海藻糖在生育力保存中的应用

肿瘤诊疗技术的进步显著提高了患者的生存率,但放化疗可能造成人类生育力的下降乃至丧失。如何有效保存生育力已成为近年来研究的热点。海藻糖属于非渗透性冷冻保护剂,是一种具有特殊生物学性能的双糖,能够在干燥、脱水、冷冻等恶劣条件下有效保护蛋白质等大分子不变性失活。随着研究的逐步深入,海藻糖已被广泛应用于生育力保存等医学领域中,有学者将其用于保存精子、精原干细胞、卵母细胞、胚胎、卵巢组织和睾丸组织并取得了显著成果。综述海藻糖的生物学性质、作用机制假说以及在生育力保存中的应用研究现状和最新进展。     

生物体的深低温保存技术研究进展

近年来,低温保存技术的应用越来越广泛。低温可以降低细胞的呼吸代谢作用,延缓其功能的丧失,鉴于临床上将生物组织或器官采用特殊方法冷却至深低温,并长期保存,待需要时,再将其按特殊方法复温,以便获得活的生物体[1]。1低温保存方法将拟冻存的组织或器官过渡到深低温环境中有以     

非低温保存自体外周造血干细胞移植14例报告

目的:探讨非低温保存外周造血干细胞的活性,为临床自体外周造血干细胞移植提供方便有效的保存方法。方法:常规方法动员外周造血干细胞,CS-3000PLUS血细胞分离机采集外周造血干细胞,将采集好的干细胞加入肝素钠1250U后,放置4℃冰箱保存48~72h,预处理结束24h后回输。结果:全部病例获造血重建,MNC、CD34 细胞回收率分别为95.7%、91.4%,与保存前相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论:4℃冰箱保存外周造血干细胞48~72h的方法是安全、可靠的,适用于基层医院临床应用。     

2单位冰冻红细胞自动化洗涤程序研究

目的：对透析式冰冻红细胞（ RBC）洗涤机的处理程序进行改进,使之适用于2 U冰冻RBC的洗涤处理。方法深低温保存2 U冰冻RBC解冻复温后,采用透析式冰冻RBC洗涤机进行洗涤处理,对洗涤程序进行了提高泵速和加液速度、调整溶液渗透压等方面的改进,大幅缩短2 U冰冻RBC洗涤处理时间。对洗涤后的RBC进行血红蛋白（ Hb）含量、Hb回收率、甘油残留量（上清渗透压）、游离Hb含量、变形性以及凋亡率等指标的检测,并据此判断洗涤效果。结果改进前后的透析式洗涤程序处理得到的RBC的Hb含量分别为（35．03±4．20）和（53．82±2．08）g;Hb回收率分别为（61．10±8．46）％和（80．22±3．73）％;上清渗透压分别为（307．00±14．50）和（322．00± 29．00）mOsm;游离Hb分别为（0．74±0．04）和（0．80±0．08）g／L;程序改进前后的洗涤时间分别为（1．64±0．31）和（1．04±0．16）h;改进前后的洗涤程序处理得到的RBC在Hb含量、Hb回收率、RBC变形性、洗涤时间等指标上有明显改善。而在甘油残留量、游离Hb含量、细胞凋亡等方面无显著变化。结论经过程序改进,2 U冰冻RBC洗涤时间缩短、洗涤后RBC和Hb含量显著升高,提高了洗涤效率及冰冻RBC的利用效率。     

低温冷冻富血小板血浆促进兔颅骨缺损修复效果的观察

目的 观察比较低温冷冻后的富血小板血浆(PRP)在兔颅骨缺损修复中的效果.方法 将15只体质量为2.5kg的健康新西兰雄性大白兔,沿兔颅顶中线制备3个骨缺损孔,分别植入-80℃低温冷冻自体PRP凝胶+羟基磷灰石/磷酸三钙复合体(HAP/TCP),(实验孔)、生理盐水+HAP/TCP(空白孔)、新鲜自体PRP凝胶+HAP/TCP(对照孔),于术后4周、8周和12周时分别处死5只并通过大体观察、X线检查、组织学观察及CT值测量等方法比较低温冷冻PRP对兔颅骨缺损修复的影响.结果 术后4周、8周时,实验孔及对照孔成骨质量明显优于空白孔,两组CT值均较空白孔高[术后4周时实验孔、对照孔、空白孔分别为(376.8±50.41)、(414±71.41)、(94.42±37.02),术后8周时分别为(750.46±91.26)、(682.22±111.53)、(444.04±47.12)],差异均有统计学意义(P＜0.01);而术后4周、8周时实验孔CT值与对照孔比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).术后12周时,实验孔、对照孔和空白孔的成骨质量差异不明显,各孔间CT值差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 PRP经低温冷冻保存后仍然和新鲜PRP一样,具有早期促进骨缺损修复的效果.     

玻璃化冻存对兔关节软骨细胞存活率及代谢活性的影响

目的探索理想的关节软骨细胞低温保存方法。方法分别采用玻璃化冻存法、程序性降温法及梯度降温法对兔关节软骨细胞进行低温保存,通过流式细胞仪计数及阿尔新蓝染色等方法了解复苏后软骨细胞的存活率、凋亡率及生物活性。结果采用玻璃化冻存法保存的软骨细胞存活率为(86.57±1.67)%,明显高于传统的程序性降温法及梯度降温法;玻璃化冻存对软骨细胞合成糖胺多糖的能力有一定影响,但与新鲜未冷冻组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论玻璃化冻存法较传统的保存方法能显著提高冷冻保存后兔关节软骨细胞的存活率,并能维持细胞的生物活性,是一种理想的软骨细胞低温保存方法。     

卵子冷冻在体外受精-胚胎移植中的实验研究

目的研究人类不同成熟期卵子冷冻与复苏的实验条件,观察慢冻速融后卵子形态、存活状况,探讨卵子冷冻的方法。方法收集自愿捐赠获得的辅助生殖周期中的卵母细胞进行慢冻速融,观察成熟卵子(MII)和未成熟卵子(MI GV)的形态学变化以及未成熟卵冻融后体外成熟情况。结果本实验冻存卵子47例,存活18例,含13例成熟卵子(MII)和5例未成熟卵子(MI GV),存活率38.30%。结论本法冻融卵子有部分卵子获得短期存活,为今后卵子冷冻研究提供了一定的实验依据。     

枸橼酸西地那非对宫腔粘连术后冻融胚胎移植妊娠结局的影响

目的：观察枸橼酸西地那非（万艾可）对宫腔粘连（intrauterine adhesion,IUA）分离术后冻融胚胎移植（frozen embryo transfer,FET）患者妊娠结局的影响。方法：选择2017年1-12月在南京医科大学附属妇产医院行FET的不孕症患者,在进入FET周期前宫腔镜检查确诊IUA,行宫腔镜下IUA分离术,术后复查宫腔镜显示宫腔形态正常行FET,共310例。根据患者是否添加枸橼酸西地那非将患者分为2组,其中A组（对照组）实施激素替代周期FET,共190例;B组（治疗组）为激素替代周期并在患者月经干净后每日阴道给予枸橼酸西地那非50 mg,应用至移植前,共120例。首先比较2组患者的妊娠结局,其次将A组及B组患者进一步分为轻度IUA组和中重度IUA组,比较2组之间的差异。结果：B组临床妊娠率［50.83%（61/120）］高于A组［34.74%（66/190）］,差异有统计学意义（P＜0.05）;B组胚胎种植率［31.17%（72/231）］略高于A组［21.82%（79/362）］,但差异无统计学意义（P＞0.05）。与A组相比,B组轻度IUA患者的临床妊娠率与胚胎种植率差异无统计学意义（P＞0.05）;B组中重度IUA患者的临床妊娠率［44.78%（30/67）］及胚胎种植率［28.46%（37/130）］均高于A组,差异有统计学意义（P＜0.05）。2组间流产率和异位妊娠率比较差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论：应用枸橼酸西地那非可提高IUA术后患者子宫内膜容受性,尤其对中重度IUA术后患者可显著提高其FET妊娠率。     

大鼠卵巢组织冷冻复苏及自体异位移植研究

目的：探讨直接覆盖玻璃化冷冻(direct cover vitrification, DCV)在冷冻大鼠卵巢组织中的效果,并对自体异位移植后卵巢组织存活状况及内分泌情况进行分析。方法性成熟的 Wistar 大鼠50只随机分为 A、B、C、D 组, A 和 B 组各20只,C 和 D 组各5只。 A 组为新鲜卵巢组织移植;B 组卵巢组织经 DCV 冷冻保存2周复苏后移植;C 组为去势对照;D 组为假手术对照。自体异位移植6周后检测大鼠血清中雌二醇(E2)水平,计算卵泡密度,观察移植卵巢组织形态学及增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)的表达情况。结果大鼠卵巢组织移植存活的卵巢组织周围可见血管供应,移植失败的卵巢组织呈纤维化状态,与周围组织血供不明显。 B 组卵巢组织移植存活率低于 A 组(P <0．05)。 B 组卵巢组织中卵泡密度均低于 A、D 组,且 A 组低于 D 组(P <0．05)。 A、B 组血清 E2水平高于 C 组,低于 D 组(P <0．05)。 A、B 组卵巢组织 PCNA 阳性率均低于 D 组,且 B 组低于 A 组(P <0．05)。结论大鼠卵巢组织经 DCV 法冻融自体异位移植后部分卵泡能存活并可恢复内分泌功能。