环氧化酶-2在肾癌中表达的研究

 目的探讨COX2与肾透明细胞癌的关系及临床意义。方法应用免疫组化技术检测35例肾透明细胞癌标本中COX2的表达,分析其与肾透明细胞癌的临床分期、病理分级及浸润、转移的关系。结果肾透明细胞癌COX2阳性表达率为68.6%,对照组正常肾组织阳性表达率20%,二者差别有显著性意义(P<0.05)。COX2的表达与肾透明细胞癌临床分期显著相关,PT3～4期明显高于PT12期(P<0.05),不同病理分级肾透明细胞癌的表达差别无显著性意义。结论COX2在肾透明细胞癌的发生发展中起重要作用,与肾透明细胞癌的浸润、转移相关。     

小细胞肺癌2F7单抗ScFv的高效表达及复性研究

目的 在大肠杆菌中高效表达小细胞肺癌单抗2F7的单链抗体（ScFv)，并获得具有生物学活性的ScFv。方法 利用PCR方法将2F7单抗重链可变区（VH）和轻链可变区（VL）通过一人工设计的柔性连接肽（Linker)连接，再将单链抗体基因重组到原核表达载体pQE31中，构建单链抗体高效表达载体pQE-2F7-ScFv。将pQE-2F7-ScFv质粒转化大肠杆菌M15后诱导表达，并对表达产物进行纯化和稀释复性。结果 获得了2F7单链抗体的高效表达，表达蛋白大小约27.4kD，以包涵体形式存在。包涵体蛋白在经过变性、纯化和稀释复性后，获得了有功能的单链抗体。结论 成功地构建和表达了小细胞肺癌单抗F27的单链抗体，并对其进行了纯化和复性，将进一步促进2F7单抗小分子抗体的应用。     

人类α型叶酸受体基因的克隆及其真核表达载体的构建

目的 探讨如何以人类α型叶酸受体(FOLR-1)基因为基础构建核酸疫苗。方法 应用RT-PCR技术，从人类卵巢癌细胞系-SKOV3细胞中扩增FOLR-1基因，插入克隆载体pGEM-T Easy，经DNA自动测序仪测序证实后，以亚克隆法构建于真核表达载体pcDNA3．1( )，并使用限制性内切酶酶切鉴定。结果 从卵巢癌细胞系SKOV3中成功扩增出FOLR-1基因，并克隆人pcDNA3．1( )载体。结论 成功构建FOLR-1的重组克隆及真核表达载体，为今后利用FOLR-1进行卵巢上皮性肿瘤的免疫及导向治疗研究打下了基础。     

抑癌基因PTEN的表达对大肠癌细胞转移侵袭能力的影响

目的探讨抑癌基因PTEN的表达大肠癌细胞转移侵袭能力的影响.方法1.利用western blot法检测不同转移潜能的大肠癌细胞系内PTEN蛋白的表达水平,说明PTEN蛋白的表达对大肠癌细胞转移潜能的影响,2.用脂质体作载体,将PTEN基因转染大肠癌细胞株LOVO后,采用计数细胞悬液加到粘附底物后20 min和120 min的细胞贴壁数用以测定细胞粘附能力,采用Costar的浸润小室检测PTEN基因转染前后细胞的浸润能力.结果1.转移潜能高的LOVO细胞PTEN的表达量显著低于转移潜能较低的HT-29,LS-174T,2.未转染细胞(LOVO)、转染pcDNA3.0-PTEN的细胞(LOVO/pcD-NA3.0-PTEN)在特异性粘附底物(Laminin)上20 min时贴壁率分别为18.6%±1.4%和13.9%±0.48%(P＜0.05),120min时贴壁率分别为71.2%±2.5%和56.0%±1.6%(P＜0.05),3.采用Costar的浸润小室对LOVO、LOVO/pcDNA3.0-PTEN细胞的浸润能力分析结果显示细胞悬液静置培养6 h后,对照细胞LOVO浸润穿透多聚碳膜的细胞数为11.7±1.74个,LOVO/pcDNA3.0-PTEN细胞穿透多聚碳膜的细胞数为7.5±1.58个(P＜0.05).结论在肿瘤细胞内抑癌基因PTEN的表达与大肠癌的转移侵袭行为密切相关.     

EXPRESSION OF VEGF RECEPTOR KDR IN DIFFERENT ORIGINATED CARCINOMAS

Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓｉｓｔｈｅｐｒｅｒｅｑｕｉｓｉｔｅｏｆｓｏｌｉｄｔｕｍｏｒｇｒｏｗｔｈ．１Ｄｕｒｉｎｇｔｈｅｐｒｏｃｅｓｏｆｔｕｍｏｒｐｒｏｇｒｅｓｉｏｎ，ｔｕｍｏｒｃｅｌｓｃａｎｓｅｃｒｅｔｅｖａｒｉｏｕｓａｎｇｉｏｇｅｎｉｃｆａｃｔｏｒｓ...     

天然内生抗菌多肽elafin真核表达载体的构建及在真核细胞的表达

采用RT-PCR法提取天然内生抗菌多肽elafin的基因，通过测序确认后亚克隆构建真核表达载体pEGFP-N1-elafin，再转染至肺上皮细胞A549，荧光显微镜观察pEGFP-N1-elafin在细胞中表达及定位，采用Northern杂交、ELISA检测法分别从转录及蛋白质水平分析表达情况，最后通过酶切电泳鉴定证实真核表达载体pEGFP-N1-elafin构建成功，其转染细胞中有elafin的基因表达，且细胞上清液中elafin含量证实其主要是分泌性表达。Elafin基因cDNA真核表达载体的成功构建以及主要呈分泌性表达的特点显示了极具意义的潜在应用价值。     

SARS冠状病毒半胱氨酸蛋白酶3CLpro的克隆表达及分离纯化

SARS（严重急性呼吸综合征）是由一种新型的人类冠状病毒引起的。由于SARS冠状病毒3CL蛋白酶在病毒的复制翻译中起关键作用，所以成为抗SARS药物设计的关键靶标之一。该研究中，利用以pET28a为载体的高效原核表达系统，克隆表达出SARS冠状病毒3CL蛋白酶，然后由NTA-Ni^2＋亲和层析柱对表达的蛋白进行分离纯化。3CL蛋白酶在大肠杆菌表达系统中的成功表达为今后进一步筛选抗SARS病毒药物奠定基础。     

肿瘤坏死因子受体-1在甲状腺癌中的表达及其意义

目的:研究肿瘤坏死因子受体1(tumornercosisfactorreceptors1,TNFR1)在甲状腺癌组织中的表达及其与临床及病理因素的关系。方法:应用免疫组织化学SP法和显微图像分析技术检测41例甲状腺癌中TNFR1的表达,并与9例甲状腺腺瘤及7例腺瘤旁形态学正常的甲状腺组织作对照。结果:①甲状腺癌组织中TNFR1的表达水平显著高于腺瘤组及正常甲状腺组(P<0.001),而在甲状腺腺瘤和正常甲状腺组织中的表达水平无显著性差异(P>0.05)。②在甲状腺癌各临床病理参数中,TNFR1的表达只与病理类型有关,在乳头状癌组中的表达水平高于滤泡状癌组(P<0.05);而与年龄、性别、肿瘤大小、浸润程度及淋巴结转移等因素无关(P>0.05)。结论:TNFR1参与了甲状腺癌的发生发展过程,可以作为甲状腺癌诊断与鉴别诊断的病理学指标之一,但不能作为评估甲状腺癌生物学行为和预后的有关指标。     

沙眼衣原体ompA基因真核表达载体的构建及在HeLa细胞中的表达

目的　构建沙眼衣原体 (Ct)ompA基因真核表达重组质粒 ,利用脂质体体外转染HeLa细胞 ,为核酸疫苗的研制作准备。　方法　应用PCR技术从D型Ct基因组中扩增ompA全长基因 ,重组入 pUCm -T克隆载体。将pUCm -T/ompA中的ompA外源基因片段经酶切、连接等反应 ,亚克隆入 pcDNA3 .1真核表达载体的相应位点 ,进行序列分析和酶切鉴定后 ,运用脂质体将重组体 pcDNA3 .1/ompA转染HeLa细胞 ,免疫组化法观察目的基因的表达。　 结果　PCR扩增得到约 1.2kb的特异性ompA基因片段 ;序列测定证实与发布序列一致 ;构建得到真核表达重组体 ;重组质粒pcDNA3 .1/ompA在HeLa表达MOMP。　结论　CtompA基因能够在体外真核细胞中表达 ,为进一步研究CtDNA疫苗以及研究该蛋白的生物学功能提供实验基础。     

氧化砷对结肠癌细胞凋亡的诱导及机制的探讨

目的 探讨氧化砷(As2O3)对人结肠癌细胞的凋亡诱导作用及其分子机制。方法应用显微镜和流式细胞仪观察As2o3对SW480细胞株的形态学改变和诱发凋亡率；免疫组化技术检测bcl-2、Fas、二种基因编码蛋白的表达。结果 As2O3作用于细胞后，可看到较典型的细胞凋亡形态学改变。AO／EB荧光染色法显示，细胞凋亡率为2．1％～10．6％。As2O3诱导SW480细胞凋亡作用呈时间和浓度依赖性。流式细胞仪DNA直方图上呈现典型的亚二倍体凋亡峰。As2O3主要作用于细胞周期的G2／M期。经As2O3作用的SW480细胞bcl-2基因编码蛋白表达减少，Fas基因编码蛋白表达增加。结论 As2O3有诱导SW480细胞凋亡作用，其诱导细胞凋亡的分子机制可能是下调bcl-2基因编码蛋白表达，增强Fas基因编码蛋白表达。