用逆转录酶／聚合链反应方法检测急性粒细胞白血病AML1—ETO副合基因

用筑巢式逆转录／聚合酶链反应（ＲＴ／ＰＣＲ）方法检测伴ｔ（８；２１）染色体易位的Ｍ２ｂ型白血病ＡＭＬ１－ＥＴＯ融合基因转录本，该方法具有高度敏感性，可以从１０＾４－１０＾５个正常细胞ＲＮＡ中检出１个白血病细胞，对于Ｍ２ｂ型白血病的诊断及监测是一种快速，灵敏，特异的方法。我们研究的１１例Ｍ２ｂ型白血病中有１例未检测到的ＰＣＲ产物，可能与该型患中基因重组的分子异质性有关。     

幽门螺杆菌感染诱导胃黏膜上皮细胞凋亡及端粒酶逆转录酶表达

目的研究幽门螺杆菌（Hp）根除前后胃黏膜上皮细胞凋亡和端粒酶逆转录酶（hTERT）表达及其与bcl-2、c-myc蛋白表达的关系。方法采用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记（TUNEL）技术及免疫组化染色方法检测39例却Hp性患者根除治疗及21例却阴性患者对症治疗前后胃黏膜上皮细胞凋亡、hTERT、bcl-2、c—myc蛋白表达的变化。结果治疗前却阳性者胃黏膜上皮细胞凋亡指数为16．2％，显著高于却阴性者（P〈0．05）；却阳性者hTERT、c—myc蛋白表达显著高于却阴性者（53．8％比23．8％；53．8％比28．6％，P〈0．05）。邯根除者治疗后胃黏膜上皮细胞凋亡、hTERT及bcl-2、c—myc蛋白表达与根除前相比均显著下降（16．9％比9．0％；59．3％比22．2％；59．3％比25．9％；59．3％比14．8％，P〈0．01），且与却阴性对照组相比差异无统计学意义（P〈0．05）；而邯未根治组及对照组上述指标均无显著变化。治疗前bcl-2、c—myc蛋白与hTERT呈显著正相关，秩相关系数r分别为0．269、0．474（P〈0．05）。结论却感染诱导细胞凋亡及hTERT过度表达，使胃黏膜不稳定性增加。根除却可纠正细胞凋亡失调，使hTERT表达下降或消失，从而降低胃癌发生的可能性。bcl-2及c—myc蛋白对hTERT表达可能具有调控作用。     

尿脱落细胞端粒酶检测在膀胱癌中的诊断价值

目的　利用聚合酶链反应的酶联免疫吸附试验 ,探讨检测自排尿脱落细胞端粒酶活性在膀胱癌早期诊断中的意义。方法　应用 (端粒酶重复序列扩增基础上PCR -ELISA)TRAP -PCR -ELISA方法检测 5 8例膀胱癌患者、 2 5例良性血尿患者及 30例健康体检者尿脱落细胞的端粒酶活性。结果　 (1) 5 8例膀胱癌患者尿脱落细胞阳性率为 81 0 % (4 7/ 5 8) ,2 5例良性血尿患者及健康体检者均无端粒酶活性表达。 (2 )TRAP -PCR -ELISA方法检测膀胱癌患者尿脱落细胞端粒酶活性与常规尿细胞形态学镜检间的差别有非常显著性意义 (P <0 0 1)。结论　尿脱落细胞端粒酶活性的检测法对膀胱癌患者的阳性检出率较常规尿细胞形态学方法高 ,可用于膀胱癌的早期诊断。     

Inhibition on Telomerase Activity and Cytotoxic Effects by Cisplatin in Cultured Human Choroidal Melanoma Cells

Purpose: To study the changes of telomerase activity and cytotoxic effects by Cisplatin; cis-dichlorodiamine platinum (CDDP) in cultured human choroidal melanoma. Material and Methods: The primary cultured human choroidal melanoma cells were cultured in the presence and absence of CDDP with different concentration and time respectively. The toxic effects were evaluated by MTT and the level of telormarse was detected by PCR-ELISA assay. And the relationship between telomerase activity and cytotoxic effects were analyzed by a correlation analysis.Results: Following the increase of the concentration and the time of CDDP, gradually repressed telomerase activity was detected in cultured cells. Meanwhile, the restrain rate of the cells increased. The telomerase activity at 24h and 1μg/ml was repressed significantly compared with the control cells. However, the appearance of cell death lagged behind the decreasing of telomerase.Conclusions: CDDP is an effective telomerase inhibitor in cultured choroidal melan     

DMS0对EC9706细胞端粒酶活性及生长的影响

目的 研究二甲基亚砜(DMSO)对EC9706细胞端粒酶活性及生长的影响。方法 用1．3％DM50处理食管癌EC9706细胞，TRAP—ELISA法检测细胞端粒酶活性的改变，流式细胞仪分析细胞周期的改变。结果 DMSO处理后的EC9706细胞，端粒酶活性明显下降，且细胞周期明显改变，Gl期细胞比率显著增高，S期细胞数显著降低。结论 DMSO可抑制EC9706细胞端粒酶活性，使EC9706细胞生长停滞于Gl期，并诱导细胞凋亡。提示DMSO可用于食管癌的治疗。     

AML患者端粒酶逆转录酶mRNA的表达与端粒酶活性的检测

目的:建立一种实时荧光RT-PCR方法,定量检测急性髓细胞白血病(AML)患者外周血单个核细胞端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA的表达水平,观察其与AML发生及复发的关系,探讨hTERT mRNA的表达水平与端粒酶活性的相关关系。方法:采用实时荧光RT-PCR与Lightcycler荧光PCR仪定量检测hTERT mRNA的表达水平,采用PCR-ELISA检测端粒酶活性。结果:①AML首治患者、复发患者、完全缓解期患者以及健康体检者NhTERT分别为299.2±292.8、550.1±441.3、14.0±9.2和12.3±6.7,与健康体检者和完全缓解期患者比较,AML首治患者、复发患者hTERT mRNA表达水平显著升高,而且AML复发患者hTERT mRNA的表达水平显著高于首治患者;②AML首治患者、AML复发患者、AML完全缓解期患者以及健康体检者端粒酶的活性分别为32.8%±24.3%4、8.6%±31.4%、7.4%±5.1%和7.6%±3.6%,AML首治患者、复发患者端粒酶活性显著升高,而且AML复发患者端粒酶活性显著高于首治患者;③hTERT mRNA表达水平与端粒酶的活性呈现良好的相关性,相关系数为0.78。结论:hTERT mRNA表达水平与端粒酶活性的上调是AML发生与复发的一个重要因素,且hTERT mRNA表达水平与端粒酶活性呈良好的正相关。     

MDS患者细胞因子、端粒酶活性及凋亡相关蛋白检测与意义

探讨骨髓细胞凋亡和MDS患者无效造血的分子机制。采用ELISA法检测血清细胞因子水平。PCR ELISA法测定骨单个核细胞端粒酶活性。流式细胞仪分析Fas和Bcl 2表达水平。结果 :初发各亚型MDS患者的血清TNF α水平均高于正常对照 (P <0 0 5 ) ,MDS患者骨髓单个核细胞或基质细胞分泌TNF α水平均高于正常对照组。血清IL 1α和G CSF升高者分别为10 7% (3/ 2 8)例和 5 3 6 % (15 / 2 8)。MDS患者血清IL 8和IL 6高于正常对照组 ,各亚型之间无明显差别。在MDS向恶性克隆演变的过程 ,端粒酶活性水平随着恶性演变而逐渐升高。随着MDS患者恶性类型的演变 ,Fas基因表达逐渐降低 ,Bcl 2表达则逐渐升高。负性造血因子TNF α升高和抗凋亡Bcl 2的消长与MDS骨髓细胞凋亡有关。     

重组人免疫缺陷病毒Ⅰ型逆转录酶的纯化及其动力学性质

目的纯化重组人免疫缺陷病毒Ⅰ型逆转录酶（ＨＩＶ－１ＲＴ），筛选新的ＨＩＶ－１ＲＴ抑制剂。方法在适宜的培养条件下诱导工程菌Ｅ．ｃｏｌｉＪＭ１０９（ＰＫＲＴ２）可高效表达重组人免疫缺陷病毒Ⅰ型（ＨＩＶ－１）逆转录酶（ＲＴ）。应用ＤＥＡＥ－纤维素和磷酸纤维素离子交换柱层析法从细菌裂解液中分离、纯化重组ＲＴ。结果１升细菌培养液可得到１．１ｍｇ产物。ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳分析显示所纯化的重组ＲＴ为由两个分子量分别为６６ｋＤ和５１ｋＤ的亚基组成的杂二聚体。酶活性测定结果表明，经纯化的重组ＲＴ具有很高的逆转录酶活性（比活力为１．４×１０４ｕｍｇ）。结论本文通过对ＲＴ反应条件的研究，优化了ＲＴ反应系统，并测定了磷甲酸钠（ＰＦＡ）对重组ＲＴ的抑制效应，结果表明ＰＦＡ对重组ＲＴ的抑制反应动力学机制与天然ＲＴ相同，从而进一步说明用此法纯化的重组ＲＴ可直接用于抗ＨＩＶ药物的筛选与评价。     

hTRT催化功能区基因克隆及其在肿瘤中的表达

目的 研究端粒酶蛋白ｈＴＲＴ基因在肿瘤中的表达及其意义。方法 用ＲＴ－ＰＣＲ法检查Ｈｅｌａ细胞与ＰＧ细胞的ｈＴＲＴ表达水平,将Ｈｅｌａ细胞的ｈＴＲＴ催化功能克隆,并进行测序比较,应用原位杂交技术对肿瘤组织中的ｈＴＲＴ和ｈＴＲ（端粒酶ＲＮＡ组分）基因进行检测。结果 Ｈｅｌａ细胞与ＰＧ细胞均有ｈＴＲＴ表达,Ｈｅｌａ细胞ｈＴＲＴ催化功能区ｃＤＮＡ序列与文献报道一致,原位杂交结果显示ｈＴＲＴ与ｈＴＲ的协同