甘草饮片中微生物及真菌毒素污染状况考察

摘要：目的:研究甘草饮片微生物及其真菌毒素污染状况。方法:按照中国药典2020年版进行需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数、耐热菌数、沙门菌和真菌毒素检测。结果:甘草饮片中未检出沙门菌,需氧菌、霉菌和酵母菌及耐热菌污染菌数的对数值平均分别为4.38,2.14,2.58。真菌毒素共检出10批次,检出率为90.9%,涉及黄曲霉毒素B1（AFB1）、伏马毒素B1（FB1）、伏马毒素B2（FB2）、伏马毒素B3（FB3）及赭曲霉毒素A（OTA）等5种真菌毒素。结论:甘草中微生物污染状况较为严重,易感染而产生的真菌毒素为黄曲霉毒素、伏马毒素、赭曲霉毒素,参考国外的限量值,建议暂时拟定甘草饮片中OTA不得超过20μg·kg-1,AFB1不得超过10μg·kg-1,需氧菌总数不得超过105cfu·g-1,霉菌和酵母菌总数不得超过103cfu·g-1。     

1株黄河三角洲来源杂色曲霉A.versicolor BHT-72的次级代谢产物研究

目的 研究1株黄河三角洲盐碱地曲霉属真菌A. versicolor BHT-72的次级代谢产物及其生物活性。方法 采用硅胶柱层析、Sephadex LH-20葡聚糖凝胶柱层析、ODS柱层析、高效液相（HPLC）等色谱方法对该菌株的次级代谢产物分离纯化,并通过核磁共振（NMR）、质谱（MS）等方法,结合相关文献对比鉴定化合物结构;分别采用CCK8法和改良的Ellman法对化合物进行抗肿瘤和抗乙酰胆碱酯酶抑制活性的测试。结果 从A. versicolor BHT-72的大米发酵产物中共分离得到10个单体化合物,分别为diorcinol(1)、12-O-acetyl-sydowinin A(2)、sydowinin A(3)、13-O-acetylsydowinin B(4)、sydoxanthone(5)、3-formylindole(6)、尿苷（7）、zarzissine(8)、6-氨基嘌呤核苷（9）、6-氨基嘌呤脱氧核苷（10）。细胞毒活性测定结果显示,化合物1在质量浓度为30μg/mL时,对鼻咽癌细胞CNE-2的抑制率为65.0%,对非小细胞肺癌H1299和H520的抑制率分别为81...     

杂色曲霉素致人胚肺细胞p53及Ki-ras基因突变研究

为探讨中国恶性肿瘤高发区粮食中优势污染霉菌毒素－杂色曲霉素（Ｓｔｅｒｉｇｍａｔｏｃｙｓｉｎ,ＳＴ）的致癌作用,运用银染ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法分析了不同浓度的ＳＴ（１μｇ／ｍｌ和３μｇ／ｍｌ）对体外培养的人胚肺细胞恶性转化过程中抑癌基因ｐ５３第５、６、７、８显外子及癌基因Ｋｉ－ｒａｓ的突变情况。结果显示ＳＴ处理后第２２周,人胚肺成纤维细胞ｐ５３基因的第８外显子和Ｋｉ－ｒａｓ癌匀出现异常泳动带型,表明Ｓ     

烟曲霉硫氧还蛋白还原酶双抗体夹心ELISA法的建立及初步应用

目的建立检测烟曲霉硫氧还蛋白还原酶Gli T(thioredoxin reductase Gli T,TR)的双抗体夹心ELISA法,并用于几种真菌培养上清液中TR蛋白的检测。方法纯化鼠抗人TR单克隆抗体并进行辣根过氧化物酶(HRP)标记。以纯化羊抗TR多克隆抗体为包被抗体,HRP标记鼠抗人TR单克隆抗体为检测抗体,建立双抗体夹心ELISA法。用方阵滴定法确定包被抗体和检测抗体的最适浓度;对方法的精密度、特异性和最低检测限进行评价;比较分析其检测3种常见曲霉(烟曲霉、黄曲霉、黑曲霉)培养上清中天然TR蛋白的能力,并与3种常见假丝酵母菌(白假丝酵母菌、热带假丝酵母菌、光滑假丝酵母菌)作比较。结果方阵滴定的结果显示最适包被抗体浓度为1μg/m L,最适检测抗体的稀释度为1∶3 000。抗原最低检测限达2.25ng/m L。重组TR浓度为5 ng/m L和20 ng/m L时,批内和批间变异系数分别为8.57%、12.69%和6.73%、10.45%。阻断实验显示该法有较好的特异性,阻断率达84.7%。该法可以检出烟曲霉24 h培养上清中的天然TR,TR含量与烟曲霉菌丝含量呈正相关。本法与另2种曲霉和3种假丝酵母菌培养上清无交叉反应。结论成功建立并优化了检测烟曲霉TR抗原的ELISA法。该法具有良好的精密度及特异性,对烟曲霉感染有潜在的诊断价值。     

慢性肾病Ⅲ～Ⅴ期患者血清Klotho,OTA和Bcl-3表达水平与疾病预后的相关性研究

目的 研究慢性肾病(chronic kidney disease,CKD)Ⅲ～Ⅴ期患者血清Klotho,赭曲霉毒素A(OTA)和B细胞淋巴瘤因子3(Bcl-3)水平,分析三者的临床预后价值。方法 选取内蒙古包钢医院2018年1月～2019年1月期间收治的原发性CKDⅢ～Ⅴ期患者118例为研究对象(CKD组),以同期健康查体的健康者60例为对照组。应用酶联免疫吸附实验检测血清Klotho,OTA和Bcl-3表达水平。相关性分析采用Pearson相关分析。Kaplan-Meier生存分析不同血清Klotho,OTA和Bcl-3水平患者肾脏存活率的差异。单因素及多因素COX回归分析影响CKDⅢ～Ⅴ期患者肾脏结局事件发生的因素。结果 CKD组患者血清Klotho(2.54±0.39 mg/L)低于对照组(8.24±1.30 mg/L),血清OTA(2.11±0.40 mg/L),Bcl-3(81.25±13.67 pmol/L)高于对照组(0.40±0.13 mg/L,48.14±10.28 pmol/L),差异均有统计学意义(t=43.996,32.111,16.526,均P<0.05...     

提防爱潮湿的黄曲霉素

黄曲霉素即黄曲霉毒素,是一种由某些真菌产生的毒素,对人体的肝脏、肾脏可造成严重的损害。其一般在阴暗、潮湿、温热处较宜产生,而家中的厨房是“重灾区”。黄曲霉素最早被发现于1960年,是黄曲霉和寄生曲霉的次级代谢产物,有二+余种衍生物,其中黄曲霉素已毒性最强。黄曲霉素的毒性是砒霜的68倍,被世界卫生组织划为一类致癌物,其致癌剂量为1毫克,一次性摄入20毫克即可致命,且其稳定性较高,难以祛除。2004-2005年,在非洲的肯尼亚还暴发过大规模的黄曲霉素急性。     

真菌Aspergillus sp. HT-2次级代谢产物的研究

 目的 对曲霉属真菌Aspergillus sp. HT-2的代谢产物进行研究。方法 应用硅胶、ODS、Sephadex LH-20柱色谱、半制备HPLC等方法进行代谢产物的分离。根据波谱数据和理化性质鉴定化合物的结构。 结果 从中分离得到了13个化合物,分别鉴定为（-）-chaetominine （1）,fumiquinazoline J（2）,fumitremorgin C（3）,cyclotryprostatin B（4）,(3S,6S,12S,13S)-(+)-verruculogen TR-2（5）,gliotoxin（6）,bisdethio-bis(methylthio)gliotoxin（7）,didehydrobisdethio-bis (methylthio)gliotoxin（8）,helvolic acid（9）,pseurotin A（10）,麦角甾醇（11）,2,5-dimethylresorcinol（12）,胸腺嘧啶（13）。结论 所得化合物包括硫代二酮哌嗪类3个,喹唑啉类生物碱2个,吲哚类生物碱3个,螺内酰胺类生物碱1个,降三萜1个,甾体类等共13个化合物。所有化合物均为首次从该属陆地真菌分离得到。     

济南市售小米和玉米中赭曲霉素A污染状况研究

目的 了解济南市售小米和玉米中赭曲霉毒素A的污染情况。方法 采用竞争抑制酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测小米和玉米中赭曲霉毒素A的提取溶剂、检测条件、回收率等,并对其进行优化研究,并利用优化出的条件对济南市5个区市售小米和玉米中赭曲霉毒素A含量进行检测并评价。结果 含有5%氯化钠的60%甲醇水溶液对谷物中赭曲霉毒素A的提取效果较为理想,检测的所有样品中,小米、玉米赭曲霉毒素A检出率分别为41%和38%,其中,超市小米赭曲霉毒素A检出率（56%）明显高于集市小米（26%）(P＜0.05)。赭曲霉毒素A污染水平在0.40～4.45μg/kg之间,中位数为1.67μg/kg, 集市和超市出售的小米、玉米中赭曲霉毒素A污染水平均无统计学意义(P＞0.05)。本次检测所有样品中的赭曲霉毒素A含量均未超过国家规定的粮食中赭曲霉毒素A的限量标准。结论 济南市售的小米和玉米中均不同程度地存在赭曲霉毒素A污染,但污染水平均未超过国家标准。     

基于菌落形态、显微特征、DNA条形码三种策略鉴定僵蚕表面真菌

目的：检测北京市零售药店僵蚕饮片表面所含真菌的种类,为临床安全用药提供参考依据。方法：培养僵蚕表面真菌,进行纯化,获得单一菌株。结合真菌菌落形态、显微结构特征、DNA条形码三种方法鉴 定僵蚕表面真菌。结果：从僵蚕饮片表面共获得真菌227株,共计10种。其中的8种真菌得到准确鉴定结果,2 种真菌为未知菌株。结论：初步了解北京市零售药店僵蚕表面真菌情况,为临床安全用药提供参考依据。     

红曲霉发酵转化人参皂苷Rg_3的研究

目的探索红曲霉对人参的固态发酵工艺,将人参中部分主要人参皂苷转化为生物活性更强的稀有人参皂苷Rg_3(Rg_3)。方法采用静止暗培养方法进行微生物发酵;香草醛-冰醋酸法测定发酵前后人参总皂苷含量;HPLC法测定发酵前后Rg_3含量。结果红曲霉发酵人参的最优工艺参数为发酵时间6 d、发酵温度32℃、发酵pH 7.0、基质含水量50%。发酵6 d时,发酵产物人参总皂苷质量分数增加40%,Rg_3质量分数为6.047 mg/g,是未发酵人参的2.3倍。最终根据单体皂苷含量随发酵时间的变化趋势,推断稀有皂苷Rg_3的转化路径为人参皂苷Rb_1或Rb_2→Rd→Rg_3。结论建立的红曲霉固态发酵工艺合理,为稀有皂苷Rg_3定向化生产奠定了基础,更为日后体外制备稀有人参皂苷提供了理论支持。