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41.
目的探讨不同剂量γ射线照射后诱导脂质体介导的p16基因在HeLa细胞中的表达及抗癌作用。方法用脂质体Lipofectamin介导重组质粒Egr-p16转染人HeLa细胞,采用RT-PCR的方法检测了。Coγ射线照射转染后的人HeLa细胞剂量效应和时程变化,用细胞计数检测细胞增殖的变化,用流式细胞术检测细胞周期的变化。结果研究证实0.5~8Gv照射后p16的转录水平高于对照,在2~4Gy照射后达到峰值,2Gy照射后2—24h高于对照组,在照射后4h达到峰值,然后逐渐下降。细胞生长曲线显示体外稳定转染联合。Coγ射线照射对HeLa细胞的增殖具有明显的抑制作用。细胞周期变化显示转染后的HeLa细胞经过照射后G0/G1期比例呈现剂量依赖性的下降,而S期则出现剂量依赖性的增加,出现明显的S期阻滞,G2/M期在2Gy出现明显的阻滞,在5和10Gy时逐渐下降,但是仍然高于对照组。结论^60Coγ射线可诱导转染的HeLa细胞p16转录水平的增强,同时在细胞增殖上出现明显的变化。 相似文献
42.
目的:以腺病毒(Ad—CMV)介导钙离子ATP酶基因(sarcoplasmic reticulum Ca^2+ ATPase,SERCa2a)转染骨髓间充质干细胞(Bone marrow msenchymal stem cells,BMSCs),测定表达产物,为心力衰竭的细胞移植和基因治疗提供实验基础。方法:体外培养大鼠骨髓间充质干细胞,用已构建好的Ad5-CMVSERCa2a真核载体进行转染。通过流式细胞仪检测转染效率。逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Westem杂交等方法检测SERCa2amRNA和蛋白质的表达。结果:Ad5-CMV—SERCa2a对BMC的转染率为80%左右,没有明显的细胞毒性反应。RT-PCR检测到SERCa2a,Western杂交确定SERCa2a蛋白表达。结论:腺病毒载体可有效地介导SERCa2a基因转染BMC,并表达SERCa2a蛋白,为基因治疗心力衰竭的研究奠定了基础。 相似文献
43.
大鼠骨髓间充质干细胞转染人TH基因的实验研究 总被引:1,自引:1,他引:0
目的评价酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)基因修饰骨髓间充质干细胞(mesenchymalstem cells,MSCs)后TH的表达情况及转染TH基因对MSCs的影响.方法构建含人TH基因的pCMV/hTH质粒,用脂质体转染原代培养的大鼠MSCs;Western blot及免疫细胞化学染色鉴定TH基因的表达及MSCs的分化情况;MTT比色法测定转染后的MSCs细胞活性,并与未转染的MSCs进行细胞活性比较.结果构建的pCMV/hTH质粒经ECoRI酶切后产生1.9okb和5.3kb的片段,与回收的目的基因及载体基因片段大小相符;转基因后的MSCs Western blot及免疫细胞化学染色显示TH染色阳性;转染后MSCs未见有NeuN,GFAP的表达;MTT比色法测定细胞活性,未转染与转染者差异无显著性.结论构建的TH基因能在体外培养的鼠MSCs中较好的表达,转染不会诱导MSCs向神经样细胞分化,对MSCs细胞活性无明显影响. 相似文献
44.
目的构建以HGF为目的基因、以EGFP为报告基因的非融合蛋白真核表达载体pCMV-HGF-IRES-EGFP,并观察HGF基因在原代培养的大鼠骨骼肌细胞中的表达。方法利用BamHI单酶切质粒pcDNA3-HGF,得到HGF基因片段,将其正向插入到真核表达载体pCMV-IRES-EGFP的CMV后方BamHI的单克隆位点。脂质体介导转染至原代培养的大鼠骨骼肌细胞,在荧光显微镜下观察EGFP的表达,并用ELISA法检测HGF的表达情况。结果构建了HGF的非融合蛋白真核表达载体pCMV-HGF-IRES-EGFP,转染原代培养的大鼠骨骼肌细胞24~72h后,见30%的细胞表达EGFP。ELISA检测细胞培养液证实转染后第1天即有HGF的表达,第4天HGF浓度为(5402.0±227.9)ng/L。结论成功构建了非融合蛋白真核表达载体pCMV-HGF-IRES-EGFP,其在原代培养的大鼠骨骼肌细胞中能有效表达。 相似文献
45.
目的:研究分离酶(seperase/estradiol-stimulated protein,esp1)在Spc-A-l细胞中对染色体分离的作用,为肿瘤的基因治疗探索新的治疗方法。方法:实验于2003-07/12在解放军第三军医大学分子遗传教研室完成。将含esp 1基因的EGFP-N1质粒转染到spe-A-1细胞,构建稳定的细胞系,检测其转染效率及对染色体分裂相的影响。结果:表达载体EGFP-N1-esp 1转染成功,稳定细胞系构建成功,染色体异常分裂相由众数68条减为57条。结论:esp 1的上调表达对于肿瘤的异常染色体分裂相有一定的抑制作用,对于肿瘤治疗有潜在的应用价值。 相似文献
46.
三氧化二砷脂质体的制备及其对鼠脑胶质瘤的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
目的研究三氧化二砷(As2o3)脂质体注射液对大鼠体内C6胶质瘤细胞凋亡的影响。方法采用超声薄膜分散法制备As籼脂质体,将126只成瘤大鼠分为As2O3脂质体组、As2O3组、生理盐水组。原子荧光法检测注射As2O3脂质体和As2O3后大鼠脑组织中As2O3浓度。从电镜、TUNNEL和大鼠生存时间等方面研究As2O3脂质体对C6胶质瘤的影响。结果As203,脂质体提高了As2O3的血-脑屏障通过。电镜和TUNEL检测显示:As203脂质体组细胞凋亡率给药后3d为(13.53±1.68)%,7d为(20.03±0.79)%,多于As2O3组和盐水组。动物生存时间亦优于其他两组。结论超声薄膜分散法是制备As2O3脂质体的较好方法。As203脂质体可较As203更明显地诱导鼠脑胶质瘤细胞凋亡,延长载瘤鼠的生存期。 相似文献
47.
阿苯达唑脂质体中磷脂含量测定 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:建立阿苯达唑脂质体中磷脂含量的测定方法。方法:利用可见分光光度法测定,检测波长485nm。结果:磷脂在0.01-0.1mg/ml浓度范围内呈现良好的线性关系(r=0.9993)。平均回收率为99.84%。结论:本方法灵敏,准确,简便,不受阿苯达唑共存的干扰,可用于本制剂的质量控制。 相似文献
48.
近年来脂质体药物释放系统技术已步入成熟期,目前有几种脂质体药物已处於临床后期考核或已进入市场。许多临床前和临床研究表明,药物(如抗肿瘤药)经脂质体包裹后毒性减弱,但效力仍保持甚至提高。其部分原因是由于改变了药物动力学,使药物在病灶部位(如肿瘤)累积,减少了在敏感组织的分布。正在研制的融合性脂质体系统具有胞内释放药物的能力,预期可提高治疗效果。脂质体设计方面的进展使其在释放新的生物技术产品(如重组蛋白、反义寡核苷酸和克隆基因)方面有了新的应用。 相似文献
49.
刘宏伟 《国外医学:眼科学分册》1995,19(5):304-312
脂质体在眼科方面已广泛应用。本阐述了脂质体在滴眼、结膜下注射、玻璃体内注射和诊断、治疗眼底疾病方面的作用,以及脂质体应用的局域性和前景。 相似文献
50.
将SRSV/3T3细胞DNA转染NIH/3T3细胞,转染后17d,实验组出现18个集落,对照组出现4个集落。将实验组集落细胞接种于3只BALB/C裸鼠皮下,全部长成纤维肉瘤。将SRSV/3T3细胞DNA用EcoRI和BamHI酶切电泳,分别应用5种癌基因(v-myc、KJ-ras、v-src、v-sis和e-fos)作Southern印迹和分子杂交。发现SRSV/3T3细胞DNA的BamHI酶切片段与c-fos探针杂交后,在2.2~3.0 kb处出现阳性杂交带。应用c-fos单抗检测转化细胞,细胞核内呈阳性反应。表明SRSV/3T3细胞DNA含有fos样转化基因,在转化细胞内有此基因的过度表达。 相似文献