In vivo quantification of fluorescent molecular markers in real-time: A review to evaluate the performance of five existing methods

With the advent of molecular-targeted fluorescent markers, there is a renewed interest in fluorescence quantification methods that are based on continuous wave excitation and multi-spectral image acquisition. However, little is known about their in vivo quantification performance. We reviewed the performance of five selected methods by analytically describing these and varying input parameters of irradiance, excitation geometry, collection efficiency, autofluorescence, melanin content, blood volume, blood oxygenation and tissue scattering using optical properties representing those for human skin. We identified one method that corrects for variations in all parameters. This requires image acquisition before and after marker administration, under identical geometry. Hence, it is suited for applications where the site of interest can be relocated (e.g. anaesthetized animals and dermatology). For applications where relocation is not possible, we identified a second method where the uncertainty in the fluorescence signal was ±20%. Hence, use of these methods can substantially aid in vivo fluorescence quantification compared to use of the raw fluorescence signal, as this changed by more than 3 orders of magnitude. Since these methods can be computed in real-time, they are of particular interest for applications where direct feedback is critical, as diagnostic screening or image-guided surgery.     

紫外分光光度法同时测定增效黄连素胶囊中二组分含量

本文提出以紫外分光光度法测定增效黄连素胶囊含量。样品经乙醇溶解、水稀释后，不经分离提取，直接在３４６ｎｍ波长处测定盐酸黄连素；在３４６ｎｍ和２７１ｎｍ波长处以系数倍率法测定甲氧苄氨嘧啶，测得二组分的平均回收率分别为９９．１％和９９．６％，相对标准偏差为０．６７％和０．８２％（ｎ＝９）．本法简便，快速，适用于增效黄连素胶囊的常规分析．     

双波长等吸收紫外分光法测定玻璃体内苏拉明浓度

[目的]设计并论证检测玻璃体内苏拉明质量浓度的双波长等吸收紫外分光法.[方法]25只白兔摘除眼球冷冻后获取玻璃体,经过匀浆、沉淀、稀释等系列预处理后首先检验正常兔眼玻璃体个体差异性及紫外分光法测定玻璃体内苏拉明浓度的方法学特异性.接着建立标准曲线方程,考察检测方法的精密度和准确度,确立最低检测定量限,最后检测苏拉明在玻璃体内的样品稳定性.[结果]选取261 nm和269 nm两波长,全部6个个体及混合玻璃体的吸光值差△A(A261-A269)介于±0.002之间;外加高、低浓度苏拉明的曲线以及实际注药的高、低浓度苏拉明曲线与空白玻璃体的曲线走势一致且位于其上,各曲线的波峰波谷位置未见偏移;标准曲线方程为y=4 234 x 2,r=0.999 1;次低、中浓度、次高标准浓度点的日内相对标准差(RSD)分别为13.16%、9\67%、10.35%,日间RSD分别为17.59%、10.09%、11.11%,相对回收率分别为:(95.89±0.08)%、(96.69±0.07)%、(97.43±0.01)%;设计标准曲线的最低质量浓度45μg/mL;其日内、日间相对标准差分别为14.14%、15.94%,检验回收率为(94.92±0.01)%;常温组样品,8 h及以内稳定性尚好,之后不稳定.低温组及3次冻融组稳定性良好.[结论]在给定条件下,白兔玻璃体的个体差异可以忽略,双波长等吸收紫外分光法检测玻璃体内苏拉明浓度的方法学特异性好,精确度、准确度、灵敏度和样品稳定性符合规定要求,因此用该方法测定的玻璃体内药物浓度结果可靠.     

5-Br-PADAP催化光度法测定锰的研究

实验中发现Mn（Ⅱ）能够催化5-Br-PADAP与过氧化氢之间的氧化还原反应，并找到了Mn^2＋浓度与催化褪色反应速度间的线性关系，线性浓度范围为0．5-10ng／mL，最小检出浓度为0．2ng／mL。方法灵敏度高，选择性好。     

阿苯达唑脂质体中磷脂含量测定

目的：建立阿苯达唑脂质体中磷脂含量的测定方法。方法：利用可见分光光度法测定，检测波长485nm。结果：磷脂在0.01-0.1mg/ml浓度范围内呈现良好的线性关系（r=0.9993)。平均回收率为99.84%。结论：本方法灵敏，准确，简便，不受阿苯达唑共存的干扰，可用于本制剂的质量控制。     

紫外分光光度法测定SOD活性的应用及其意义

本文对SOD的紫外分光光度法测定进行了实用性研究。结果表明,本文方法具有用血量少,重现性好,快速、灵敏,试剂廉价等优点。西宁地区与平原地区人群的比较测定显示,前者SOD活性明显高于后者(P<0.01)。     

长春西汀片中阿朴长春胺酸乙酯含量的紫外分光光度法测定

采用紫外分光光度法测定长春丁汀片的含量。长春西汀片在２７４ｍｍ波长处有最大吸收，方法线性范围是１０－２０μｇ／ｍｌ，回归方程Ｙ＝３０．０９２Ｘ＋０．０５３３，ｒ＝０．９９９９，平均回收率为１０１．３８％（ｎ＝５，ＲＳＤ＝０．７１％）。     

新Vierordt法测定鲁南贝特片中两组分的含量

目的测定鲁南贝特片中氯唑沙宗和对乙酰氨基酚的含量。方法采用新Vierordt法不经提取分离直接测定两组分的含量 ,测定波长λ1=2 4 3.9nm ,λ2 =2 5 7.6nm。结果氯唑沙宗线性范围为 (8.4 7～ 4 2 .36 ) μg/ml,r=0 .9990 ,对乙酰氨基酚线性范围为 (8.83～ 4 4 .16 ) μg/ml,r =0 .9994 ,氯唑沙宗和对乙酰氨基酚的平均回收率和相对标准偏差分别为 10 0 .1%、0 .89%和 10 0 .6 %、0 .4 4 %。结论该方法简便、快速、重现性好 ,可消除两组分的相互干扰 ,结果满意。     

Triton X-100存在下分光光度法快速测定尿锌

尿样中加入Triton X-100后,在尿蛋白和其它物质存在下可用可见分光光度法直接而快速地测定尿锌.该法比目前其它方法更简便,尤其适合于临床快速分析.经40例正常人尿锌含量分析,结果((?)±s)为0.789±0.256μg/ml,与文献值基本一致.     

马蹄莲不同部位微量元素的含量测定

目的 探讨马蹄莲不同部位微量元素的含量。方法 用发射光谱法、原子吸收法测定了马蹄莲根、茎、叶中20种微量元素的含量。结果 马蹄莲根、茎、叶中含有12种人体必需微量元素，其中Fe、Mn、Zn、Si、Li、Ca等七种元素含量较高。结论 马蹄莲富含多种人体必需的微量元素，预示马蹄莲具很高的药理保健价值。