肝基质鼠尾胶对日本血吸虫培养细胞AKP和ACP影响的研究

目的 研究肝基质、鼠尾胶对日本血吸虫成虫培养细胞碱性磷酸酶(AKP)和酸性磷酸酶(ACP)活性的影响,筛选适合日本血吸虫细胞培养的基质。方法 将虫龄28d的日本血吸虫成虫细胞,接种于预先铺敷有肝基质和鼠尾胶的小盖玻片上常规培养,未铺敷基质者作对照。运用酶细胞化学方法,分别于培养5、14、21、35d对日本血吸虫成虫培养细胞进行AKP和ACP染色,显微镜下观察并拍照,图像分析仪测定其含量,并作统计分析。结果 铺敷的基质不同,培养细胞的AKP和ACP活性不同。AKP、ACP着色深浅均按对照组、鼠尾胶组、肝基质组依次加深。定量分析显示,培养14d内,肝基质组与鼠尾胶组细胞AKP活性明显高于对照组(肝基质组P<0.01;鼠尾胶组P<0.05);两基质组培养细胞之间差异也有显著性(P<0.05)。培养21d后,肝基质组细胞AKP活性分别高于鼠尾胶组和对照组(P<0.01);后两者培养细胞之间的AKP活性无明显差异(P>0.05)。培养5d细胞的ACP活性,肝基质组与鼠尾胶组明显高于对照组(P<0.05),两基质组相互比较差异无显著性(P>0.05);培养14d后,各组之间两两比较均有差异(P<0.05),肝基质组培养细胞ACP活性最强,鼠尾胶组次之,对照组最弱。结论 肝基质较为适合日本血吸虫培养细胞的存活与生长。     

长期体外培养日本血吸虫的体被及消化道的透射电镜观察

用透射电镜观察日本血吸虫人工转变童虫经841培养液培养130d及从动物感染获得成虫经851培养液培养23d后的虫体体被与消化道超微结构。雌雄虫体被结构较完整,基质中似无空泡化现象:感觉孔突与焰细胞结构正常。食道腔面高度皱褶;肠腔中的板层、脂滴及肠上皮基膜内陷小管等结构与前人报道正常虫体比较基本相似。说明这两种培养液对日本血吸虫所以具有生长发育或促进产卵的功效与血吸虫体被与消化道尚能维持其代谢功能有关。     

东方田鼠血清及其不同部分对日本血吸虫童虫的体外杀伤作用

目的 对东方田鼠血清及其不同部分对日本血吸虫童虫的体外杀伤的可能机制进行初步探讨。方法 将血清初步分离成含蛋白部分及分子量小于20kDa的小分子部分，并分别观察了东方田鼠全血清、去补体血清、蛋白及小分子血清成分对体外培养童虫的杀伤，此外，还观察了蜕皮素对东疗田鼠血清杀伤作用的影响。结果 东方田鼠热灭活去补体血清对童虫的杀伤显著低于正常血清；感染及正常东方田鼠血清小分子在第48h及72h表现出一定杀伤作用(30％)，而血清蛋白在24h就有显著杀伤，但杀伤作用略低于全血清；蜕皮素对东方田鼠血清的杀伤无明显影响。结论 补体在东方田鼠血清杀伤机制中有重要作用。血清蛋白为体外杀伤的主要成分，可能与小分子成分协同参与杀伤。     

脑型血吸虫病发病危险因素的病例-对照研究

目的 探讨脑型血吸虫病发病的危险因素。 方法 选取1999-2004年安徽省的37例脑型血吸虫病患者,分别与健康者、慢性血吸虫病及急性血吸虫病患者对照,对脑型血吸虫病发病相关的危险因素进行分析。 结果 脑型血吸虫病病例组与健康组的劳动强度、病前体质、病前经济、病前营养等4个因素;与急性血吸虫病组的癫痫史、过敏史、感染度等7个因素;与慢性血吸虫病组的感染度、感染次数、治疗次数等10个因素的差异具有统计学意义（P＜0.05）。3组多因素分析至少有两组相同的因素进入logistic回归模型,差异具有统计学意义的变量分别为感染次数、感染度、癫痫史、过敏史和家庭挫折等5个因素。 结论 血吸虫感染程度、治疗状况是脑型血吸虫病发病的主要危险因素,患者的体质和社会心理因素对该病有一定影响。     

The schistosomulicidal activity and the production of IL-1 and TNF-α by peritoneal macrophages from infected mice and their potentiation by muramyl tripeptide-phosphatidyl ethanolamine (MTP-PE) treatment

Production of TNF-α and IL-1 by adherent peritoneal exudate macrophages (APEM) was monitored for 20 weeks in Schistosoma mansoni infected mice in comparison to their schistosomulicidal activity. LPS-triggered IL-1 and TNF-α production by APEM peaked 10 weeks post infection (p.i.) and declined thereafter. The schistosomulicidal activity of APEM also peaked after 10 weeks but remained elevated thereafter. Infected mice were also treated with the immunostimulator liposomal muramyl tripeptide-phosphatidyl ethanolamine (MTP-PE) 6 or 10 weeks p.i., and their APEM were tested 4 weeks later. APEM from such treated animals showed elevated IL-1 and TNF-α production when treatment commenced 6 weeks p.i., while their schistosomulicidal activity increased when treatment commenced either 6 or 10 weeks p.i. The L-arginine inhibitor, N^G monomethyl arginine, markedly inhibited the schistosomulicidal activity but not the IL-1 and TNF-α production of APEM. Our results show that monokine production increases during the acute phase of infection and declines during its chronic phase, while macrophage schistosomulicidal activity remains constant throughout. Furthermore, TNF-α or IL-1 may play a minor role in APEM mediated killing of schistosomula.     

Antigenicity and immunogenicity of the tegumental outer membrane of adult Schistosoma mansoni

The tegumental membranes of adult Schistosoma mansoni have been isolated and purified and shown to function as potent immunogens; they elicit an essentially identical immune response in rabbits, rats and mice. Anti-membrane antisera harvested from these animals consistently recognized common antigens, of relative molecular weight (mol. wt) 32 000 and 20 000, on the surface of young schistosomula, 5 day old lung worms and adult worm purified membranes. An additional molecule of 25 000 mol. wt was present on the surface of lung worms and adult worm membranes and was specifically recognised by serum from chronically infected mice and by serum from rabbits inoculated with adult worm purified membranes. The concept of antigenic identity between developmental stages that parasitize the mammalian host was further substantiated by the observation that anti-membrane antiserum bound to live schistosomula, lung worms and adult parasites as measured by indirect immunofluorescence. In complement-mediated in vitro cytotoxicity assays, the sera from rabbits inoculated with either adult worm purified membranes, or the 32 000 mol. wt antigen partially purified from adult worm membranes, mediated levels of schistosomula killing as high as those obtained with sera from chronically infected mice. These rabbit antisera also promoted eosinophil adherence and killing of newly transformed schistosomula, but lung stage parasites, despite binding the anti-membrane antiserum, were refractory to both humoral and cellular cytotoxicity. The significance of antigenic identity is discussed in relation to the concept of concomitant immunity.     

不同地区日本血吸虫成虫组分蛋白及其感染鼠肝病变差异的研究

应用SDS-PAGE对我国四川、湖南、江苏和浙江四地日本血吸虫成虫组分蛋白进行电泳分析,表明各地日本血吸虫AWA组分蛋白既有共同成分又存在相互之间及雌、雄虫之间的质与量的差别。应用常规病理切片技术,对相应感染小鼠肝内虫卵肉芽肿进行比较观察,显示江苏地区日本血吸虫感染鼠肝虫卵肉芽肿反应增长比四川、湖南者为小(P<0.01),浙江者也较四川、湖南者为小(P<0.05),而江苏与浙江、四川与湖南者之间无显著性差异(P>0.05);江苏者纤维化程度似较四川、湖南者明显。实验结果为了解我国不同地区日本血吸虫之间是否有所不同,提供了生化和病理方面的参考依据。     

日本血吸虫疫苗候选分子Calpain的原位表达

目的　探讨日本血吸虫疫苗候选分子———钙离子激活的中性蛋白激酶 (Calpain)在日本血吸虫体内的表达部位及其特征。方法　用重组纯化的Calpain抗原免疫大鼠 ,制备抗Calpain血清 ,从感染鼠灌流分离的日本血吸虫成虫被切片 ,用羊抗大鼠IgG抗体作为二抗进行免疫组织化学分析 ,观察Calpain蛋白在日本血吸虫成虫体内的表达部位。 结果　重组Calpain抗原免疫大鼠后 ,产生了一个极高的抗Calpain特异性抗体 ,并在日本血吸虫成虫切片上识别自然的日本血吸虫Calpain ,且大多数表达在成虫真皮层。结论　日本血吸虫钙离子激活的中性蛋白激酶 (Calpain)主要分布在成虫肌肉和真皮层 ,提示Cal pain可能是日本血吸虫的一个疫苗候选分子 ,并提示这个分子的重组抗原有可能应用于血吸虫病诊断。     

IMMUNOSCREENING OF SCHISTOSOMA JAPONICUM EGG cDNA LIBRARY

目的：从日本血吸虫虫卵文库中筛选并鉴定出与免疫诊断及免疫预防有关的基因克隆。方法：采用Ｓ．ｊＳＥＡ超免疫兔血清对日本血吸虫卵文库进行筛选。先去除抗大肠杆菌抗体，经三轮筛选得到１２个阳性克隆，然后，用辅助噬菌体进行体内剪切，经抗菌素平板筛选含重组质粒的阳性菌落，每个菌落分为２份，一份进行ＰＣＲ扩增以测定插入片段的大小。另一份用于制备纯质粒ＤＮＡ模板，进行ＤＮＡ序列测定，通过ＧＣＧ软件对所得ＤＮＡ序列与ＧｅｎＢａｎｋ中的序列进行同源性比较。结果：共筛得１２个阳性克隆，ＰＣＲ后测得其长度大多为１．２ｋｂ，其中８个与Ｓ．ｊ热休克蛋白７０的基因同源，２个与Ｓ．ｊ钙网蛋白同源，１个与Ｓ．ｍｉｍｍｕｎｏｐｈｉｌｉｎ同源，１个与Ｓ．ｊ２３ｋＤａ蛋白同源。结论：本研究首次报道用抗ＳＥＡ血清对日本血吸虫虫卵文库的筛选结果，所得的１２个阳性克隆均为编码日本血吸虫免疫诊断及预防有关的基因。     

一氧化氮对感染日本血吸虫小鼠肝脏纤维化程度的影响

目的　研究一氧化氮 (NO)对感染日本血吸虫小鼠早期肝脏纤维化的影响。方法　 NMRI小鼠感染日本血吸虫后第 2 3天起 ,连续用诱导型一氧化氮合酶 (i NOS)的抑制剂氨基胍(Am inoguanidine,AMG)处理小鼠 ,同时设未经抑制的对照组 ,分别在感染后第 38、4 5天观察小鼠肝脏的病理变化。天狼猩红染色 -偏振光显微镜观察并结合图像分析的方法 ,分析肝脏中 、 型胶原的动态变化 ;化学显色法检测肝脏匀浆中能间接反映肝脏纤维化程度的羟脯氨酸的浓度。结果　感染后 38d,肝脏中 、 型胶原的增生程度及 、 型胶原面积比值明显高于对照组 ,但羟脯氨酸的含量与对照组相比差异无显著性 (P>0 .0 5 ) ;感染后 4 5 d,肝脏中 型胶原的增生程度和 、 型胶原面积比值明显高于对照组 ,AMG处理组中羟脯氨酸的含量较对照组高 (P<0 .0 5 )。结论　 NO可抑制日本血吸虫感染小鼠肝脏早期纤维化