高载药量雷公藤红素纳米混悬剂的制备及体外评价

目的以泊洛沙姆188(P188)为稳定剂制备高载药量的雷公藤红素纳米混悬剂(Cel-NSps),提高药物的溶解度、释放度和抗肿瘤药效。方法采用微型化介质研磨法和沉淀法制备Cel-NSps,通过动态光散射法、透射电子显微镜和X射线衍射(XRD)法对粒径、形貌和晶型进行表征并考察其稳定性,透析袋法考察体外释放情况;MTT法评价其对小鼠乳腺癌细胞4T1、人肝癌细胞HepG2、人皮肤恶性黑色素瘤细胞SK-MEL-28、人乳腺癌细胞MCF-7的细胞毒性。结果微型介质研磨法制备的Cel-NSps平均粒径为(215.7±0.7)nm,多分散指数(PDI)为0.17±0.02,Zeta电位为(-18.0±0.6)m V,平均载药量为(87.62±1.02)%,形状不规则,药物在纳米混悬剂中以晶形态存在;在磷酸盐缓冲液(PBS)、0.9%NaCl、5%葡萄糖、血浆和人工肠液中能稳定存在,但在人工胃液中不稳定;沉淀法制备的Cel-NSps平均粒径为(133.1±0.8)nm,PDI为0.13±0.02,Zeta电位为(-16.9±1.2)m V,平均载药量为(86.39±0.21)%,近乎球形,药物在纳米混悬剂中以无定形态存在,在各种生理介质中都能稳定存在,可用于口服或静脉注射给药。微型化介质研磨法制备的Cel-NSps呈匀速缓慢的释放,144 h累积释放54.40%;沉淀法制备的纳米混悬剂呈两相释放,前48 h快速均匀释放,之后非常缓慢释放,144h累积释放73.12%,而原料药144 h仅释放11.09%。MTT实验表明,Cel-NSps对4T1、Hep G2、SK-MEL-28、MCF-7细胞具有显著的生长抑制作用且呈剂量依赖性,对4种细胞的IC50在0.92～1.96μg/m L。结论以P188为稳定剂用2种不同方法制备了小粒径、高载药量的Cel-NSps,成功解决了溶解度差和释放度低的难题,且制备方法简单,易于工业化生产,为雷公藤红素的新药研发奠定了基础。     

人源抗HER2单链抗体/轻链恒定区/鱼精蛋白截短体融合蛋白的基因构建、表达及活性鉴定

目的:构建人抗HER2单链抗体(ScFv)/人轻链恒定区(Ck)/鱼精蛋白截短体(tP)融合蛋白基因,在大肠杆菌中表达、纯化并分析该融合蛋白的活性.方法:设计引物扩增人抗HER2单链抗体e23sFv基因和轻链恒定区编码序列(Ck),连接成ScFv/Ck片段,人工合成tP序列,连接于ScFv/Ck末端,构建成ScFv/Ck/tP融合基因,将其克隆入原核表达载体pET32a后,在大肠杆菌BL21(DE3)LysS中诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Western Blot鉴定后,用Ni-NTA螯合层析介质纯化.细胞ELISA分析ScFv/Ck/tP融合蛋白抗原亲合活性,凝胶迁移实验检测ScFv/Ck/tP融合蛋白与DNA的结合活性.结果:成功构建了人抗HER2 ScFv/Ck/tP融合基因,经IPTG诱导后在大肠杆菌中实现了可溶性表达.表达的ScFv/Ck/tP融合蛋白保持了与抗原的结合活性,同时具有结合DNA的能力.结论:ScFv与Ck,tP融合后,同时具有抗原和DNA结合活性,为该ScFv用于HER2阳性肿瘤的靶向基因治疗奠定了基础.     

壳聚糖用于金银花等絮凝澄清研究

目的 研究壳聚糖絮凝技术用于金银花、栀子药材的中药水提液精制的可行性.方法 考察两种澄清法的沉淀效果对主要有效成分含量影响,并对其稳定性进行了比较.结果 壳聚糖絮凝法与醇沉法同样能使药液澄清,前者保留药液中的有效成分比醇沉法多,壳聚糖絮凝法缩短生产周期,降低成本.结论 壳聚糖絮凝法可代替乙醇沉淀法用于金银花、栀子药材的中药水提液的澄清.     

2型糖尿病患者加用Glargine/NPH治疗对血糖波动影响的对照研究

目的 比较单用口服药空腹血糖控制不佳的2型糖尿病患者加用甘精胰岛素(Glargine)或中性精蛋白锌胰岛素(NPH)后对血糖波动的影响.方法 72例经口服抗糖尿病药治疗的2型糖尿病患者(FBG＞7.0 mmol/L,GHbA1e＞7.5%),按1∶1随机分成两组,分别加用Glargine或NPH联合治疗.以空腹微量血糖(mFBG)＜6.0 mmol/L为目标,并监测早餐后2 h微量血糖(mP1BG)、午餐后2 h微量血糖(mP2BG)和晚餐后2 h微量血糖(mP3BG),计算一天4次微量血糖的样本标准差(SD),以及最高和最低血糖之差(△).结果 两组比较Glargine组SD和△均较小(P＜0.05),而低血糖发生率无显著差异(P＞0.05).结论 单用口服药物治疗但血糖控制不佳的2型糖尿病患者加用Glargine比加用NPH更有利于血糖的平稳,且不增加低血糖的发生率.     

99mTC示踪法初步研究注射用NGF脂质体药代动力学

目的:使用~(99)mTc示踪初步研究注射用神经生长因子(NGF)脂质体在家兔体内药代动力学。方法:将NGF用99mTC标记,利用同位素示踪法和三氯乙酸(TCA)沉淀法测得NGF含量与放射性计数的线性关系,标记后的NGF制备成NGF脂质体,静脉注射至家兔体内,通过上述检测方法得到不同时段血浆中微量NGF浓度,使用3P87软件分析药代动力学参数并初步分析组织分布。结果:NGF脂质体静脉注射后的家兔体内代谢符合二隔室分布模型;按剂量40mg/kg静脉注射后,测得t1/2α=0.222h、t1/2β=2.526h、AUC=120.637ng/h·ml-1。结论:NGF脂质体有一定的缓释作用。     

HPLC法结合LC-MS法测定硫酸鱼精蛋白含量及肽段鉴定

目的:建立了一种同时测定硫酸鱼精蛋白中主成分纯度和含量的HPLC方法，并采用LC-MS法对肽段氨基酸序列进行鉴定。方法:HPLC方法采用的色谱柱为ThermoHypersil GOLD色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5μm),流动相A为0.1 mol·L^-1磷酸二氢钠溶液(用磷酸调节pH至1.8),流动相B为乙腈-0.1 mol·L^-1磷酸二氢钠溶液(用磷酸调节pH至1.8)(6.5∶93.5),梯度洗脱，流速1.0 mL·min^-1,柱温55℃,紫外检测波长为214 nm,进样量100μL。LC-MS法先采用馏分收集方式对各肽段进行提取富集，然后液质联用采用Waters ACQUITY UPLC Peptide BEH C₁₈色谱柱(15 cm×0.21 cm, 1.7μm),流速为0.2 mL·min^-1,流动相A为0.1%甲酸溶液，流动相B为5%乙腈-0.1%甲酸溶液，梯度洗脱；Thermo Q-Exactive Plus, ESI离子源，阳离子检测模式，雾化电压为...     

RIA和ELISA检测血清乙酰胆碱受体抗体对重症肌无力诊断的准确性和一致性

目的 研究放射免疫沉淀法(radioimmunoprecipitation assay, RIA)和酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)测定乙酰胆碱受体抗体(anti-acetylcholine receptor antibody, AChR-Ab)对诊断重症肌无力(myasthenia gravis, MG)的敏感度和特异度，并对不同方法检测AChR-Ab的一致性进行检验。方法 本研究采用回顾性的方法，收集在北京协和医院神经科MG专科门诊诊断的未行免疫治疗的MG和非MG对照血清，应用RIA和ELISA检测AChR-Ab,对两种检测方法的敏感度和特异度进行验证，评估两种方法的相关性和一致性。结果 共募集120例MG,其中眼肌型54例，全身型66例；非MG对照102例，其中其他神经肌肉病43例，自身免疫病9例，健康体检者50名。MG诊断方面，RIA和ELISA的灵敏度分别为75.00%和71.67%,特异度分别为99.01%和96.08%,阳性预测值分别为98.9%和95.56%,阴性预测值分别为77.09%和74.24%。S...     

茶多酚提取新方法

报道了一种有效地从茶叶中提取茶多酚的新方法－－ＡｌＣｌ３沉淀法。并与传统的有机溶剂萃取法进行了比较，结果表明，该法工艺简单易行，提取率达１０．５％，有效成分成量＞９９．５％。