紫草素抑制人甲状腺髓样癌TT细胞增殖及其机制的研究

目的：了解紫草素抑制甲状腺癌TT细胞增殖的作用及机制。方法采用MTT法分析紫草素对人甲状腺癌TT细胞增殖的影响;流式细胞术分析紫草素对TT细胞周期分布和凋亡的影响;透射电镜观察紫草素对TT细胞凋亡和自噬的调控。结果不同浓度紫草素作用24-72h对TT细胞均有抑制增殖的作用,并随药物浓度增加和作用时间延长而增强。紫草素作用24h,2、4滋g/ml紫草素组细胞出现凋亡峰（亚二倍体峰）,与空白对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）,但未见明显的细胞周期阻滞。Annex-inV- PE/7- AAD双染法分析细胞凋亡,2滋g/ml紫草素作用TT细胞24h,早期凋亡细胞增至8.0%;而空白对照组为0.2%,凋亡后期继发坏死细胞为11.3%,空白对照组为0.1%;作用48h后,早期凋亡细胞为24.9%,凋亡后期继发坏死细胞上升为14.2%。2滋g/ml紫草素作用TT细胞24h,透射电镜观察可见典型的细胞凋亡和自噬结构。结论紫草素具有抑制人甲状腺癌TT细胞增殖的作用,呈剂量和时间依赖关系;其作用机制与诱导细胞凋亡和自噬有关。     

HPLC法同时测定紫草凡士林中5种萘醌类化合物的含量

目的：建立同时测定紫草凡士林中紫草素、乙酰紫草素、乙酰氧基异戊酰紫草素、异丁酰紫草素和β,β’-二甲基丙烯酰紫草素含量的方法。方法：采用高效液相色谱法。色谱柱为AgilentEclipseXDB．C18（250mm×4．6mm,5um）,流动相为甲醇．乙腈-0．2％甲酸溶液（48：32：20,V／V／V）,流速为1．0ml／min,柱温为24℃,检测波长为516nln。结果：紫草素、乙酰紫草素、乙酰氧基异戊酰紫草素、异丁酰紫草素和β,β’-二甲基丙烯酰紫草素的质量浓度分别在7．12～71．20μg／ml（r=O．9994）、11．92～119．20μg／ml（r=0．9996）、4．07~40．70μg／ml（r=0．9997）、3．65～36．50μg／ml（r=0．9996）、5．11～51．10ug／m1（r=0．9995）范围内与各自峰面积积分值呈良好的线性关系;平均加样回收率分别为100．82％、101．49％、97．99％、100．29％、101．74％,RSD分别为3．03％、1．25％、1．75％、2．25％、2．31％（”均为6）。结论：该方法简单易行、结果准确、重复性好,适用于紫草凡士林的质量控制。     

紫草素对大鼠鼻黏膜机械性损伤的修复作用

目的 探讨紫草素对SD大鼠鼻粘膜损伤的修复作用，为临床使用紫草素治疗鼻损伤提供参考依据。方法 将60只SD大鼠制备鼻粘膜机械损伤模型，按随机数字表法分为五组，每组各12只，分别为紫草素高（紫草素溶液4 mg/kg涂抹鼻腔）、中（紫草素溶液2 mg/kg涂抹鼻腔）、低剂量组（紫草素溶液1mg/kg涂抹鼻腔）、阳性药物对照组（0.1m红霉素软膏涂抹鼻腔）及模型对照组（不作任何处理），连续用药21天。观察不同时间各组动物一般情况，鼻黏膜病理及组织病理学变化。结果 3种不同剂量组的紫草素均能改善鼻黏膜损伤大鼠的临床表现，差异有统计学意义(P＜0.05)；经不同剂量的紫草素处理后，大鼠受损鼻黏膜上皮细胞修复、中性粒细胞减少、淋巴细胞浸润降低，差异均有统计学意义(P＜0.05)，但中、高剂量组效果更优于低剂量组(P＜0.05)。结论 3种剂量的紫草素对鼻黏膜损伤的修复均有明显改善作用，中、高剂量效果更优，发挥作用与用药剂量、时间有关；其机制可能与紫草素抑制炎症反应，促进细胞增殖有关。     

紫草素对胶原诱导关节炎的药效学研究

目的：研究紫草素对胶原诱导的关节炎（collageninducedarthritis，CIA）小鼠的疗效。方法：将紫草素高低两种剂量给CIA小鼠灌胃，连用30天，对小鼠一般状态进行观察，用关节炎评分评估CIA小鼠关节炎病情；小鼠足测量仪检测关节肿胀程度；组织学染色评价膝关节的软骨和骨破坏。结果：紫草素高剂量组与对照组相比，可以降低CIA小鼠的关节炎评分，阻止病理学进展；延缓CIA小鼠体重下降程度，降低后爪肿胀程度。结论：紫草素能够有效控制CIA小鼠的炎症进展，阻止骨质破坏，免疫抑制作用可能是其治疗胶原诱导的关节炎的机制。     

紫草素对肺腺癌H1975细胞作用的实验研究

目的 观察紫草素对肺腺癌细胞H1975增殖的影响,并初步探讨其可能的抗癌机制.方法 不同浓度紫草素作用于肺腺癌H1975细胞,MTT实验观察紫草素作用24、48、72 h对肺腺癌细胞增殖的影响,相差显微镜下观察细胞形态,流式细胞术检测细胞凋亡和周期,Western blot检测细胞中EGFR信号通路下游关键分子EGFR、AKT、ERK表达及磷酸化水平以及凋亡相关蛋白Bcl-2表达和DNA修复酶PARP的变化.结果 紫草素能够抑制非小细胞肺癌细胞增殖并呈浓度和时间依赖性;流式细胞术显示紫草素诱导H1975细胞发生凋亡,阻滞细胞于S期;EGFR、AKT和ERK蛋白表达下降,p-EGFR、p-AKT和p-ERK磷酸化水平降低,凋亡相关蛋白Bcl-2表达减少,PARP发生剪切.结论 紫草素能够抑制非小细胞肺癌细胞株H1975增殖、诱导凋亡,其机制可能与其下调EGFR、AKT和ERK的表达及其磷酸化水平和降低凋亡相关蛋白Bcl-2表达和促使PARP发生剪切有关.     

紫草素下调CXCR4表达及抑制结肠癌细胞株SW480在CXCL12诱导下的定向迁移

目的探讨紫草素对结肠癌细胞增殖、CXCR4表达及对CXCL12诱导的定向迁移能力的影响。方法采用MTT法观察紫草素对SW480细胞增殖的影响,流式细胞仪检测紫草素对SW480细胞表面CXCR4表达的影响．Transwell方法观察紫草素对SW480细胞定向迁移能力的影响。结果紫草素对SW480细胞生长有抑制作用．这种抑制作用随着药物浓度的升高和作用时间的延长而增强。SW480细胞CXCR4阳性表达率为（99．1±0．7）％,用紫草素0.01、0．1及1．0μmol／L作用24h后,CXCR4阳性表达率分别降至（76．0±2．4）％、（59．1±2．5）％和（35．5±1．9）％（F=1098．041．P〈0．001）。上述不同浓度紫草素对CXCL12诱导的SW480迁移抑制率分别为25．2％、38．5％和55．7％（F=48．970,P〈0．001）。结论紫草素除了抑制结肠癌细胞增殖外,还可能通过下调CXCR4表达从而抑制肿瘤细胞在CXCL12诱导下的定向迁移。     

复方紫草油喷雾剂中紫草油提取工艺研究

目的优选复方紫草油喷雾剂中紫草油的最佳提取工艺,为以后制备喷雾剂前的紫草素包合提供条件。方法：用紫外分光光度法测定紫草油中左旋紫草素含量作控制指标,利用spss11．5软件分析L9（34）正交试验优选紫草油的最佳提取方案。结果：最佳工艺为将1cm紫草黝口10倍量麻油浸泡24小时后,加热,油温控制在150℃以内,45分钟,待紫草炸制焦枯,手粘即碎,趁热微孔滤膜过滤,为下一步用环糊精包合提供条件。     

高效液相色谱法测定紫草涂膜剂中紫草素的含量

目的 :测定紫草涂膜剂中紫草素含量 ,以制定涂膜剂的质量标准。方法 :采用 HPL C法 ,流动相为甲醇 -水 ( 75∶ 2 5 ) ,检测波长为 5 16 nm。结果 :线性方程为 Y=1.0 12× 10 4 X- 3.6 30× 10 4 ,r=0 .9990 ,左旋紫草素在 0 .184～ 1.12μg范围内线性关系良好 ,平均回收率为 97.76 % ,RSD为 2 .95 % ( n=5 )。结论 :建立的方法操作简便 ,结果准确 ,重复性好。     

正交试验优选紫草提取工艺

目的以紫草中总萘醌和左旋紫草素的含量为指标，研究超声萃取和索氏提取2种工艺方法在萃取紫草中有效成分的差异。方法通过正交试验安排实验条件，采用分光光度法测定紫草提取液中总萘醌含量，HPLC法测定提取液中左旋紫草素含量，比较超声萃取与索氏提取的提取效率，优选两种工艺方法的最佳工艺条件。结果2种工艺方法中，粒度对总萘醌的提取率均有非常显著影响，粒度较大的提取率高，但对紫草中左旋紫草素的提取率无显著影响；溶剂乙醇在2种工艺方法中表现出不同影响，超声萃取工艺乙醇的提取率较高，呈显著影响，而在索氏提取工艺中提取率较低，也呈显著影响。结论比较2种工艺，超声萃取具有高效、省时、节能的特点，优于索氏提取工艺。     

紫草素通过激活活性氧自由基诱导大肠癌细胞的凋亡

目的：研究紫草素通过激活活性氧（ROS）自由基诱导大肠癌细胞凋亡的作用机制。方法：通过MTT测定法检测紫草素对人结肠癌细胞系HCT116和SW480细胞活力的影响,结合Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒及流式细胞术检测细胞凋亡情况;通过Caspase 3/9活性测定试剂盒检测半胱天冬酶活性,使用ROS检测试剂盒检测紫草素处理对HCT116和SW480细胞中ROS水平的影响,并借助Western Blotting检测Bcl-2和Bcl-xL蛋白表达情况。结果：细胞活力检测结果显示,人正常结肠黏膜上皮细胞系NCM460对紫草素干预不敏感,而紫草素对人结肠癌细胞系HCT116和SW480细胞活力表现出显著的抑制作用（均P<005）。在紫草素干预后,Western Blotting分析检测到细胞周期蛋白D、c-Myc、Bcl-2和Bcl-xL蛋白表达水平显著下调（均P<005）。同时,紫草素以剂量依赖性方式上调了Caspase3和Caspase9蛋白表达水平（均P<005）。流式细胞术检测结果表明,经10 μmol/L紫草素处理24 h后,HCT116和SW480细胞凋亡率增加至592%和656%,而几乎没有坏死细胞（Annexin V-,PI+）;并检测到HCT116和SW480细胞线粒体膜电位被去极化。ROS水平检测结果显示,紫草素以剂量依赖性方式上调了HCT116和SW480细胞ROS水平。结论：紫草素通过线粒体介导途径诱导结肠癌细胞凋亡,Bcl-2蛋白家族和细胞内ROS水平升高在该过程中发挥重要作用。