广东地区丙型肝炎患者的HCV基因分型研究

目的了解广东地区慢性丙型肝炎患者的HCV基因分型情况,为丙型肝炎病毒的诊断和预防提供有力依据。方法根据丙型肝炎病毒RNA全序列,在5′-NCR区设计引物,通过套式PCR扩增,特异性产物测序分析并分型。结果检测HCV感染样本58例,扩增出阳性样本47例,共检出3种基因型,分别为1b,2a和4型,其中1b占85.1%,2a占12.8%,4型占2.1%,4型为中国人群中极少报道被检出的罕见型。结论广东地区HCV基因型主要为1b型,其次为2a型,与中国其它地区HCV基因型分布比较一致。     

MMP-9/TIMP-1在脂多糖和N-乙酰半胱氨酸干预体外孵育胎膜中的表达及意义

目的探讨感染引发早产的可能机制及N-乙酰半胱氨酸(NAC)预防感染引发早产的可行性。方法取20例正常择期剖宫产孕妇(无妊娠合并症及临产征兆)的胎膜在体外进行孵育,共分成5组:0 h组(取下后未经孵育的胎膜),24 h组,48 h组,72 h细菌内毒素脂多糖组(LPS组),72 h LPS NAC组(LPS NAC组)。首先评价体外孵育胎膜的存活力,然后应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别测定5组胎膜的基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)mRNA表达水平的变化,最后比较LPS组和LPS NAC组MMP-9/TIMP-1比值的变化。结果体外孵育胎膜的存活力达到83%±1.9%,RT-PCR可见0 h组及48 h组的MMP-9表达微弱,24 h组的表达较前两组增强(P<0.05),LPS组的表达最强(与24 h组比较P<0.01),LPS NAC组的表达低于LPS组(P<0.01),各组TIMP-1的表达无明显区别(P>0.05),LPS NAC组较LPS组MMP-9/TIMP-1比值明显降低(P<0.01)。结论MMP-9/TIMP-1比值升高可能是感染引发早产的机制之一,NAC有望在预防和治疗早产中发挥作用。     

异氟醚对人单核细胞株THP-1细胞炎性细胞因子mRNA表达的影响

目的研究异氟醚对人类单核细胞株(THP-1)细胞、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-8、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)、IL-4和IL-10mRNA表达的影响。方法在吸入不同浓度异氟醚0、2、4、6h收获THP-1细胞,从收获的细胞中提取RNA,逆转录合成cDNA,以-βactin作内对照半定量PCR后电泳扫描求积,检测THP-1细胞与炎性反应关系密切的上述细胞因子mRNA表达。结果在吸入异氟醚过程中观察到明显的促炎性细胞因子IL-1β、IL-8、TNF-αmRNA表达增加,未检测到IFN-γ、IL-4和IL-10mRNA表达。IL-1β、IL-8、TNF-αmRNA表达在异氟醚吸入过程中的4和6h比0h增加4~8倍。在异氟醚吸入浓度为2.0最低肺泡有效浓度(minimal alveolar concentration,MAC)时,IL-1βmRNA表达呈时间依赖关系(0h:0.55±0.06;2h:3.12±0.11;4h:3.45±0.14;6h:3.92±0.07)。在吸入4和6h时,IL-1βmRNA表达呈剂量依赖关系,分别为[对照:0.71±0.13;异氟醚:(1.69±0.07)1.0MAC;(3.45±0.14)2.0MAC]和[对照:0.65±0.09;isoflurane:(2.11±0.12)1.0MAC;(3.92±0.07)2.0MAC]。这些数据提示THP-1细胞吸入异氟醚过程中伴随有促炎性细胞因子mRNA表达增加。结论异氟醚能在转录水平上调节THP-1细胞炎性反应,当吸入浓度>1.0MAC时,异氟醚以剂量和时间依赖方式显著增加THP-1细胞促炎性细胞因子mRNA表达。     

荧光定量RT-PCR在轮状病毒检测中的应用

目的:建立轮状病毒的荧光定量RT-PCR检测方法,用于检测临床腹泻样本。方法:使用Taqman探针技术,建立轮状病毒VP6特异的荧光定量RT-PCR体系。与WHO推荐的轮状病毒检测方法ELISA平行检测,对该体系的检测范围、灵敏度、特异性等参数进行评价。并将该体系用于临床腹泻样本。结果:该荧光定量RT-PCR体系具有高度灵敏度和特异性,线性范围宽,最低可检出1TCID50/ml。对113份临床腹泻样本的平行检测结果显示,该荧光定量RT-PCR体系与ELISA的检出率差异无统计学意义(χ2=0.41,P>0.5),可同样用于临床样本检测。结论:成功建立了轮状病毒荧光定量RT-PCR体系,该体系灵敏、特异、重复性好,可用于临床检测。     

体外诱导大鼠骨髓间质细胞转化为神经细胞

目的 体外培养骨髓间质细胞，探索大鼠骨髓间质细胞体外诱导及向神经细胞方向分化。方法分离大鼠骨髓间质细胞培养、扩增，检查细胞活力。应用脑神经营养因子（BDNF）、β-巯基乙醇（β-ME）对细胞诱导分化，行大体观察，6h后免疫组织化鉴定神经丝蛋白（NF-200）、神经烯醇化酶（NSE）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP），并用RT-PCR鉴定NF-200、NSE和GFAP的mRNA表达情况。结果 用BDNF、β-ME单独或者共同诱导3h，骨髓间质细胞形态类似神经细胞，6h后神经细胞标记蛋白和mRNA表达阳性，而且BDNF＋β-ME组诱导率最高。结论 BDNF和β-ME能协同刺激大鼠骨髓间质细胞转化并分化为神经细胞。     

转化生长因子β1基因转染对结肠癌SW480细胞增殖的抑制作用

目的:探讨转化生长因子β1(TGF-β1)基因转染对结肠癌细胞SW480体外增殖的抑制作用.方法:以腺病毒为载体将人TGF-β1基因导入体外培养的人结肠癌细胞株SW480, 应用免疫组织化学及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测SW480细胞中转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白及mRNA的表达情况.通过MTT法检测转染后细胞增殖的抑制情况.结果:转染hTGF-β1基因后,与对照组相比,TGF-β1蛋白和mRNA在细胞中的表达均增强.SW480的增殖受到明显抑制(P<0.05),抑制率为60%～80%.结论:转染hTGF-β1基因对体外培养的结肠癌细胞SW480的增殖有明显抑制作用.     

细胞角蛋白-20mRNA在子宫内膜癌淋巴结中的表达及意义

目的 探讨巢式RT-PCR法检测子宫内膜癌区域淋巴结中细胞角蛋白-20信使RNA（CK20 mRNA）的表达,以了解肿瘤细胞的微转移.方法 取2003年3月至2004年2月间在北京大学人民医院手术治疗的18例子宫内膜癌患者的100枚盆腔淋巴结,巢式RT-PCR法检测其CK20mRNA的表达,同时取5例子宫肌瘤患者的子宫组织及淋巴结20枚作为阴性对照.取子宫内膜癌细胞系Ishikawa及子宫内膜癌组织作为阳性对照.结果 CK20 mRNA在Ishikawa细胞及全部18例子宫内膜癌组织中均呈阳性表达,阳性率100%（敏感性100%）.而在对照的5例正常子宫组织及20枚正常淋巴结中均未表达（特异性100%）.18例子宫内膜癌中有16例经手术病理分期为Ⅰ、Ⅱ期,临床病理检查淋巴结均为阴性;而用巢式RT-PCR方法检测,有5例CK20 mRNA呈阳性表达,证实有肿瘤细胞的微转移,阳性率为31%.结论 CK20可以作为检测子宫内膜癌细胞微转移的标志物.Ⅰ、Ⅱ期子宫内膜癌中有约31%的病例存在有区域淋巴结的肿瘤细胞微转移,其术后复发可能与此有关.     

补骨脂素对HL60/HT耐药细胞的逆转作用及对细胞内钙离子浓度的影响

目的研究补骨脂素对HL60/HT耐药细胞的逆转作用及对耐药细胞内Ca2 浓度的影响,探讨其可能的作用机制。方法采用MTT法测定补骨脂素对细胞增殖的抑制作用,高效液相色谱法检测细胞内三尖杉酯碱(HT)的量,激光共聚焦显微镜测定细胞内不同时段和不同时间点的Ca2 浓度。结果补骨脂素在1~20μmol/L能不同程度降低HT对HL60/HT细胞的IC50,并不同程度提高细胞内HT的量;1~20μmol/L补骨脂素作用不同时段(24、48、96h),HL60/HT细胞内Ca2 浓度与作用时间成负相关,10和20μmol/L补骨脂素作用HL60/HT不同时间(5、10、15、20、25min),细胞内Ca2 浓度与作用成负相关性。结论补骨脂素能逆转HL60/HT细胞的多药耐药,其作用机制与影响耐药细胞内Ca2 浓度、增加细胞内HT的量有关。     

高效抗逆转录病毒疗法相关性代谢并发症研究进展

高效抗逆转录病毒疗法 (HAART)使人免疫缺陷病毒 (HIV)感染的发病率及病死率明显降低,但常引起代谢并发症,包括脂肪代谢障碍、血脂异常、高血糖、高乳酸血症及骨质疏松等,机制未完全阐明。有报道在接受HAART的HIV阳性病人,提前发生冠心病及心肌梗死的危险性上升。     

胃癌基质金属蛋白酶7基因表达及与病理特点关系

[目的]探讨基质金属蛋白酶7(MMP-7)基因在胃癌中的表达及与胃癌病理特点的关系.[方法]用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测MMP-7 mRNA在45例胃癌中的表达,并与相应的病理特点进行对照.[结果]随着胃癌分化程度的降低,MMP-7mRNA的表达逐渐升高(从高分化癌至未分化癌阳性率分别为57.1%、60.0%、90.9%、91.7%);随着癌细胞由黏膜层或黏膜下层向深部侵犯肌层和浆肌层时,MMP-7mRNA的表达阳性率大幅度提高(从黏膜层至浆膜外阳性率分别为25.0%、33.3%、84.6%、90.0%、91.7%);有淋巴管、淋巴结及静脉转移MMP-7mRNA表达的阳性率与无转移病例比较差异均有显著性(P＜0.01).[结论]MMP-7 mRNA可作为胃癌侵袭、转移、复发的标志物,对预后评估具有重要意义.