端粒、端粒酶与食管癌

在上个世纪 30年代 ,遗传学家Muller和Mc Clintock提出了端粒 (telomere)的概念 ,70年代Greider和Blackburn在四膜虫中证实端粒结构为简单的TTGGGG核苷酸重复序列[1 ] ,1 984年Greider和Blackburn又在四膜虫中发现了端粒酶(telomerase) [2 ] 。近几年对端粒和端粒酶的研究十分活跃 ,现就端粒和端粒酶的一些进展及其在食管癌方面的研究予以阐述。1　端粒 (telomere)端粒是位于真核细胞染色体末端的一种由 2～ 2 0kb串联的短片段重复序列 (TTAGGG) n 及一些结合蛋白组成的特殊结构 ,在染色体定位、复制、保护和控制细胞生长寿命等方面…     

肺癌基础研究的几个热点

肺癌是严重危害人类生命健康的疾病,在发达国家和我国大城市肺癌已占恶性肿瘤死亡的首位。以北京为例,10年间肺癌病死率快速增长,男性增长26.85％,女性增长35.96％。虽然30年来手术方法、化疗及放疗不断进步,但肺癌5年生存率仅达到13％,因而人们对肺癌的诊断及生物治疗寄予厚望。目前的研究热点很多,现将我们能有所作为的概述如下。     

抗端粒酶核酶抑制肝癌细胞裸鼠移植瘤生长的研究

设计针对端粒酶RNA组分的特异性核酶，研究该核酶对肝癌细胞裸鼠移植瘤生长的影响。构建含针对端粒酶RNA组分锤头状核酶基因的重组真核表达质粒pBBS212-RZ，以及建立人肝癌细胞株HepG2裸鼠移植瘤模型。将不同剂量的pBBS212-RZ用脂质体包裹后进行瘤体内多点注射，对照组注射生理盐水或空质粒载体pBBS212。连续注射2l天后，测量移植瘤体积和重量，检测瘤组织端粒酶活性。抗端粒酶特异性核酶使瘤组织端粒酶活性下降(抑制率为72％)，明显地抑制了肝癌细胞裸鼠移植瘤生长(抑制率为68％)，且存在剂量依赖性。抗端粒酶特异性核酶作为一种有效的端粒酶抑制剂，可抑制肝癌细胞的生长，有望在肝癌基因治疗中发挥作用。     

神经干细胞的端粒酶活性与其增殖分化的关系

目的探讨体外培养的神经干细胞端粒酶活性与细胞增殖、分化的关系,以及细胞分化后端粒酶逆转录酶的表达情况。方法采用无血清培养法从新生大鼠脑皮质分离培养神经干细胞；通过免疫荧光细胞染色鉴定神经干细胞；细胞计数法检测细胞的增殖情况；TRAP-ELISA法测定神经干细胞的端粒酶活性：RT-PCR法和Western-blot法测定细胞分化前后的端粒酶逆转录酶的表达。结果从新生大鼠脑皮质分离培养的神经干细胞具有端粒酶活性；体外培养12周内,神经干细胞的端粒酶活性未见变化,细胞的增殖速率亦未见明显不同；神经干细胞分化后端粒酶活性丧失,端粒酶逆转录酶的mRNA和蛋白质也均未见表达。结论在体外培养过程中,大鼠脑神经干细胞的端粒酶活性和细胞增殖速率未见变化；神经干细胞分化后端粒酶活性丧失,可能是由于端粒酶逆转录酶停止表达所致。     

幽门螺杆菌感染对胃黏膜上皮细胞端粒酶活性的影响及其与细胞凋亡的关系

目的探讨幽门螺杆菌(Hp)感染对端粒酶活性的影响及其与细胞凋亡的关系。方法慢性胃炎伴萎缩者16例,伴肠化生者15例,伴中、重度不典型增生者14例,胃癌19例共64例为研究对象。采用快速尿素酶试验、Warthin-Starry银染色检测幽门螺杆菌,采用S-P法检测人端粒酶催化亚单位(hTERT)蛋白表达,采用TUNEL染色法原位检测细胞凋亡。结果(1)萎缩性胃炎、肠化生、不典型增生和胃癌组织中hTERT蛋白表达率分别为25.00%、46.67%、64.29%和78.95%,呈递增趋势。Hp阳性患者hTERT蛋白表达率为77.42%,显著高于Hp阴性患者(33.33%,P<0.01)。(2)Hp阳性伴hTERT蛋白阳性患者细胞凋亡指数为9.57±5.01,显著高于Hp阴性伴hTERT蛋白阳性患者(6.01±5.31,P<0.05)。结论(1)端粒酶激活可能参与了胃黏膜上皮细胞恶性转化的全过程。Hp感染与端粒酶活性密切相关。Hp感染可能是激活端粒酶的重要机制之一。(2)Hp感染既可激活端粒酶,引发细胞永生化,又可以诱导胃黏膜上皮细胞凋亡,进而增加了胃黏膜的不稳定性和癌变的危险性,这可能是Hp致癌的主要机制之一。     

端粒酶调节相关基因TRAP与肿瘤生物学特性的关系

目的：研究TRAP基因在人肿瘤组织中的表达及其与人端粒酶逆转录酶(hTERT)的作用相关性，探讨其在人肿瘤发生中的作用。方法：通过原核表达TRAP蛋白免疫新西兰白兔，制备特异性多克隆抗体；免疫组化检测TRAP及hTERT在人肿瘤组织中的表达；通过构建TRAP真核表达载体、基因转染，观察TRAP对细胞hTERT转录、端粒酶活性和癌细胞生长及成瘤性的影响。结果：通过大肠杆菌表达的TRAP蛋白免疫、制备多克隆抗体，经Westem blot鉴定与TRAP具有特异结合性；免疫组化显示247例恶性肿瘤中有213例TRAP阳性，表达率为86．2％，而在所有癌旁组织中TRAP为阴性。另外，交界性及癌前病变与良性病变组织中TRAP表达差异也有显著性：进一步检测卵巢生发上皮肿瘤、乳腺癌、肝癌及中枢神经系统肿瘤组织hTERT表达，显示hTERT与TRAP表达的结果相一致。TRAP正义转染使hTERT及端粒酶活性升高，细胞增殖加快；而反义转染时，两者均下降，细胞增殖受抑。裸鼠成瘤性实验表明：正义TRAP使癌细胞成瘤性增强，而反义则抑制移植瘤的生长。结论：TRAP表达存在于人癌组织及部分癌前病变，与癌细胞恶性表型相关，并与hTERT表达一致。TRAP基因参与对端粒酶的调节作用，可能与人肿瘤发生有关。     

端粒酶和妇科肿瘤的研究进展

端粒酶是一种RNA依赖的逆转录酶 ,能够延长染色体末端的端粒长度。它由三个主要部分组成———端粒酶RNA亚单位、端粒酶催化亚单位及连接二者的端粒酶相关蛋白。端粒酶激活是细胞永生化和肿瘤形成的关键步骤 ,其活性受到多种因素的调控。端粒酶催化亚单位hTERTmRNA可能是其激活的关键限速步骤。在妇科肿瘤的癌变过程中 ,端粒酶活性不同程度地升高 ,hTERT不断上调。端粒酶及其催化亚单位有可能成为妇科肿瘤筛查的一种重要的肿瘤标志物