肝癌相关新基因的研究进展

随着分子生物学、细胞生物学、分子遗传学和人类基因组学等学科的飞速发展 ,人们对肿瘤发病机制的认识更加深入。肝癌作为我国高发恶性肿瘤之一 ,它的发生是多因素、多阶段、多基因相互作用的结果。自 1984年顾健人等对原发性肝癌及肝癌 740 2细胞株DNA转染NIH 3T3所得转化细胞     

高原地区小儿病毒性心肌炎T细胞亚群检测及临床意义

本文对２８例小儿病毒性心肌炎患者进行了Ｔ细胞检测，发现患儿外周血Ｔ细胞亚群有明显改变。提示：小儿病毒性心肌炎患者均有不同程度的一过性细胞免疫功能低下。而体液免疫功能正常，我们在临床给与一般治疗的同时，佐以胸腺因子治疗，明显改善症状，取得良好疗效。     

安徽淮北地区人群HCV感染及HCV基因型分布调查

该地区农村自然人群、煤矿工人和职业献血者中抗－ＨＣＶ阳性率分别为１．４％、０．５％和４．８％。在ＨＣＶ感染者中男女之间差别无显著意义。ＨＣＶ感染者中多数具有明确的感染途径和来源。经输血和献血及使用血液制品是其主要的感染途径和来源。人群中ＨＣＶ基因型以Ⅱ型感染为主，占６３．９％。肝炎病人ＨＣＶ感染中混合感染所占比例比一般人群和职业献血者的混合感染比例高。     

人IL-10基因重组复制缺陷型腺病毒DNA的构建

目的 构建人IL-10基因的重组腺病毒并进行体外表达和检测。方法从质粒pcDNA3IL-10的CMV启动子下游完整切下IL-10 cDNA的片段,将其定向插入Gateway载体,在克隆酶的作用下将阳性克隆质粒转入目的腺病毒载体。PacI酶线性化IL-10腺病毒DNA后阳离子质脂体转染293A细胞,获得人IL-10的复制缺陷型重组腺病毒。体外感染人胰腺癌细胞株Bxpc-3和大鼠胰腺细胞株AR-42J;Western blot检测人IL-10的表达。结果 成功地构建人IL-10重组腺病毒,病毒滴度达2×109PFU/mL。体外感染的细胞株均检测到IL-10的表达。结论 构建复制缺陷型重组腺病毒能够介导IL-10的基因表达,为细胞因子的抗炎冶疗奠定实验基础。     

携带人胰岛素样生长因子-1重组腺病毒的构建和鉴定

[目的] 采用 Cre-LoxP同源重组系统构建并鉴定携带人胰岛素样生长因子-1( human insulin-like growth factor-1, hIGF-1)目的基因的复制缺陷重组腺病毒,为椎间盘退变的 hIGF-1基因治疗奠定基础.[方法] PCR合成 hIGF-1基因,用 pMD18-T载体克隆 hIGF-1目的基因,酶切、测序并进行 NCBI BLAST相似性在线分析.将 pMD18-T-hIGF-1和 pDNR-1r质粒分别行 EcoRⅠ和 BamHⅠ双酶切, DNA 连接酶连接双酶切产物,转化感受态大肠杆菌 DH5α,合成中间载体 pDNR-hIGF-1,酶切鉴定.Cre-loxP系统介导 pDNR-hIGF-1和 pInt.AV1.SpaT同源重组形成 pInt.AV1.SpaT-hIGF-1重组表达质粒,行 EcoRⅠ酶切鉴定.复苏 293细胞,将 pInt.AV1.SpaT-hIGF-1和 pInt.B.B质粒在 293细胞内进行同源重组成含 hIGF-1基因的复制缺陷重组腺病毒.倒置显微镜观察 293细胞病变样效应( cytopathogenic effect, CPE);透射电镜观察 293细胞中的病毒颗粒;提取细胞裂解液中病毒 DNA, PCR鉴定 hIGF-1目的基因的存在; Western blot 检测 hIGF-1蛋白表达.用半数组织培养感染量 (tissue culture infectious dose 50,TCID50)方法测定重组腺病毒的滴度.[结果]克隆的 hIGF-1目的基因经 NCBI BLAST相似性在线分析证实与 Homo sapiens IGF-1 (GI:19923111)完全相同.pInt.AV1.SpaT-hIGF-1酶切鉴定,出现 5.4 kb和 1 kb两条片段,与理论值完全相符.转染 293细胞 12～ 14 d后,大部分细胞出现肿胀,脱落等细胞病变样效应.PCR鉴定细胞裂解液中含有 hIGF-1目的基因.Western blot 证实重组腺病毒表达 hIGF-1蛋白.第 2代腺病毒的滴度为 80× 106 PFU/mL.[结论]成功构建出含有 hIGF-1目的基因的复制缺陷重组腺病毒.     

中药补肾方在体外对乙肝患者外周血淋巴细胞亚群及TNF-α的调节作用

目的　观察中药补肾方在体外对慢乙肝患者外周血淋巴细胞亚群的影响及其对TNF -α的诱导作用。方法　选择 32例慢乙肝患者 ,静脉取肝素抗凝血 ,分离出单个核细胞 ,用RPMI- 16 4 0培养液培养后 ,加入中药补肾方 ,分别检测淋巴细胞亚群和TNF -α。结果　补肾方能促进CD4 + 细胞的增殖 (P <0 .0 1) ,从而提高CD4 + /CD8+ 比值 (P <0 .0 5 ) ,对TNF -α的产生有促进作用 (P <0 .0 1)。结论　补肾方在一定程度上能直接促进CD4 +细胞增殖 ,提高CD4 + /CD8+ 比值 ,诱导TNF -α的产生 ,从而调整乙肝患者细胞免疫功能 ,维持乙肝患者免疫平稳 ,提高患者的免疫功能和抗病毒的能力。