虎杖晶4号对人血PMNs呼吸暴发和氧自由基的作用

应用化学发光法测定①人血PMNs受PMA刺激产生的化学发光;②黄嘌呤—黄嘌呤氧化酶体系产生O_2;③VitC—CU~(2+)—酵母多糖产主·OH;④H_2O_2的释放。观察虎杖晶4号对上述体系产生自由基的影响。结果提示.虎杖晶4号对PMN呼吸暴发的早期(1～6 min)有明显的抑制作用,呈剂量依赖性;而在12min时发光强度均高于空白对照.表明因虎杖晶4号而使呼吸暴发滞后。其对O_2.·OH.H_2O_2均有清除作用.且呈剂量依赖性.IC_(50)分别为14.6.29.6和13.0μmol·L~(-1).     

高效液相色谱法同时测定清浊祛毒丸中咖啡酸、虎杖苷、丹皮酚含量

目的建立同时测定清浊祛毒丸中咖啡酸、虎杖苷和丹皮酚含量的高效液相色谱法。方法采用AgilentEclipse XDB-C18色谱柱(250mm×4.6 mm,5μm),用甲醇-0.1%磷酸流动相进行梯度洗脱,流速1.0 mL/min,检测波长314 nm,进样量5μL。结果咖啡酸、虎杖苷和丹皮酚质量浓度线性范围分别是4.8～96.0μg/mL(r=0.9995,n=5),4.1～82.0μg/mL(r=1.0,n=5)和12.0～240.0μg/mL(r=0.9999,n=5),平均加样回收率分别为101.10%(RSD=1.6%,n=9),101.62%(RSD=0.8%,n=9),102.71%(RSD=1.2%,n=9)。结论该法方便、快捷、准确、灵敏、重现性好,能更全面地控制清浊祛毒丸的质量。     

虎杖苷对肺血管内皮细胞一氧化氮的影响

目的观察虎杖苷(PD)对肺血管内皮细胞(PECs)正常及缺氧培养条件下合成一氧化氮(NO)的影响从而探讨PD抗休克的可能作用机制。方法将Griess试剂加入培养液中,用紫外分光光度计测量Griess试剂与NO2-反应的OD值,通过绘制的OD-NO2-标准曲线计算NO的值。分别观测了PD在不同时间点及不同浓度下对PECs的NO表达量的影响,并观察了PD对缺氧条件下PECs表达NO的影响。结果随着PD浓度的增加,PECs的NO表达量增高,最高为(30.86±2.83)μmol/L,与对照组相比差异有显著性(P0.01)。随着PD作用时间的延长,PECs合成NO的量也逐渐增加,以24h最高,为(29.69±4.51)μmol/L,与起始点相比差异有显著性(P0.01)。缺氧刺激下,PECs的NO表达量下降,PD可以对抗此作用。结论PD可能通过调节内皮细胞的NO表达量来发挥其抗休克的作用,这可能是其抗休克的分子作用机制之一。     

LC-MS/MS测定大鼠血浆中虎杖苷浓度

目的 建立测定大鼠血浆中虎杖苷浓度的LC-MS/MS方法。 方法 采用LC-MS/MS测定大鼠血浆中虎杖苷的浓度,以二苯乙烯苷为内标,血浆样品用乙腈沉淀蛋白,色谱柱为Agilent Zorbax SB-C₁₈ (100 mm×2.1 mm, 3.5 μm),流动相为甲醇-乙腈-0.1%甲酸水溶液(18∶15∶67),流速0.3 ml/min,柱温30 ℃。 结果 虎杖苷的线性范围为1.0~5 000.0 ng/ml (r=0.998 4),最低定量检测浓度为1.0     

近红外光谱法快速测定虎杖中虎杖苷、白藜芦醇、大黄素的含量

目的:建立一种同时测定虎杖提取物中虎杖苷、白藜芦醇和大黄素含量的新方法。方法:利用高效液相色谱紫外检测法测定虎杖中活性成分的化学值,然后采用傅里叶变换近红外光谱技术并结合偏最小二乘法(PLS)建立、优化模型,最后采用校正模型的决定系数(R2)、内部交叉验证均方差(RMSECV)和外部预测误差均方根(RMSEP),对校正模型进行评价。结果:虎杖苷、白藜芦醇和大黄素定量校正模型的R2分别为0.9589,0.9604,0.9128;RMSECV分别为0.0881,0.0172,0.130;RMSEP分别为0.0968,0.0153,0.111。结论:结果证明近红外光谱法用于虎杖中活性成分的定量分析,准确度较高,能满足现实中对虎杖多组分同时测定的精度要求。     

早期应用虎杖甙治疗重症急性胰腺炎的机制探讨

目的 探讨早期应用虎杖甙(polydatin,PD)在治疗重症急性胰腺炎(severe aeute pancreatitis,SAP)大鼠中的作用及其可能的机制.方法 将SD大鼠随机分成对照组、SAP模型组和PD治疗组各组模型制备成功后6 h,分别采集各组大鼠静脉血液标本和胰腺组织,采用酶联免疫吸附(ELISA)方法分别检测血液中内皮素-1(ET-1)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的表达量,并检测血淀粉酶(AMY),光镜下观察胰腺组织病理改变,透射电镜观测胰腺细胞内超微结构的病理变化.结果 与对照组比较,SAP模型组和PD治疗组血中AMY、ET-1、1CAM-1浓度均有明显升高(P<0.01);而PD治疗组的血中AMY、ET-1浓度与SAP组比较有明显下降(P<0.01)胰腺组织的病理变化:相对于对照组,PD治疗组和SAP模型组光镜下可见胰腺细胞坏死、微血管出血等病理改变,电镜下胰腺细胞内各细胞器均有不同程度结构、功能改变:而PD治疗组胰腺病理变化比SAP模型组明显减轻.结论 早期应用PD对治疗急性胰腺炎具有一定的作用.其作用机制可能是:PD通过抑制SAP大鼠血液中ET-1的表达,阻止微血栓形成;进而改善胰腺微循环,减轻胰腺组织病理损伤.     

高效液相色谱-一测多评法测定肝爽颗粒中虎杖苷、白藜芦醇、氧化芍药苷、芍药苷和柴胡皂苷a、b1、d

目的 建立高效液相色谱-一测多评法(HPLC-QAMS)测定肝爽颗粒中虎杖苷、白藜芦醇、氧化芍药苷、芍药苷和柴胡皂苷a、b1、d的方法.方法 采用Agilent SB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-0.1％磷酸溶液,梯度洗脱;检测波长分别为306 nm(0～17 min,测定虎杖苷和白藜芦醇)、230 nm(17～28 min,测定氧化芍药苷和芍药苷)、210 nm(28～55 min,测定柴胡皂苷a、b1、d);体积流量1.0 mL/min;柱温30℃;进样量10μL.以芍药苷为内参物,建立其他6个成分的相对校正因子(RCF)计算.结果 虎杖苷、白藜芦醇、氧化芍药苷、芍药苷和柴胡皂苷a、b1、d分别在6.37～159.25、4.91～122.75,1.88～47.00、7.99～199.75、0.56～14.00、2.19～54.75、2.87～71.75μg/mL线性关系良好,平均回收率分别为100.08％、98.95％、97.87％、99.52％、96.97％、98.88％、99.07％,RSD值分别为0.72％、1.1％、1.4％、0.99％、1.2％、1.2％、0.84％.肝爽颗粒中各成分的一测多评法所得结果与外标法结果无明显差异.结论 所建立的HPLC-QAMS法可用于肝爽颗粒中虎杖苷、白藜芦醇、氧化芍药苷、芍药苷和柴胡皂苷a、b1、d的同时测定.     

虎杖苷对缺血缺氧下心肌细胞蛋白激酶C的影响

目的探讨虎杖苷对缺血缺氧作用下心肌细胞蛋白激酶C(PKC)活性的影响及其抗休克的机制。方法取大鼠乳鼠心室肌培养心肌细胞,用Koyama方法复制心肌细胞缺血缺氧模型。用γ-闪烁计数仪测定PKC的活性。结果正常状态下心肌细胞胞质PKC经虎杖苷(PD)刺激后活性下降(vs正常组P<0.05),但胞膜的PKC活性上升(vs正常组P<0.05)。缺血缺氧后胞质和胞膜PKC的活性均下降(vs正常组P<0.05),再经PD处理后胞质胞膜的PKC活性均上升(vs缺血缺氧组P<0.05,vs正常组P>0.05)。结论PD对缺血缺氧作用下的心肌有保护作用,可能是通过调节PKC的活性来发挥作用的,这可能是PD抗休克的分子机制之一。     

UPLC法测定复方虎黄喷剂中虎杖苷、黄芩苷、欧前胡素

目的利用梯度洗脱,建立同时测定复方虎黄喷剂中3种指标成分虎杖苷、黄芩苷和欧前胡素的UPLC检测方法。方法采用UPLC法,Acquity UPLC BEH C18色谱柱(100mm×2.1mm,1.7μm),流动相:乙腈(A)和0.05%磷酸水溶液(B)梯度洗脱;流速:0.4mL/min;检测波长:280nm;柱温:35℃。结果虎杖苷的线性范围为0.59~59.0mg/L(r=0.999 2),平均回收率为100.6%,RSD为1.56%;黄芩苷的线性范围为1.128~112.8mg/L(r=0.999 9),平均回收率为101.5%,RSD为1.68%;欧前胡素的线性范围为0.109~10.9mg/L(r=0.999 9),平均回收率为100.6%,RSD为2.75%。结论本方法操作简便,测定结果准确可靠,可用于复方虎黄喷剂的质量控制。     

虎杖苷与白藜芦醇体外抗肠道病毒71型的初步研究

目的检测虎杖苷与白藜芦醇体外抗肠道病毒71型(EV71)活性,分析其与NF-κB信号通路的关系。方法采用噻唑蓝(MTT)比色法检测虎杖苷与白藜芦醇对人横纹肌肉瘤(RD)细胞的毒性以及抗EV71作用;western blot分析EV71感染RD细胞后EV71/衣壳蛋白VP1、NF-κBp50、NF-κBp65蛋白表达及磷酸化水平,Luminex流式液相芯片技术检测RD细胞分泌IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-α(IFN-α)和IFN-β的水平。结果虎杖苷与白藜芦醇的50%病毒抑制细胞毒性浓度(CC50)分别为542.76μg/mL和85.73μg/mL,50%病毒抑制浓度(IC50)分别为979.66μg/mL和21.36μg/mL,治疗指数(TI)为0.55和4.01。虎杖苷对EV71的抑制作用较弱,250μg/mL时的病毒抑制率为(23.57±3.64)%。白藜芦醇可抑制RD细胞EV71/VP1合成,作用8、12、24 h的VP1表达量差异具有统计学意义(t值分别为5.968、5.364和4.922,P均0.05)。与EV71感染组比较,EV71+白藜芦醇组NF-κBp50磷酸化水平降低,差异有统计学意义(8、12、24 h的t值分别为11.642、12.284和28.844,P均0.05);NF-κBp65磷酸化水平降低,也具有统计学意义(4、8、12、24 h的t值分别为9.017、16.883、10.287和6.922,P均0.05)。白藜芦醇可显著降低EV71感染的RD细胞分泌IL-6、TNF-α和IFN-β(t值分别为23.589、34.564和13.296,P均0.05)。结论白藜芦醇可通过抑制RD细胞的NF-κB信号通路干扰EV71复制。