生血方的鉴别与含量测定

目的：建立生血方的鉴别和含量测定。方法：采用薄层色谱法（TLC）对生血方中黄芪、女贞子和当归进行定性鉴别;采用高效液相色谱法（HPLC-ELSD）对生血方中芒柄花素和黄芪甲苷进行含量测定,流动相为乙腈-水,流速1 mL·min-1;使用蒸发光散射检测器,载气气压0.5 MPa,漂移管温度为100 ℃。结果：在TLC图谱中,斑点清晰,分离度良好,阴性样品无干扰。方中2个成分（芒柄花素和黄芪甲苷）完全分离,峰面积的对数与进样量的对数呈良好的线性关系（r=0.999,0.999 4）。3批样品中黄芪甲苷和芒柄花素的含量分别在0.641 1～0.673 5、0.480 8～0.500 8 mg·g-1。结论：经方法学验证,该方法可用于生血方的质量控制。     

甘肃不同产区红芪中指标性成分含量的比较

目的：采用高效液相色谱法,测定甘肃不同产区红芪中毛蕊异黄酮和芒柄花素含量,对产区与指标性成分的相关性进行研究.方法：色谱柱为TC-C1s（2）柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,TC-C1s保护柱（10 mm ×4.6 mm,5μm）,流动相为乙腈-0.01％磷酸水溶液（梯度洗脱）,流速为1.0 mL· min-,检测波长为248 nm,柱温为30℃,进样量为10μL.结果：经系统聚类分析方法分析,采自陇南市和定西市的16批样品可分为三大类,其中采自陇南市武都区、宕昌县的9个产地的红芪中毛蕊异黄酮和芒柄花素的含量较高,芒柄花素含量在111.72～424.92 μg·g-1,毛蕊异黄酮含量在17.20～34.34μg·g-1;而采自定西市岷县、陇西县和宕昌县部分乡镇的红芪中毛蕊异黄酮和芒柄花素的含量较低,芒柄花素含量在74.35～ 182.88 μg·g-1,毛蕊异黄酮含量在2.27 ～ 13.56 μg·g-1.结论：不同产区红芪药材中指标性成分毛蕊异黄酮和芒柄花素含量存在一定的差异.武都、宕昌产红芪质量优于岷县、陇西等地所产红芪药材,这与武都、宕昌为红芪道地产区一致,可为红芪GAP种植基地的选址提供参考依据.     

Up-regulating of RASD1 and Apoptosis of DU-145 Human Prostate Cancer Cells Induced by Formononetin in Vitro

Prostate cancer is one of the most prevalent malignant cancers in men. The isoflavone formononetin is a mainactive component of red clover plants. In the present study, we assessed the effect of formononetin on humanprostate cancer DU-145 cells in vitro, and elucidated posssible mechanisms. DU-145 cells were treated withdifferent concentrations of formononetin and cell proliferation was assessed by MTT assay, cell apoptosis byHoechst 33258 and flow cytometry, and protein levels of RASD1, Bcl-2 and Bax by Western blotting. The resultsshowed that formononetin inhibited the proliferation of DU-145 cells in a dose-dependent manner. DU-145 cellstreated with different concentrations of formononetin displayed obvious morphological changes of apoptosisunder fluorescence microscopy. In addition, formononetin increased the proportion of early apoptotic DU-145cells, down-regulated the protein levels of Bcl-2 and up-regulated those of RASD1 and Bax. The level of RASD1reached its maximum at 48h post-treatment, and rapidly decreased thereafter. Together, we present evidence thatformononetin triggered cell apoptosis through the mitochondrial apoptotic pathway by up-regulating RASD1.     

HPLC法同时测定不同产地牛大力中3种化合物的含量

目的:建立同时测定不同产地牛大力药材中刺桐碱、芒柄花素、高丽槐素3个化合物含量的高效液相色谱法.方法:采用Agilent TC-C18色谱柱(250 mm×4.6mm,5μm),以乙腈(A)-0.1％乙酸(B)溶液为流动相,进行梯度洗脱;柱温:30℃;流速:1.0 mL·min-1;检测波长:280nm.结果:刺桐碱、...     

芒柄花黄素对非小细胞肺癌A549细胞增殖及上皮间质转化的抑制作用

目的 探讨芒柄花黄素（Form）对人非小细胞肺癌A549细胞增殖、凋亡及上皮间质转化（EMT）的影响。方法 采用终浓度为0.1、1、10、100 μmol／L Form处理A549细胞,应用四甲基偶氮唑盐比色法测定对照组（不加药物）及不同浓度Form处理24、48、72和96 h的细胞增殖情况,分别采用Annexin V-FITC／PI双染联合流式细胞术和实时荧光定量聚合酶链反应检测不同浓度Form处理48 h的凋亡率及凋亡相关基因的表达情况,Western blotting检测各组处理48 h后的EMT相关分子标志物（E-cadherin、N-cadherin及Vimentin）水平,采用酶联免疫吸附法测各组处理24、48、72及96 h的细胞上清液中纤连蛋白（FN）水平。结果 Form在1～100 μmol／L的范围内对A549细胞有增殖抑制作用,增殖抑制率呈浓度和时间依赖性,且除24～48 h 0.1 μmol／L外,其余浓度及作用时间的增殖抑制率均高于对照组（P＜0.05）;与对照组比较,Form处理48 h后的早期、晚期凋亡率及Bax、Bak的mRNA水平均升高,而Bcl-2水平降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）,且呈剂量依赖性;与对照组比较,不同浓度Form处理48 h后的N-cadherin和Vimentin水平及上清液FN水平均降低,而E-cadherin水平升高,以上差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 Form对非小细胞肺癌A549细胞有毒性作用,不仅抑制其增殖还诱导凋亡,可能与抑制其EMT过程有关。     

HPLC法测定新风胶囊中芒柄花黄素的含量

目的：建立测定新风胶囊中芒柄花黄素含量的方法。方法采用高效液相色谱法。色谱柱为 welch material Inc C18柱,流动相为乙腈-0.2％磷酸水（40∶60）,流速为1.0mL· min －1,检测波长为250nm,柱温为30℃,进样量为10μL。结果芒柄花黄素在0.197μg～1.574μg范围内线性关系良好（r＝1.0000,n＝6）,平均回收率为100.73％（RSD＝1.48％）。结论该方法简便、准确、重复性好,适用于新风胶囊中芒柄花黄素的含量测定,可为该制剂全面的质量控制奠定基础。     

HPLC法测定抗骨增生片中芒柄花素的含量

目的采用高效液相法测定抗骨增生片中芒柄花素的含量。方法采用Agilent C18(150mm×4.6mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.5%磷酸(35∶65)为流动相,流速1.0ml/min,检测波长248nm,柱温30℃。结果芒柄花素进样浓度在0.099～0.994μg范围内时,与峰面积呈良好线性关系;平均回收率(n=9)为98.76%,RSD为1.2%。结论该方法简便、准确、重复性好,可作为抗骨增生片质量控制方法。     

芒柄花素对不同亚型乳腺癌细胞增殖及细胞周期的影响

目的研究芒柄花素对人乳腺癌细胞MDA-MB-468、MCF-7、SK-BR-3的增殖及细胞周期影响。方法以三种乳腺癌细胞为研究对象,经MTT法观察不同浓度芒柄花素对乳腺癌细胞的增殖抑制情况;Western blot法检测增殖细胞核抗原（PCNA）表达情况;TUNEL法检测细胞凋亡情况;流式细胞仪观察细胞周期的改变情况。结果芒柄花素用药浓度大于20 μM时,抑制3种乳腺癌细胞的增殖, 降低PCNA蛋白的表达,G1期细胞比例均明显增多。结论芒柄花素可将细胞周期阻滞于G1期、减少PCNA蛋白的表达,从而抑制乳腺癌细胞增殖。     

HPLC同时测定枸骨叶提取物中异鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷和芒柄花素的含量

目的 建立枸骨叶提取物中异鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷和芒柄花素的高效液相色谱同时测定方法.方法 采用高效液相色谱法,Phenomenex C18(4.6 mm×250 mm,5 μm),甲醇-0.15%醋酸水为流动相梯度洗脱,检测波长:254 nm,流速:1 mL·min-1,柱温:30 ℃.结果 异鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷和芒柄花素分别在6.97~278.8 μg·mL-1范围和2.96~118.4 μg·mL-1范围内线性关系良好,平均回收率分别为98.41%和97.43%.结论 该方法准确、可靠、重复性好,可用于枸骨叶提取物的质量评价与控制标准.     

HPLC与紫外-可见分光光度计对养阴通脑颗粒有效部位的质量控制

目的:利用紫外-可见分光光度计(UV-VIS)检测养阴通脑颗粒中有效部位总黄酮含量。并利用梯度洗脱,建立高效液相色谱法(HPLC)测定养阴通脑颗粒中总黄酮有效部位中葛根素、芒柄花素、毛蕊异黄酮含量的方法。方法:以芦丁为对照品UV-VIS测定养阴通脑颗粒有效部位中总黄酮含量。采用HPLC,色谱柱为EclipseXDB-C18(150mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈(A)和0.04%磷酸水溶液(B)梯度洗脱,流速1.00mL/min,检测波长250nm。结果:养阴通脑颗粒有效部位总黄酮含量70%以上,葛根素的线性范围为0.530-296.300mg/L(r=0.9998),平均回收率为99.80%,RSD=0.40%,毛蕊异黄酮的线性范围为0.064-44.440mg/L(r=0.9994),平均回收率为99.70%,RSD=1.10%,芒柄花素的线性范围为0.064-43.110mg/L(r=0.9994),平均回收率为99.40%,RSD=1.50%。结论:本方法操作简便,测定结果准确可靠,为养阴通脑颗粒有效部位黄酮的质量控制提供方法。