ADP-核糖聚合酶、补体C3及调节性T细胞与系统性红斑狼疮患者病情活动度的关系

目的探讨ADP-核糖聚合酶(PARP)、补体C3及调节性T细胞与系统性红斑狼疮(SLE)患者病情活动度的关系。方法选取2014年10月至2015年10月上海中医药大学附属曙光医院收治的84例SLE患者为SLE组,另选取同期80例正常体检者为对照组,应用蛋白印迹法测定PARP水平,散射比浊法测定补体C3水平,免疫荧光法测定外周血CD_4~+CD_(25)~+调节T细胞百分率、叉头蛋白P3抗体(FoxP3~+)调节性T细胞,应用酶联免疫吸附测定检测白细胞介素10(IL-10)及转化生长因子β_1(TGF-β_1)水平。结果 SLE组患者FoxP3~+调节性T细胞、IL-10水平显著高于对照组[(11.09±1.24)%比(6.23±1.01)%、(21.77±2.36)mg/L比(12.98±2.02)mg/L],而PARP、补体C3、CD_4~+CD_(25)~+调节性T细胞、TGF-β_1水平显著低于对照组[(5.24±1.02)mg/L比(7.84±2.11)mg/L、(0.84±0.22)g/L比(1.26±0.36)g/L、(3.21±0.34)%比(5.83±0.58)%、(3.62±0.52)ng/L比(4.89±1.56)ng/L,P<0.05]。重度活动性SLE组患者FoxP3~+调节性T细胞、IL-10水平显著高于轻中度组及稳定组,而PARP、补体C3、CD_4~+CD_(25)~+调节性T细胞、TGF-β_1水平显著低于轻中度组及稳定组(P<0.05)。SLE合并肾功能损害者FoxP3~+调节性T细胞高于SLE肾功能正常者[(12.60±0.48)%比(10.08±0.50)%],而补体C3水平、PARP、CD_4~+CD_(25)~+调节性T细胞显著低于SLE肾功能正常者[(0.72±0.24)g/L比(0.94±0.32)g/L、(4.22±0.78)mg/L比(5.94±0.82)mg/L、(2.48±0.34)%比(3.69±0.26)%,P<0.05]。FoxP3~+调节性T细胞、IL-10与SLE活动指数呈正相关(r=0.458,0.725,P<0.05),而PARP、CD_4CD_(25)调节性T细胞、补体C3、TGF-β_1水平与SLEDAI呈负相关(r=-0.412,-0.522,-0.623,-0.522,P<0.05)。结论 PARP、补体C3及调节性T细胞与SLE活动度有密切的关系,可作为SLE病情发生及进展的评价指标。     

耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌的OXA酶基因研究

目的 研究广东省中山市中医院分离耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌(CRAB)耐药性、苯唑西林(OXA)酶基因及流行特性。方法 收集广东省中山市中医院2012年7月至2013年12月临床分离40株CRAB,采用纸片扩散法(K-B法)药敏试验,改良Hodge试验筛查碳青霉烯酶;用聚合酶链式反应(PCR)法对β-内酰胺酶基因oxa-23、oxa-24、oxa-51和oxa-58进行扩增、序列分析。结果 40株CRAB对16种药物中,对多黏菌素和米诺环素敏感性最高,耐药率小于或等于5.0%;改良Hodge试验阳性29株(占72.5%);所有菌株均被检测到含有oxa-51基因(占100.0%),oxa-23基因为38株(占95.0%),未检出oxa-24和oxa-58基因。结论 oxa-51及oxa-23基因是广东省中山市中医院流行CRAB的主要基因型。     

ERIC-PCR分析铜绿假单胞菌菌种分型及耐药性特征

目的:探讨肠杆菌基因间重复一致序列为引物的聚合酶链反应同源性技术(ERIC-PCR)在铜绿假单胞菌(PA)菌种分型与耐药性特征分析中的应用。方法:采用ERIC-PCR快速检测526份临床感染标本中PA各亚型及其耐药基因。结果:共分离出57株PA(10.84%),均分离于下呼吸道感染痰液标本;PA分布以呼吸科为主(49.12%),其余为外科危重症科(35.09%)、神经内科(24.56%)和妇儿科(5.26%),差异具有统计学意义(P<0.05)。ERIC-PCR图谱显示,A、B型PA比例显著高于C、D、E、F、G、H型PA,差异具有统计学意义(P<0.05)。PA对哌拉西林和氨曲南耐药率很高,分别为91.23%和85.96%;而对头孢吡肟耐药率最低,为40.35%,差异具有统计学意义(P<0.05)。PA浓度≥103CFU/ml时,ERIC-PCR对PA和耐药基因阳性检出率为100%,PA浓度为102、10 CFU/ml时,PA阳性检出率分别为80%、70%。结论:该方法可用于PA菌种分型和耐药特征评估,对指导临床抗感染治疗具有重要意义。     

KIinefeIter综合征的诊断：新型甲基化特异性实时定量PCR

本文研究目的为设计一种基于额外X染色体（X-ch）检测的分子检测方法用于Klinefelter综合征的诊断。从26名47，XXY男性，2名46，XY／47，XXY男性，22名46，XY男性和15名46，XX的女性的外周血标本中提取DNA，并进行脱氨基处理。甲基化特异性的定量多聚酶链反应（MS-qpPCR）以非甲基化和甲基化的X染色体非活化特异性转录基因（XIST-U和XIST-M）拷贝为模板。X染色体二倍体通过XIST基因甲基化状态来判定。46，XY／47，XXY男性的嵌合程度通过核型分析和原位荧光杂交（FISH）的结果比较来判定。数据分析应用Roche LightCycler software v．3．5.3，包括通过拟合点分析和溶解曲线分析决定交叉点（CPs）。所有对照组女性和Ks患者均检测到X染色体二倍体，而对照组男性只表达XIST-M。XIST-U和IXIST-M的交叉点范围分别是（29．5-32．5，SD0．8）和（29-31，SD0．6）。嵌合度的检测极限为1％。根据2名47，XXY/46，XY患者的XIST-U／）（IST-M比值分析，计算出的嵌合率（1．8％和17．8％）与FISH结果（2．3％和15％）相当。从DNA脱氨基到最终数据分析的间隔小于9小时。本文得出结论：MS-qpPCR是一种敏感、特异及快速的X染色体二体检测方法，可以用于KS的筛查和诊断，甚至在低嵌合水平的47，XXY／46，XY患者也适用。     

实时超声引导在清除宫内残留物中的应用价值

目的探讨实时超声引导在清除宫内残留物中的应用价值。方法回顾性分析了2010年10月至2013年12月入住我院的60例药物流产、人工流产及引产术后2周被确诊为宫内残留物患者的临床资料,在实时超声引导下行宫内残留物清除术。结果 (1)本组患者中,有58例患者手术一次性成功,成功率达96.67%;(2)病理检查结果 50例显示为变性、坏死及机化的绒毛或蜕膜组织,其余10例显示为胎盘组织;(3)声像图血流情况:稍强回声血流显示率为92.59%,混合回声血流显示率为93.75%,低回声血流显示率为90.00%,无异常回声血流显示率为100.00%;(4)宫腔部位血流显示率为97.06%、尿HCG阳性率为97.06%,前后壁血流显示率为92.86%、尿HCG阳性率为100.00%,宫底部血流显示率为100.00%、尿HCG阳性率为90.00%,宫颈部血流显示率为0%、尿HCG阳性率为50.00%。结论实时超声引导下清除宫内残留物,在很大程度上提高了手术操作者的操作准确性及质量,对有效清除宫内残留物具有较高的应用价值。     

human NF-κB miRNA干扰载体的构建

目的:设计并构建针对胰腺癌基因治疗中最关键的靶基因人细胞核因子κB(human NF-κB)的miRNA干扰载体。方法:根据靶基因设计并合成miRNA oligo(引物设计软件),将oligo退火成双链,然后用载体构建试剂盒进行重组克隆,将双链的miRNA oligo插入到miRNA表达载体中,构建miRNA质粒,转化入感受态细胞DH5α,从转化平板分别挑取克隆,用载体通用引物进行菌落PCR筛选,筛选得到的阳性克隆进行测序,以验证重组克隆中插入片段序列是否与设计的oligo序列一致。结果:经过比对,重组克隆中插入片段序列与设计的oligo序列完全一致。结论:成功构建了针对靶基因human NF-κB的miRNA干扰载体,为进一步研究奠定了基础。     

NTCP在去迷走神经大鼠肝细胞中的表达及临床意义

目的：本实验拟通过建立去迷走神经肝支大鼠模型,观察Na＋/牛磺胆酸盐同向转运多肽（NTCP）在大鼠肝细胞中的表达变化,探讨迷走神经对肝细胞功能及状态的影响.方法：大鼠随机分为两组：A组：迷走神经肝支切断组 B组：假手术组每组20只.通过HE染色法光学显微镜下观察切断迷走神经肝支后的肝脏病理形态学改变,通过逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）法在mRNA水平上检测NTCP表达及Western blotting法检测NTCP蛋白水平,来分析迷走神经对NTCP的改变,从而确定迷走神经对肝细胞功能及状态的影响.实验结果采用SPSS软件包分析.结果：去迷走神经组中,肝脏组织NTCP mRNA随着术后时间其表达明显下降,半定量提示Pst5d时与B组相比即有明显差异（P＜0.05）,至Pst9d时更加明显,仅微弱表达.Western Blotting 结果显示,A组Pst1d～9d,肝组织NTCP蛋白表达水平明显下降,以去迷走神经肝支后第9天最低,蛋白条带隐约可见,并且不是很完整.差异有统计学意义（P＜0.05）.结论：去迷走神经状态对肝脏功能变化有一定影响,在去迷走神经肝支状态下,肝细胞功能下降,NTCP表达及蛋白水平减少,影响胆盐因子转运及表达.     

高危型人乳头瘤病毒E7 mRNA与喉病变的关系

目的检测高危型人乳头瘤病毒(HPV)E7 mRNA表达量并分析其与喉病变的关系。方法经临床明确诊断的喉癌50例、喉癌前病变22例、声带息肉16例共计88例患者,分为喉癌组、病变组、息肉组,分别进行HPV DNA检测及HPV mRNA反转录实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测。结果各组均有HPV-16及HPV-18型特异的E6、E7阳性表达。喉癌组HPV-16和HPV-18的E6及E7的相对表达量均明显高于病变组和息肉组(P<0.05);喉癌组HPV-16和HPV-18的E6及E7检出率明显高于病变组和息肉组(P<0.05);喉癌组HPV mRNA拷贝数明显高于病变组和息肉组(P<0.05),HPV mRNA的表达水平随喉病变的发展而提高。结论 HPV mRNA的表达率随喉病变的发展而增加,其表达量也随之增强,其表达水平与喉病变发展具有一定相关性。检测HPV E7 mRNA可以为喉癌的预防、发展监测提供重要的临床指导。     

牙龈卟啉单胞菌脂多糖对人主动脉内皮细胞表达ICAM-1影响的研究

在体外分别以P.gingivalis LPS和E.coli LPS刺激HAECs,实时荧光定量PCR技术检测ICAM-1基因表达,蛋白质印迹技术检测ICAM-1膜蛋白表达。采用SPSS18.0软件包中ANOVA对数据进行分析。结果:P.gingivalis LPS作用6h后开始诱导ICAM-1 mRNA表达,14h达到高峰,22h仍有高表达,各时间点与未刺激组相比,差异均有统计学意义(P<0.05);而E.coli LPS作用2h后即开始诱导ICAM-1 mRNA表达,14h达到高峰,22h仍有高表达,各时间点与未刺激组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。两种LPS均     

MMP-9蛋白及mRNA在乳腺癌组织中的表达

目的:探讨基质金属蛋白-9(MMP-9)蛋白及mRNA在乳腺癌中的表达。方法:采用免疫组化和半定量RT-PCR的方法检测45例乳腺癌及20例乳腺良性病变中MMP-9蛋白及mRNA的水平。结果:MMP-9蛋白及mRNA在乳腺良性病变组织中几乎不表达,乳腺癌中表达率显著增高,各组间差异有显著性,而且MMP-9过表达与淋巴结转移有关。结论:MMP-9在乳腺癌侵袭和转移中发挥重要作用,有可能作为判断乳腺癌浸润转移能力的参考指标之一。