高效液相色谱/质谱法检测人尿中的糖皮质激素及其它兴奋剂

采用液相色谱/质谱(LC/MS)方法检测糖皮质激素、甾体和β2激动剂。本文采用Zorbax 30 mm×2.1mm,1.8μm短柱,对12种糖皮质激素、3种甾体和2种β2激动剂的液相色谱/质谱的测定方法进行了研究,建立了6分钟内快速检测人尿中多种糖皮质激素、甾体和β2激动剂的测定方法。检测限低于5ng/ml。该方法适用于兴奋剂的筛选及确证。     

米格列奈片人体药动学研究

 目的 考察米格列奈在中国健康人体内的药动学特征， 估算主要药动学参数，为本品的临床应用提供参考。 方法 12 名健康受试者，按平行三周期设计方法进行 3 个剂量组（分别为 5 ， 10 ， 20 mg ）的单次 po 给药。给药后按预定时间点抽取静脉血 3.5 mL ，用液相色谱 - 质谱联用法测定血浆中米格列奈的浓度，估算药动学参数。 结果 12 名受试者单次口服米格列奈片 5 ， 10 和 20 mg 后， <> ρ _max 分别为（ 742.86 ± 272.60 ），（ 1 447.42 ± 590.64 ）和（ 2 614.43 ± 721.09 ） μg·L^-1 ； t _max 分别为 （ 0.32 ± 0.12 ），（ 0.34 ± 0.11 ）和（ 0.35 ± 0.11 ） h ； t _1/2 分别为（ 1.61 ± 0.39 ），（ 1.91 ± 0.66 ）和（ 1.70 ± 0.38 ） h ； AUC_0-12 分别为（ 1 006.27 ± 218.09 ），（ 1 928.35 ± 596.17 ）和 (3 677.82 ± 901.27) μg·h·L^-1 。 结论 米格列奈 在人体内的吸收、分布、代谢和排泄均为一级动力学过程，吸收、消除速率呈现剂量非依赖性。     

液相色谱—质谱联用技术及其在药物代谢研究中的应用

近２０多年来，液相色谱－质谱（ＬＣ－ＭＳ）联用技术已发展成为一种高度自动化、常规的应用分析手段，在各个领域得到了广泛应用。各种软离子化技术，特别是电喷雾（ＥＳＰ）离子喷雾（ＩＳＰ）大气压化学电离（ＡＰＣＩ）的引入，使ＬＣ－ＭＳ对高极性化合物的分析具独特优势，在药物代谢研究中发挥着日趋重要的作用，在很大程度上替代了传统的气相色谱－质谱（ＧＣ－ＭＳ）联用技术，简化了样品（特别是结合型代谢物）处理过程。     

HPLC-MS/MS法研究普萘洛尔对映体在不同种属肝微粒体中的代谢差异

  目的  采用高效液相色谱-串联质谱法（HPLC-MS/MS）建立R-（+）-普萘洛尔和S-（-）-普萘洛尔在肝微粒体孵育体系中的含量测定方法,并分别比较普萘洛尔不同对映体在大鼠、犬、猴以及人4种肝微粒体中的代谢特征。  方法  分别将R-（+）-普萘洛尔和S-（-）-普萘洛尔溶解在由烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）启动孵育的不同种属的肝微粒体中,在孵育不同的时间后加入乙腈终止反应。使用电喷雾离子源（ESI）,以卡维地洛为内标,在多反应监测模式（MRM）下进行正离子扫描,分别测定各孵育体系中R-（+）-普萘洛尔和S-（-）-普萘洛尔的浓度。以孵育0 min时不同构型的普萘洛尔的质量浓度为参照,分别计算R-（+）-普萘洛尔和S-（-）-普萘洛尔在不同肝微粒体样品中的药物剩余百分比和体外代谢半衰期和固有清除率。  结果  普萘洛尔的线性范围为0.05～10.00 μg/mL,定量下限为0.05 μg/mL;日内、日间精密度的RSD%均小于13%。在4个种属的肝微粒体孵育体系中,R-（+）-普萘洛尔在大鼠肝微粒体中代谢快,在猴肝微粒体中次之,在犬和人肝微粒体中代谢慢,体外消除半衰期依次为大鼠 < 猴 < 犬 < 人;而S-（-）-普萘洛尔则是在大鼠和犬肝微粒体中代谢快,在猴和人肝微粒体中代谢慢,体外消除半衰期依次为大鼠 < 犬 < 猴 < 人。在大鼠、犬和猴肝微粒体中,R构型普萘洛尔的t_1/2均大于S构型,CL_int小于S构型,但在人肝微粒体中却刚好相反。采用单因素方差分析,R-（+）-普萘洛尔和S-（-）-普萘洛尔在4种肝微粒体中的体外代谢半衰期t_1/2和固有清除率CL_int均具有显著性差异（P < 0.05）。  结论  建立的HPLC-MS/MS法具有简单、快速、准确的特点,可用于肝微粒体中普萘洛尔对映体质量浓度的测定。不同构型的普萘洛尔在大鼠、犬、猴和人4种肝微粒体中的代谢稳定性有显著差异。     

胎盘生长因子串联scFv质粒构建表达及亲和力测定

目的:构建并表达胎盘生长因子串联scFv,提升对胎盘生长因子的亲和力。方法:设计不同长度的柔性连接子连接的串联scFv,构建串联scFv质粒,并分别将串联scFv与亲本scFv于原核表达系统进行表达。通过间接ELISA分别测定串联scFv及对应亲本scFv亲和力,分别对数据进行单因素ANOVA方差分析,并使用Dunnett-t检验进行组间比较。结果:柔性连接子长度的不同,会对串联scFv亲和力造成差别。单因素ANOVA方差分析结果表明,各组亲和常数间存在明显的统计学差异,Dunnett-t检验组间比较结果可知,当串联scFv间柔性连接子（GGGGS）n长度n=4和n=5时,亲和力较亲本提升不明显（P＞0.05）;但亲和力在n=6（t335=33.90,t7A10=32.00,均P<0.000 1）及n=7（t335=91.68,t7A10=90.71,均P<0.000 1）时较两亲本均有明显提升。结论:串联scFv可以明显提高单体scFv亲和力。     

华北地区汉族群体15个短串联重复序列基因座遗传多态性分析

目的调查华北地区汉族人群15个短串联重复序列(shorttandemrepeat,STR)基因座遗传多态性分布和群体遗传学数据。方法应用毛细管电泳技术和五色荧光复合扩增的方法,检测597名汉族无关个体的15个STR基因座基因型。结果15个STR基因座的基因频率分布均符合Hardy-Weinberg平衡,所检测的15个STR遗传标记均具有高度多态性,杂合度均超过0.62,15个基因座的个体识别力在0.802~0.967之间,非父排除率在0.320~0·697之间,匹配概率在0.033~0.198之间。15个基因座的累积个体识别能力为0.999999以上,累积非父排除率为0.99999571,累积匹配概率为8.93×10-18。结论联合检测15个基因座可为亲缘鉴定和个体识别提供可靠的法医学证据,这15个STR基因座适用于中国人群的法医物证学检验。     

中国人群DXS102座位多态性鉴定及其应用

目的探讨中国人群中ＤＸＳ１０２座位的多态分布。方法应用ＰＣＲ扩增片段长度多态性（Ａｍｐ－ＦＬＰ）研究了无亲缘关系的２３４条Ｘ染色体。结果ＤＸＳ１０２座位等位片段有８个，核心单元ＡＣ二核苷酸重复数为１３～２１，频率分布在０．０１３～０．１５６之间，杂合度观察值和无偏估测值分别为０．８７和０．８０，多态信息含量（ＰＩＣ）０．８０，女性基因型数为２２个，男性基因型数为８个，该座位多态分布符合Ｈａｒｄｙ－Ｗｅｉｎｂｅｒｇ平衡定律。ＤＸＳ１０２座位在中国人群和欧洲人群的分布有明显的种族差异，在中国人群中发现了两个新的等位片段。应用ＤＸＳ１０２座位的短串联重复序列多态性对一接受基因治疗的血友病Ｂ家系进行分析和携带者筛查。结论ＤＸＳ１０２座位连锁分析有望成为一种有效的血友病Ｂ基因诊断的方法。     

蛋白质组学及其在疾病研究中的应用

生命的表现形式最终是由蛋白质决定的。因此，对蛋白质组的研究具有很现实的意义。从研究之初至今，研究技术不断提高，涉及面日益广泛，其应用价值越来越大。本着重从技术及应用的角度，追踪最新的研究进展，对蛋白质组学及其在疾病研究中的应用作一的概述。