人SNCA基因真核表达载体的构建及其在PC12细胞中的表达

目的:构建含人野生型及致病突变A30P、A53TSNCA基因的重组真核表达载体pEGFP-C3-SNCA,并通过稳定转染获得过表达人野生型及致病突变A30P、A53T α-synuclein(SNCA)的单克隆PC12细胞株.方法:通过RT-PCR方法扩增SNCA基因,T-A克隆后测序.在此基础上利用单核苷酸差异引物定点诱变法相继构建含SNCA基因编码区EcoR Ⅰ、BamH Ⅰ两酶切位点的同义突变及其致病突变G88C(Ala30Pro)、G209A(Ala53Thr)的重组真核表达载体pEGFP-C3-SNCA,并以PCR、双酶切、测序鉴定.以重组质粒pEGFP-C3-SNCA通过脂质体转染方法转染PC12细胞;以G418进行筛选;以有限稀释法进行亚克隆获得稳定过表达人野生型及致病突变A30P、A53T α-synuclein的单克隆PC12细胞株,并以稳定转染pEGFP-C3的PC12细胞作为对照组细胞,通过RT-PCR、Western blot及荧光显微镜鉴定各单克隆PC12细胞株.结果:PCR、酶切及测序证明重组真核表达载体pEGFP-C3-SNCA构建成功.RT-PCR、Western blot及荧光显微镜确认目的基因序列在PC12细胞稳定过表达.结论:成功地构建SNCA基因WT及A30P与A53T突变型的重组真核表达载体pEGFP-C3-SNCA;成功获得过表达人野生型及致病突变A30P、A53T α-synuclein的单克隆PC12细胞株.     

不同培养基对人杂交瘤细胞培养效应的影响

培养液是细胞培养的基本要素,选择适当的培养液是人杂交瘤技术成功的重要因素之一。我们分析比较了三种商品化培养液RPMI1640、DMEM、IMDM对分泌人单抗杂交瘤细胞的培养效应,包括对维持细胞的活力、增殖、克隆效率及抗体分泌等参数的观察比较,发现RPMI1640对人-(人×鼠)杂交瘤细胞“87-3”与人-鼠杂交瘤“87-3”培养效应最佳,为首选培养液。     

国内首报染色体新核型46,XY/47,XY,+8病例分析

病例报告 患儿。男,2岁半,因发商迟缓,智了、f骶下姚诊。系0■胎足月颞产,生后轻度窒息,全身矗鱼鳞状黑皮,7—3个月脱掉,6—7个月时患过肺欠,t‘\_不会说话,只会喊爸爸妈妃,营养j}1等. 查体::q 84cm,体讯12.5kg,头同47cm,胸围45cm,方型颅,前后囱已闭,头发稀,鼍棕黄色,发际低,前额突出,耳大而低位,眼距宽,内眦赘皮,左眼上内斜,鼻根宽而不低,鼻孔外翻,青蛙嘴,口角轻上斜,腭弓高,上切牙呈月牙形破损,典型蹼颈,双手小捐内弯,两足2—3趾短,足底有类似猫爪的特殊皮肤纹理.反应差,任性,智力低下.心肺正常,肝肋下3 cm,脾未触及,右侧睾丸下降至阴囊,…     

LDM琼脂与肠菌科微量快速生化数值鉴定的比较

卫矛醇、丙二酸盐、苯丙氨酸琼脂 (DMP)能在一种培养基中检查 3种生化反应。我们以DMP琼脂为基础加入赖氨酸脱羧酶 (LD)试验 ,制成赖氨酸卫矛醇 ,丙二酸盐琼脂 (LDM) ,克服了沙门氏菌属与枸橼酸菌属等难以鉴别的缺点 ,多次与肠菌科微量快速生化数值鉴定比较 ,结果较满意。     

促细菌快速生长繁殖因子的研究

目的 通过对促细菌快速生长繁殖因子即细菌培养基成分进行科学配比研究,促使细菌能快速生长繁殖,并在同一体系内同时对细菌进行鉴定防止耐药菌株泛滥作了初步探讨^[1,2]。方法 采用V型板体系内培养,并同时进行鉴定和药敏试验。结果 细菌鉴定报告时间缩短至4～8小时,与常规方法对比其中标准菌株符合率为100%,临床分离株符合率为98%。结论 初步建立了细菌检验的快速常规程序,使临床细菌学检验更好的为临床提供正确,及时的诊断依据。     

幽门螺杆菌分离培养技术的改进

探讨自制的改良布氏活性炭巧克力培养基,置厌氧罐蜡烛培养环境分离临床粘膜标本幽门螺杆菌(Hp)的检出率.结果表明66例粘膜标本中分离出Hp54株(81.8%),44株Hp滤液有24株(54.5%)具有细胞毒活性,其中26例消化性溃疡患者有18例(69.2%),18例慢性胃炎患者有6例(33.3%)为Hp(Toxin+)感染.结果提示通过对Hp生物学性状和毒素的检测结果证实,该法可用于临床粘膜标本Hp的常规分离培养.     

神经系统特异性蛋白质在新生儿缺氧缺血性脑病中的诊断价值

目的 评价缺氧缺血性脑病（HIE）新生儿脑脊液（CSF）和血浆中神经元特异性稀醇化酶（NSE）、S-100蛋白（S-100protein,S-100)、髓鞘碱性蛋白（MBP）、肌酸磷酸激酶脑型同工酶（CK-BB）等党课 经系统特异性蛋白质与新生儿HIE程度及预后的关系。方法 新生儿HIE患儿55例,无中枢神经系统疾患的患儿16例作为对照,取CSF和血浆检测上述4种神经系统特异性蛋白质水平。NSE、S-100、MBP用放射免疫试剂盒检测,CK-BB用酶法及琼脂糖电泳法检测,存活出院的患儿定期随访。结果 CSF的NSE、S-100、MBP、CK-BB及血浆NSE、CK-BB均与HIE程度相关,但只有CSF的神经系统特异性蛋白质才能较准确地反映患儿的远期预后,其中敏感性、特异性最高的指标是NSE和S-100。结论 CSF的NSE和S-100是判断HIE患儿脑损伤程度、预测远期预后的可靠指标。     

解脲支原体的生长条件研究

目的　探讨解脲支原体 (Uu)在液体培养基中的最佳营养条件和在固体培养基上形成菌落的最佳气体条件。方法　采用不同的pH值、不同的酵母及小牛血清含量配制解脲支原体培养基 ,将法国Merieum生产的培养基作对比研究。结果　解脲支原体生长最适pH值为 6.0～ 6.5 ;10 %酵母提取液、10 %小牛血清能加速解脲支原体的生长 ,90 %N2 、5 %～ 10 %CO2 能促进解脲支原体菌落生长。结论　本研究为改进解脲支原体的培养质量、开发高效的支原体培养基及药敏检测板提供实验依据     

亚稀褶红菇对大鼠致死毒性分级研究

目的 为了解亚稀褶红菇对大鼠的半数致死量（LD50）,进行毒性分级。方法 采用急性毒性试验经典方法寇氏法,设亚稀褶红菇175、248、350、495、700 mg/kgBW共 5个剂量组和阴性对照组(等体积生理盐水),每组大鼠12只,雌雄各半,腹腔注射,连续观察14 d大鼠的毒性反应和死亡情况。并对试验大鼠进行病理组织学检查。结果 根据试验结果,经计算,亚稀褶红菇对SD大鼠腹腔注射LD50为406 mg/kgBW,95%可信限为348～473 mg/kgBW。病理学检查显示大鼠心脏、肝脏、肾脏均有损害,随剂量增加损害程度加重。结论 按照大鼠急性毒性（LD50）剂量分级亚稀褶红菇为中等毒性,相当于人的致死量为5 g/人。     

铁皮石斛的组织培养研究

本文通过实验总结出组培铁皮石斛各个阶段的培养基。诱导培养基N_6 BA2.5mg/L;N_6 BA2.5mg/L IBAO.5mg/L;分化培养基N_6 BA1.5mg/L NAA1.2mg/L 5％香蕉汁;生根壮苗培养基N_6 NAA2.5mg/L 1O％土豆汁。