。本文主要对基因芯片技术在心血管系统研究应用进行综述。