重组人免疫缺陷病毒Ⅰ型逆转录酶的纯化及其动力学性质 |
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引用本文: | 贾红伟,陶佩珍.重组人免疫缺陷病毒Ⅰ型逆转录酶的纯化及其动力学性质[J].中华实验和临床病毒学杂志,1998,12(2):0-142. |
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作者姓名: | 贾红伟 陶佩珍 |
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作者单位: | 中国医学科学院中国协和医科大学医药生物技术研究所 |
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摘 要: | 目的纯化重组人免疫缺陷病毒Ⅰ型逆转录酶(HIV-1RT),筛选新的HIV-1RT抑制剂。方法在适宜的培养条件下诱导工程菌E.coliJM109(PKRT2)可高效表达重组人免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)逆转录酶(RT)。应用DEAE-纤维素和磷酸纤维素离子交换柱层析法从细菌裂解液中分离、纯化重组RT。结果1升细菌培养液可得到1.1mg产物。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析显示所纯化的重组RT为由两个分子量分别为66kD和51kD的亚基组成的杂二聚体。酶活性测定结果表明,经纯化的重组RT具有很高的逆转录酶活性(比活力为1.4×104umg)。结论本文通过对RT反应条件的研究,优化了RT反应系统,并测定了磷甲酸钠(PFA)对重组RT的抑制效应,结果表明PFA对重组RT的抑制反应动力学机制与天然RT相同,从而进一步说明用此法纯化的重组RT可直接用于抗HIV药物的筛选与评价。
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关 键 词: | 人免疫缺陷病毒Ⅰ型 逆转录酶 纯化 |
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