大量人细胞滋养细胞和胎盘间充质干细胞的分离与纯化

背景：胎盘的细胞成分较复杂,其中所包含的滋养细胞在母胎免疫耐受过程中起重要作用,胎盘间充质干细胞具有多向分化潜能以及抑制淋巴细胞增殖的特性,常规分离方法通常难以获得大量且纯度较高的上述两种细胞。 目的：拟建立一次操作即可同时获得大量、较高纯度的滋养细胞和胎盘间充质干细胞的操作方案。 方法：人胎盘组织洗净剪碎,采用胰蛋白酶和DNAse Ⅰ共同消化,分3个阶段,每个阶段在恒温37 ℃下180 r/min消化2 min。重悬消化产物,200目筛网过滤后采用Percoll密度梯度分离液分离,分别收集滋养细胞层和胎盘间充质干细胞层。滋养细胞层以差速贴壁法去除成纤维细胞,胎盘间充质干细胞直接接种于75 cm2培养瓶中培养。观察胎盘组织消化情况,计数滋养细胞数量及其细胞角蛋白7的表达,观察胎盘间充质干细胞生长增殖、表型及成骨分化潜能。 结果与结论：经胰蛋白酶和DNAse Ⅰ消化后,胎盘组织仅剩少许残渣。差速贴壁后,滋养细胞数达(5.48±1.98)×108个,细胞角蛋白7阳性率为(90±4.36)%。胎盘间充质干细胞接种19~21 d达90%融合,细胞数为(1.96±0.24)×106个,强表达CD29,CD44和HLA-ABC,不表达CD34,CD45,CD14和HLA-DR,诱导后茜素红染色呈鲜艳橙红色,可向成骨细胞方向分化。提示采用胰蛋白酶和DNAseⅠ共同消化胎盘组织,并结合Percoll不连续密度梯度分离液分离细胞,可同时一次性获得大量的滋养细胞和较多的胎盘间充质干细胞,细胞纯度和活性均较好。     

516名正常人群印堂与准头部面色的可见反射光谱色度学调查研究

目的:检测正常人群印堂与准头部位面色的可见反射光谱色度学数据,分析正常人群面色的色度学参数结果特性。方法:于广东省高校学生中筛选了516名正常人作为研究对象,应用可见反射光谱法采集印堂与准头部面色的数据,进行CIE XYZ的颜色匹配三刺激值的计算,获得CIE 1964色度坐标、亮度、主波长、色纯度等色度学参数。结果:应用可见反射光谱数据反演于CIE 1964色度图,正常人群面色于印堂部的色度坐标x10为(0.3455±0.0071)、y10为(0.3483±0.0052);准头部的色度坐标x10为(0.3511±0.0065)、y10为(0.3518±0.0047);正常面色于印堂与准头部的亮度Y值分别为(30.28±4.80)、(29.60±3.80);正常面色于印堂与准头部的主波长值分别为(581.1±3.3)nm、(580.7±2.5)nm;正常面色于印堂与准头部的兴奋纯度值分别为(0.1377±0.0325)、(0.1634±0.0291)。结论:应用可见反射光谱法对色诊资料采集可提供一种标准的测色方法,对正常人群的印堂与准头部面色的色坐标、主波长与色纯度数据的检测与归纳总结,可以为病理性面色的病证诊断提供基本参照。     

Progress in study on calibration and purity determination method of impurity reference substance in drugs

药物中的杂质是否能被全面准确地控制,直接关系到药品的质量可控与安全性.《中国药典》多采用主成分自身对照法规定有关物质的限度,而国外药典中多用到杂质对照品进行检测,这也就要求杂质对照品符合一定的质量标准后方可使用.对照品的标定中常涉及的项目包括纯度测定、结构确证、含量测定等,考虑到杂质对照品的微量性,标定时选择合适的分析方法十分重要,如进行纯度测定可使用高效液相色谱法、差示扫描量热法等试样用量少的分析仪器.     

原代心肌细胞培养

目的:探讨SD大鼠乳鼠心肌细胞的分离及培养方法,并进行形态学观察。方法:取出生1～3 d的SD大鼠的乳鼠,胰蛋白酶和Ⅱ型胶原酶分别消化心肌组织,差速贴壁法分离心肌细胞,并加入适量BrdU纯化心肌细胞,显微镜下观察心肌细胞形态及纯度。结果:成功分离培养心肌细胞并观察其形态,计算存活率92%,纯度90%,2～3 d出现同步搏动。结论:胰蛋白酶联合Ⅱ型胶原酶消化可分离存活率较高的心肌细胞,用差速贴壁法并加入适量BrdU可纯化心肌细胞,使细胞搏动良好。     

脂质体载体材料卵磷脂的制备及质量标准研究

目的：制备脂质体载体材料卵磷脂。方法：以新鲜鸡蛋为原料提取并制备了卵磷脂,并对卵磷脂的纯度,含量,氧化程度以及质量标准进行考察。结果：试验制备的卵磷脂为色谱均一的物质,含量高于98％,其氧化程度低,各项质量指标均符合美国药典规定。结论：结果表明,试验制得的卵磷脂可作为制备脂质体的载体材料。     

力达霉素质控方法的研究Ⅰ—HPLC法

目的：用高效液相色谱法检测大分子蛋白类抗肿瘤抗生素力达霉素的纯度。方法：采用几种分离机制不同的高效液相柱对同一样品进行检测。结果：我们用这种方法检测出合格样品,并可以用来判断产品质量等级。结论：样品在这些不同分离机制的液相柱上分离出来的纯度均较高时,才能说明样品的质量好,高效液相色谱法简便,快速,精确,为样品分离的监测及成品的质量控制提供了保障和依据。     

6-氟-L-多巴合成及其对映纯度测定的研究

目的　合成6-氟-L-多巴(6-FDOPA) ,并测定其对映纯度。方法　以硝基藜芦醛(2)为原料,经亲核取代、还原碘化、手性相转移催化烷基化等多步反应得新化合物2-(2-氟-4,5-二甲氧苄基)-N-(二苯基甲叉)甘氨酸叔丁酯(8) ,8经水解反应制备终产物6-FDOPA ,用手性流动相和反相C₁₈柱的HPLC法测定其对映纯度。结果　合成6-氟-L-多巴总反应时间少于90min ,总产率约为33% ,对映纯度大于95%。结论　可大量合成6-FDOPA ,使自动合成6-[¹⁸F]-L-多巴成为可能。为6-[¹⁸F]-L-多巴的放射化学合成及其对映纯度的测定提供了可靠的技术     

天花粉蛋白有效组分的制备及纯度鉴定

报道了一种制备高纯度天花粉蛋白有效组分的方法。该方法简单，收率高，产品纯（电泳仅显示一条带）。     

硫酸长春地辛原料药纯度检验方法的研究

本文介绍了用ＴＬＣ和ＨＰＬＣ２种方法对硫酸长春地辛原料药进行纯度检验的实验。ＴＬＣ方法采用硅胶ＧＦ２５４为固定相，乙醚－甲醇－甲胺（２０：４：１）为展开剂，在紫外灯２５４ｎｍ下检视。ＨＰＬＣ法采用Ｃ１８化学键合硅胶为固定相，以０．０２ｎｍｏｌ／Ｌ磷酸二氢钾溶液（ｐＨ６．６）－甲醇（２０：８０）为流动相，在２６７ｎｍ波长下检测。结果表明，经优化条件后的ＴＬＣ和ＨＰＬＣ２种方法均可简便准确地检测硫酸长     

单色光不纯导致溶液偏离比耳定律的探讨

目的：研究单色光的纯度与Ｂｅｅｒ定律的关系。方法：通过数学证明,分析单色光的纯度对Ｂｅｅｒ定律的影响。结果：得出了单色光的纯度与Ｂｅｅｒ定律的数学关系式及比较方法,结论：单色光纯度越差,实际曲线偏离Ｂｅｅｒ定律越多。