日本血吸虫疫苗候选分子的基因克隆,表达及特性鉴定

本研究用日本血吸虫（Ｓｊ）成虫原抗原免疫的兔血清从日本血清吸虫中国大陆株成虫ｃＤＮＡ库筛选出Ｓｊ２２．６基因克隆；用根据曼氏血吸虫２３ｋＤａ膜抗原（Ｓｍ２３（的编码基因设计的引物，以ＰＣＲ法从日本血吸虫成虫ｃＤＮＡ库扩增出Ｓｊ２３基因；用根据日本血吸虫菲律宾株的磷酸丙糖异构酶（ＳｊＴＰＩ）基因设计的引物，以ＲＴ－ＰＣＲ从日本血吸虫中国大陆株成虫ｍＲＮＡ扩增出ＳｊＴＰＩ基因；并测得了上述３个基因的核     

日本血吸虫疫苗候选抗原的研究进展

血吸虫病是由复殖寄生吸虫引起的以虫卵肉芽肿和肝纤维化为主要特征的免疫性疾病 ,呈全球分布 ,在 74个国家大约 6亿人受到威胁 ,2亿人受到不同程度的感染 ,其中约 1 .2亿是现症患者 ,0 .2亿出现严重并发症。我国日本血吸虫病的防治工作50年来虽取得很大成绩 ,但仍然未能被完全控制。究其原因日本血吸虫是一种人兽共患寄生虫病 ,终末宿主繁多 ,且钉螺广泛存在 ,使该病难以彻底阻断传播 ;此外 ,由于药物的频繁应用 ,可能已产生抗药性 ,有些患者不能得到有效治疗 ;加上重复感染及反复化疗可导致经费严重不足 ,所有这些因素促使人们研究控制日…     

日本血吸虫疫苗候选分子的基因克隆、表达及特性鉴定

本研究用日本血吸虫（Sj）成虫抗原免疫的免血清从日本血吸虫中国大陆株成虫cDNA库筛选出Sj22．6基因克隆；用根据曼氏血吸虫23kDa膜抗原（Sm23）的编码基因设计的引物，以PCR法从日本血吸虫成虫CDNA库扩增出Sj23基因；用根据日本血吸虫菲律宾林的磷酸丙糖异构酶（SjTPI）基因设计的引物，以RT－PCR从日本血吸虫中国大陆株成虫mRNA扩增出SjTPI基因；并测得了上述3个基因的核苷酸序列；通过与国外有关单位合作研究，获得日本血吸虫中国大陆株肌球蛋白的62kDa肽段（Sj62）的编码基因克隆．Sj22．6、SjTPI及Sj62的编码基因巴克隆入质粒pGEX并获得表达；Sj23基因克隆入杆状病毒，在家蚕幼虫体内获得表达．用Glutathione－Sepharose4B（GS4B）已纯化出重组的Sj22．6（rSj22．6）、Sj62（rSj62）及SjTPI。Sj22．6、Sj23、SjTPI和Sj62基因的表达产物均可被Sj重感染的兔血清识别；用rSj22．6免疫家兔和小鼠，均可诱生明显升高的IgG抗体，其可特异地识别rSj22．6，还可识别成虫抗原中天然的相应分子，但不识到虫卵抗原中任何成份．用rSj22．6对昆明鼠及BALB／C小鼠分别作免疫攻击实验，前者可产生38.93％的减虫率，后者可产生32．1％－35.27％的减虫率和28．4％的总体减卵率。Sj22．6／Sj26GST融合蛋白可诱导BALB     

日本血吸虫Calpain序列分析及DNA疫苗体系的构建

目的　探讨日本血吸虫疫苗候选分子 -钙离子激活的中性蛋白激酶 (Calpain)在抗日本血吸虫感染的保护性作用及其保护性免疫机制。方法　从日本血吸虫成虫中提取RNA ,用RT -PCR扩增Calpain含多个B ,T细胞表位的片段 ,引物中包含BamHI和EcoRI的酶切位点 ,PCR扩增产物经纯化后TA克隆 ,转化的阳性TA克隆经PCR筛选后 ,液体培养大肠杆菌并回收质粒DNA ,质粒DNA经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切 ,目的基因亚克隆到真核表达质粒pVAC载体 ,构建 pVAC -Cal pain真核表达体系 ,转化的阳性亚克隆经PCR筛选 ,液体培养大肠杆菌并回收pVAC -Calpain质粒DNA ,质粒DNA经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切和DNA序列分析鉴定被亚克隆的Calpain基因。 结果　RT -PCR从日本血吸虫RNA中扩增了 4 5 3bp的Calpain基因 ,经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切和DNA序列分析鉴定Calpain基因被克隆到真核表达质粒 pVAC载体。 结论　日本血吸虫疫苗候选分子Calpain的DNA疫苗体系的建立将有助于解析这个疫苗候选分子抗日本血吸虫感染的保护性免疫作用及保护性免疫机制。     

日本血吸虫候选疫苗研究现状与展望

血吸虫病疫苗的研制工作已纳入WHO和我国主要疾病防治规划并取得了显著进展。近年来开展的血吸虫免疫机制和血吸虫基因组研究对血吸虫疫苗的研制起了积极的推动作用。本文主要对血吸虫蛋白疫苗、DNA疫苗和多价疫苗候选抗原的研究进展作综述。     

日本血吸虫DNA疫苗的研究进展

血吸虫病是严重危害人类健康的人畜共患寄生虫病,疫苗是预防控制血吸虫病的重要手段。该文概述了日本血吸虫DNA疫苗的优点、候选抗原、联合免疫、免疫机制及DNA疫苗存在的问题和展望。     

日本血吸虫疫苗候选分子的研究进展

日本血吸虫病是一种威胁6亿人身体健康的严重寄生虫病，感染人口2亿，患者2千万左右。据2001年调查，我国现有9千万人口受日本血吸虫病的威胁，有82．1万日本血吸虫病患者，其中慢性患者79．5万。目前治疗日本血吸虫病的主要方法是化疗药物吡喹酮的应用，但药物虽能降低感染率和发病率，却不能阻断传播，对已经形成的虫卵肉芽肿没有作用，再次接触疫水后会再感染。     

Calpain抗体介导的对日本血吸虫童虫的细胞毒作用

目的　探讨日本血吸虫疫苗候选分子———钙离子激活的中性蛋白激酶 (Calpain)的保护性免疫力和免疫保护性机制。方法　用重组纯化的Calpain抗原免疫小鼠 ,制备抗Calpain血清 ,将机械转化的日本血吸虫童虫和同种鼠激活的嗜酸性粒细胞共同培养 ,观察细胞对血吸虫童虫的黏附及对童虫的杀伤效果。结果　重组Calpain抗原免疫小鼠后 ,产生了极高的抗Calpain特异性抗体 ,并介导了同种鼠的嗜酸性粒细胞对日本血吸虫童虫的黏附。在 3 7°C ,5 %CO2 培养 48h后 ,3 3 .8%的日本血吸虫童虫被杀死 ,与对照组 14 .5 %的自然死亡率相比显著增高 (P <0 .0 1)。结论　Calpain特异性抗体介导了对日本血吸虫童虫的细胞毒作用 ,提示Calpain可能是日本血吸虫的一个疫苗候选分子 ,该分子的重组抗原有可能应用于血吸虫病诊断     

日本血吸虫多价分子疫苗的保护性免疫力研究

本实验将从日本血吸虫成虫分离纯化出的２８ｋＤａ、３１／３２ｋＤａ及９７ｋＤａ蛋白混合组成多价分子疫苗免疫小鼠,再行攻击感染,观察其保护性免疫力。结果：疫苗加佐剂组成虫减虫率,肝组织减卵率及肠壁组织减卵率分别为５０．３％、７２．０％和８１．５％,均显著高于对照组（Ｐ〈０．０１）。     

日本血吸虫候选抗原基因的获取与鉴定

抗原基因的研究是研制日本血吸虫病疫苗的基础。对日本血吸虫抗原基因的获取和鉴定是进行免疫保护性实验和制备疫苗的首要工作。1候选抗原基因的获取目前获取日本血吸虫抗原基因的途径主要有两条:一是从基因组文库中筛选。这是获得抗原目的基因最常用的方法。构建完整的基因组文库是其关键环节。二是根据已掌握的抗原和抗原基因信息,利用分子生物学技术及生物信息学方法人工合成候选抗原的目的基因。当获知某个蛋白质抗原分子的氨基酸序列之后可根据该序列推断出其可能的核苷酸序列并人工合成简并寡聚核苷酸引物,通过PCR技术扩增来获得相…     

Paramyosin: a candidate vaccine antigen against Schistosoma japonicum

Paramyosin, a 97 kDa myofibrillar protein, is a candidate vaccine antigen for prevention of infection with the human parasite Schistosoma mansoni . To determine if paramyosin would also induce protection against Schistosoma japonicum , paramyosin was biochemically purified from S. japonicum adult worms. SDS-PAGE demonstrated a single protein with a molecular weight of 97 kDa. In four separate experiments, vaccination of mice with S. japonicum paramyosin without adjuvant induced significant resistance (62%–86%, P < 0.001) against cercarial challenge as compared to controls. These data suggest that S. japonicum paramyosin may represent a candidate vaccine for immunization against schistosomiasis japonica.     

日本血吸虫各期虫体的酶联免疫电转移印迹分析及抗原定位研究

本文采用酶联免疫电转移印迹技术（EITB）分析、比较日本血吸虫不同发育时期虫体特定的组分蛋白分子、雌虫、雄虫和虫卵抗原分别与相应的雌、雄虫和虫卵免疫血清反应呈现17、20和8条蛋白带,这三种抗原与其它不同时期虫体免疫血清反应,三者间及彼此间均出现交叉反应,而雌、雄虫和虫卵抗原与其它寄生虫感染血清作用没发现有叉及反应。应用间接荧光抗体试验（IFA）和免疫酶染色试验（IES）对日本血吸虫抗原进行定位研究,其结果相似。血吸虫主要抗原物质来源于成虫表皮、肠上皮和卵内的毛蚴.     

重组日本血吸虫铁蛋白的表达纯化及诱导小鼠保护性免疫研究

目的　表达、纯化重组日本血吸虫铁蛋白 ,观察其免疫小鼠后抗日本血吸虫的免疫保护作用。方法　用基因重组技术 ,将日本血吸虫铁蛋白基因亚克隆至表达载体 pGMC上 ;在IPTG诱导下 ,重组日本血吸虫铁蛋白得到高效表达 ;用电泳层析法分离纯化日本血吸虫铁蛋白 ;用SDS -PAGE和Western -blot鉴定表达纯化产物 ;用纯化的重组铁蛋白免疫小鼠三次 ,分别在 0、2、4周进行。第 6周每鼠经腹部感染 4 0± 1条日本血吸虫尾蚴。 4 2天后剖杀冲虫 ,计数虫数及肝卵数。结果　纯化的重组铁蛋白分子量为 4 0kD ,具有较好的免疫原性 ,能被日本血吸虫感染兔血清识别。与对照组相比 ,纯化重组铁蛋白免疫小鼠组的减虫率为 2 4 5 % ,减卵率为 4 5 8%。结论　重组日本血吸虫铁蛋白不仅在大肠杆菌中得到高效表达 ,而且纯化的铁蛋白分子能诱导抗日本血吸虫病的保护性免疫。     

SIEA免疫后的感染血清体外培养日本血吸虫未成熟卵鉴定抗卵胚胎发育候选分子

目的筛选ＳＩＥＡ抗卵胚胎发育的候选分子。方法小鼠再感染日本血吸虫尾蚴用ＳＩＥＡ免疫后４９天,实验组收集该免疫血清培养日本血吸虫未成熟卵。对照组用未免疫小鼠相同天数感染的血清培养,２天后,收集虫卵,作免疫沉淀和ＳＤＳ—ＰＡＧＥ分析。结果发现实验组仅出现５４ＫＤ。结论日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原中５４ＫＤ分子可能位于未成熟卵膜或基质中,由未成熟卵所释放,为ＳＩＥＡ诱导保护性免疫中主要的效应分子     

日本血吸虫与曼氏血吸虫的致病差异

曼氏血吸虫和日本血吸虫是全球范围内两种主要的肠道血吸虫病病原体,所致基本病理均为虫卵引起的肝脏肉芽肿和纤维化,但两者在产卵方式以及肉芽肿的组成细胞等方面均存在明显差异。 目前,我国的血吸虫病研究主要以日本血吸虫病为对象,国外主要以曼氏血吸虫病为对象,而介绍两种血吸虫致病差异的综述较少。 为更好地理解两种血吸虫的致病差异,本文从血吸虫的基因组和进化路径、幼虫迁移、成虫寄生位置及产卵方式、局部组织病理、肉芽肿的形成机制以及肉芽肿的细胞组成等 6 个方面对日本血吸虫和曼氏血吸虫的致病差异进行了综述。     

日本血吸虫血红素加氧酶活性及免疫组化研究

目的　探讨日本血吸虫成虫是否具有血红素加氧酶 (HO)活性 ,并对其进行免疫学定位。方法　从日本血吸虫成虫匀浆中提取微粒体蛋白 ,与HO的特异性底物氯化血红素共孵育 ,观察血红素的降解情况及 pH值对降解活性的影响。制作日本血吸虫成虫组织切片和培养细胞涂片 ,用间接免疫荧光法及碱性磷酸酶免疫细胞化学试验研究HO在血吸虫体内的分布。结果　成虫的微粒体蛋白可在体外将血红素降解为胆红素 ,酶活性为 5 6 7nmol/(mg·min) ,最适 pH为 8 7。成虫组织切片显示 ,特异性荧光在虫体内呈散在性分布 ,细胞碱性磷酸酶免疫染色试验表明该酶位于成虫的细胞质。结论　首次证实日本血吸虫具有HO。     

Molecular and serological characteristics of the glutathione S-transferases of Schistosoma japonicum and Schistosoma mansoni

When aqueous extracts of Schistosoma japonicum and S. mansoni adult worms are passed over columns of glutathione-conjugated agarose, two molecular species of Mr 26,000 and Mr 28,000 are detected in eluates as analysed by SDS-PAGE, these eluates having glutathione S-transferase (GST) activity. The molecules, termed Sj26 and Sj28 from S. japonicum and Sm26 and Sm28 from S. mansoni, can be immunogenic in rabbits or mice and appear not to be linked together as subunits of GST heterodimers. The elution profile of SjGST (Sj26+Sj28) from glutathione columns resembles that of SmGST (Sm26+Sm28) and, by peptide mapping, radioiodinated Sj26 and Sm26 are related as are the two Mr 28,000 molecules. Similarities between radioiodinated Sj28 and Sm28 are also obvious on two-dimensional gel electrophoresis with some differences being observed between Sj26 and Sm26. The Mr 28,000 molecules are more prominent than the Mr 26,000 molecules and, although Sj28 and Sm28 is a poor immunogen in mice, immunological cross-reactivity between Sj28 and Sm28 is generally more readily detected than that between Sj26 and Sm26. Whether experimental vaccination against schistosomiasis japonica and schistosomiasis mansoni reported with cloned GSTs can be improved by incorporation of both Mr 28,000 and Mr 26,000 species into the vaccine remains to be determined. On this point, the present data suggest that vaccination of mice with Sj26 plus Sm28 should be a useful means of increasing antibody responses to the GSTs of S. japonicum.     

南京血吸虫扫描电镜观察

目的用扫描电镜观察南京血吸虫体表形态和结构。方法用南京血吸虫的阳性钉螺逸出的尾蚴感染兔,每兔1 200条,感染45-80 d后解剖,获得的血吸虫用4％戊二醛固定。然后按扫描电镜观察要求,清洗、固定、脱水、干燥、镀金,用SX-40扫描电镜进行观察。结果大雄虫背中部体表有粗大的嵴和深的凹陷,腹中部有小棘。小雄虫整个背部和腹部均有小棘。大雌虫体表均有小棘。小雌虫背部和腹面均有小棘,但形状不同,旋转的尾部在同一平面显示出2种体棘;腹吸盘可见轮辐状。雌雄虫体表均可见有纤毛和没有纤毛的感觉乳突。结论南京血吸虫体表存在着与日本血吸虫不同的形态和结构。考虑为一新种血吸虫。