肝细胞的低温保存及应用研究进展

随着生物人工肝和肝细胞移植研究的开展，对肝细胞的需求不断增加，迫切需要有效的肝细胞长期保存方法以促进其在临床上的应用。低温保存是目前保存肝细胞的重要方法，其影响因素较多，主要有低温保存肝细胞的形式冻存液的组成、降温、复温速度，复苏肝细胞的功能检测及应用范围等。本对国内外该方面的最新进展进行踪述。     

卵巢组织冻存方案的优化研究进展

随着肿瘤治疗技术的提高,保护女性生育力逐渐引起了人们的关注。胚胎冷冻技术在各大生殖中心的运用使女性患者一定程度获益,但胚胎冷冻应用的局限性使卵巢组织冷冻成为研究的热点,而冷冻方法的研究成为第一难题。目前针对卵巢组织块的冷冻方法主要包括慢速程序化冷冻和玻璃化冷冻。相比卵巢组织块的冷冻方法,定向冷冻的应用在整个卵巢冷冻中更有优势。定向冷冻能使整个卵巢的冷却速度保持一致,从而降低整个卵巢在冷冻过程中的损伤。不同的冷冻方法对卵巢组织冷冻和(或)解冻移植后功能恢复的影响程度不同,因此寻找合适的冷冻方法对保证最佳冻存效率有着重要的意义。综述近期优化的卵巢组织冻存方案,为临床应用提供参考。     

低温保存猪肝细胞异种移植治疗急性肝衰机理的探讨

目的低温可以降低移植组织细胞的免疫原性，本文将探讨低温对猪肝细胞膜蛋白结构的影响及其细胞移植治疗大白鼠急性肝衰的机理．方法将分离的猪肝细胞在液氮中冻存１５０ｄ后移植入大鼠腹腔内，３ｄ后，切除该鼠的８０％肝叶，并测定猪肝细胞膜蛋白的构象以及鼠肝功能和肝重量．结果冻存肝细胞存活率为冻前７８％，光、电镜显示细胞完整，细胞内糖原和葡萄糖６磷酸酶丰富．新鲜肝细胞膜蛋白构象，α螺旋为４８％，经低温处，其α螺旋增至５９５％．移植组鼠的存活率为１６／１７，明显高于对照组３／９，Ｐ＝０００２２．但肝衰后２和７ｄ的两组间残肝重量及肝功能指标并无显著差异．结论冻存猪肝细胞移植可治疗急性肝衰，其作用机理可能是综合效应的结果；低温使膜蛋白α螺旋结构比率增加，它可能与降低移植细胞的免疫原性有关．     

药品也需“防暑降温”

犹如人会中暑那样,药品在夏天也会"中暑",因此,很多药品需要低温保存,以保证药品质量.在为药品"防暑降温"时,冰箱是最好的用具.通常,可以放入冰箱的药品有以下几种: 针剂:与片剂相比,针剂的稳定性相对较差,因此很多针剂应该放入冰箱保存.     

深低温保存血小板匀速和非匀速降温模式比较研究

目的评估3种降温模式对冷冻保存血小板质量的影响,优化深低温保存血小板降温技术。方法随机选取8人份血小板,每人份等分3份并随机配对分为A、B、C组,分别采用传统匀速(-1℃/min)降温模式、-80℃低温冰箱降温模式和非匀速降温模式进行冷冻降温处理。各组降温至终点后取出,均采用37℃循环式水浴箱复温,然后检测血小板计数(Plt)、血小板平均体积(MPV)、血小板分布宽度(PDW)、血浆乳酸脱氢酶(LDH)、乳酸(LA)、pH、CD62p阳性率、磷脂酰丝氨酸(PS)阳性率、CD62p再表达率、玻片法血小板聚集实验(SPAT)、激活血小板血浆凝固时间(APCT)。结果1)3组Plt、PDW、pH、LA、aPCT均差异无显著性统计学意义(P>0.05)。2)B组和C组各项指标差异无显著性统计学意义(P>0.05)。3)B组和C组MPV、CD62p再表达率、SPAT明显优于A组,差异有显著性统计学意义(P<0.01)。A组、B组和C组MPV分别为(5.81±0.90)fl,(5.61±0.91)fl,(5.68±0.81)fl;A组、B组和C组CD62p再表达率分别为(52.4±7.8)%,(55.0±8.6)%,(57.0±8.3)%;A组、B组和C组SPAT分别为(123±14)s,(111±13)s,(110±16)s。4)B、C组血浆LDH水平明显低于A组,差异有显著性统计学意义(P<0.05)。A组、B组和C组血浆LDH分别为(127±22)U/L,(120±20)U/L,(122±22)U/L。结论1)匀速降温不是血小板最理想的冷冻降温方式;2)能保证-10℃—-40℃温度段降温平均速率在(-1—-3)℃/min间的非匀速降温模式不仅具有可操作性强的明显优势,而且更加符合血小板低温生物学特性,有利于提高血小板保存质量。     

三甲氧苄嗪对低温保存大鼠离体心脏的保护作用

目的：研究三甲氧苄嗪（10^-6M）对离体心脏低温保存的影响,并探讨其作用机制。方法：以改良的Lamgendorff离体鼠心灌注模型,观察三甲氧苄嗪加入UW液后（三甲氧苄嗪－10^-6M）,离体鼠心在4℃保存6小时后血流动力学、冠脉流出液心肌酶漏出量、心肌含水量、心肌ATP、MDA含量、心肌超微结构的变化。结果：UW液加入三甲氧苄嗪组与示加入三甲氧苄嗪组相比,复灌后心功能恢复率明显增高（P＜0.01）;心肌含水量（P＜0.05）及丙二醛含量较低（P＜0.01）;心肌酶漏出量明显减少（P＜0.01）;心肌ATP水平得到很好地维持（P＜0.01）;心肌超微结构尤其是线粒体结构改变轻,损伤小。结论：10^-6M三甲氧苄嗪对低温保存的大鼠心脏具有明显的保护作用。     

钙超载对低温保存肝脏细胞的损伤作用

目的探讨钙离子对肝脏的损伤作用.方法应用含胶原酶保存液灌注大鼠肝脏制成不同细胞成活率的肝细胞悬液,低温保存肝脏细胞.应用Fura-2/AM标记测细胞内钙. 结果①低温保存2小时肝细胞 实验1组(细胞成活率为5%)肝细胞内钙值为(1055.0±30.79) nmol/L; 实验2组(细胞成活率为10%)肝细胞内钙值为(853.0±20.42) nmol/L; 实验3组(细胞成活率为30%)肝细胞内钙值为(616.0±13.20) nmol/L; 实验4组(细胞成活率为50%)肝细胞内钙值为(562.0±26.06) nmol/L; 实验5组(细胞成活率为70%～80%)肝细胞内钙值为(318.0±13.01) nmol/L; 实验6组(细胞成活率为90%)肝细胞内钙值为(114.6±6.11) nmol/L.②低温保存24小时肝细胞 实验A组(细胞成活率为10%)肝细胞内钙值为(1704.0±70.11) nmol/L; 实验B组(细胞成活率为50%)肝细胞内钙值为(1125.0±23.22) nmol/L.随着细胞成活率的降低,细胞内钙值逐渐升高; 在同样细胞成活率情况下,随着保存时间延长(2小时与24小时)细胞内钙值增高1倍左右.结论在低温保存过程中,钙超载是造成肝脏细胞缺血再灌注损伤的一个主要因素.     

前房注气联合低温保存眼球的临床应用

目的 探讨前房注气联合低温保存眼球行治疗性角膜移植的可行性及疗效评价。方法 采用新鲜供体眼球抽取房水并注入惰性气体后置－８０℃低温冰箱长期保存。作为供体共行治疗性角膜移植５５例（５８眼）,观察治疗效果。结果 行板层角膜移植（ＬＫ）２５例（２８眼）,穿透角膜移植（ＰＫ）３０例（３０眼）,术后平均随访１０．２个月,一次手术成功４７眼（８１．０４％）,手术失败１１眼（１８．９６％）,视力提高３３例（３４眼）。结论 采用此方法行治疗性ＬＫ可起到治疗和增视的双重目的,ＰＫ可去除病灶、控制炎症、封闭穿孔、保存眼球,为再次增视性手术提供条件。     

深低温冻存角膜复温后内皮细胞活性的变化

目的 探讨深低温冻存角膜复温后内皮细胞活性变化的规律。方法 冻存牛角膜复温后,分别行器官培养（Ａ组）及ｏｐｔｉｓｏｌ保存（Ｂ组）,检测皮内细胞密度、存活率（ＥＳＲ）及形态。结果 Ａ组培养６ｈ密度下降了７１．２％,２４ｈＥＳＲ明显下降（２７．２％）;Ｂ组保存７２ｈ密度下降了７３．６％（３７．２％）。结论 深低温冻存可造成内此细胞的潜伏性损伤,判定其活性在复温后组织培养６ｈ后进行。复温后Ｏｐｔｉｓｏｌ保存能改善细胞的潜在性损伤。     

低温保存下异搏定对人肝细胞保护作用的实验研究

我们应用钙离子通道阻滞剂异搏定 (ＶＰ)保存成人分离培养的肝脏细胞 ,研究异搏定的保护作用机制 ,明确异搏定的具体作用途径。一、材料和方法1.成人肝脏细胞的分离和培养 :临床行同种异体肾移植时联合切取肝脏 ,以 4℃ＵＷ液 (ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＷｉｓ ｃｏｎｓｉｎＳｏｌｕｔｉｏｎ)保存 1ｈ。切取肝叶组织 ,剪碎 ,加入胶原酶消化。取出细胞悬液过滤 ,滤液离心弃上清 ,加入ＵＷ液保存。台盼蓝染色 ,计数细胞存活率。2 .细胞内钙的测定 :(1)将肝细胞悬液分为 2组 ,每组又分为 4个小组(ｎ =5 ) ,第 1组分别为含 0ｍｍｏｌ/ＬＣａＣｌ…