干细胞向胰岛素分泌细胞诱导分化的研究进展

近年来,糖尿病的发病率不断上升,而且发病更趋年轻化。文献报道:全世界的糖尿病患者已超过2亿,并且以每年200万人的速度增加。我国的糖尿病患者已经超过4000万,预计到2010年将达到6000万人,其中Ⅰ型糖尿病占5%左右。糖尿病患者虽然采用胰岛素治疗在一定程度上能够改善患者的糖代谢紊乱,然而长期的胰岛素注射不仅给患者带来不便,并且不能有效地防止或逆转糖尿病引起的微血管病变及其并发症。胰岛移植不仅能够纠正糖代谢紊乱,而且还能有效地防止或逆转糖尿病引起的微血管病变及其并发症。     

胎儿卵巢组织玻璃化冻存效果的研究

目的探讨玻璃化冻存法对胎儿卵巢组织形态和功能的保存效果。方法采用改良EG5.5/30玻璃化液冻存胎儿卵巢皮质片,解冻后观察卵巢组织学变化,卵巢皮质片异种异位移植后,观察受体鼠动情周期恢复率、恢复时间、卵泡发育状况。结果实验组与新鲜培养后移植组、添加抗氧化剂培养后移植组相比动情周期恢复率差异无统计学意义(P>0.05),但高于新鲜移植组(P<0.005);动情周期恢复需要的天数接近于新鲜移植组,明显短于两种培养组(P<0.05);在卵泡计数上,实验组每高倍视野的卵泡计数明显高于新鲜移植组(P<0.005),与培养后移植组间的差异无统计学意义(P>0.05)。移植后18周,组织学观察见大量窦卵泡,而培养组仅偶见窦卵泡。结论玻璃化冻存法可有效冻存胎儿卵巢组织,且不影响卵泡继续发育的潜能。     

冬虫夏草抗角膜移植排斥反应实验研究的初步报告

用兔心脏血Ｔ淋巴细胞转化实验、角膜厚度计和扫描电镜等方法，对鸡→兔穿透性异种角膜移植的实验模型进行检测观察。结果：术后３周时，各组Ｔ淋巴细胞转化率均达峰值，冬虫夏草治疗组心脏血Ｔ淋巴细胞转化率为乃．６９±１．２７，空白对照组为２７．３２±２．３８，组间比较差异存在显著性（Ｐ＜０．０５）；在观察期内，冬虫夏草组植片透明率为６２．５％，而对照组植片出现明显排斥反应，植片透明率为零，植片厚度随混浊程度的加重而增加；电镜下观察冬虫夏草组的Ｄｅｓｃｅｍｅｔ膜内皮细胞优于对照组。结果提示：冬虫夏草在角膜移植术后能发挥免疫抑制剂的作用，并能强化激素的效果。     

异种移植转基因用含粘附分子-2启动子的人CD59 重组基因的构建

目的：构建含人粘附分子－2（ICAM－2）启动子的人补体调节蛋白CD59重组基因,并钭其用于异种器官移植转基因。方法：利用PCR方法从人血基因组扩增得到ICAM－2启动子、CD59基因的第一内含子片段,经电泳分离、切胶回收纯化得到上述片段,分别双酶、单酶切这两条片段,纯化回收备用;双酶切pcDNA3-CD59真核表达载体,经电泳分离,切胶回收纯化得到不含病毒启动子、含筛选基因Neo的一段pcDNA3-CD59cDNA作为载体序列;ICAM－2启动子片段先与载体进行定向克隆连接反应后转化细菌,阳性转化蓖质粒抽提及酶切鉴定,得到pcDNA3-ICAM2-CD59质粒;再单酶切此质粒,纯化该载体与CD59第一内含子片段连接,转化细菌、抽提质粒,用脂质体将该质粒转染猪血管内皮细菌,流式细胞仪检测CD59蛋白表达。结果：得到pcDNA3-Enhancer-ICAM2-CD59质粒,以EcoR I消化此重组质粒,产生5．5及0．5kb两片段,以Hind Ⅲ消化重组质粒,得到5．45及0．55kb两片段,以Kpn I/Hind Ⅲ双酶切质粒时,出现5．0、0．55、0．4kb 3条片段,对插入子分别进行测序,上述结果完全符合设计要求及正确序列。流式细胞仪检测重组基因表达阳性。结论：含人ICAM－2启动子的CD59重组基因表达载体获得成功,该重组基因构建成功为转基因应用奠定了基础。     

成人睾丸组织在裸鼠体内的存活情况研究

目的以成人睾丸组织为供体,免疫缺陷小鼠为受体,研究成人睾丸组织中生精细胞异种移植后的存活及变化情况。方法将成人正常睾丸组织植入去势裸鼠背部,于移植后110d取出移植物,进行组织形态学观察。结果在一例移植前显示非正常生精上皮结构标本的移植物中,大多数生精小管中只含有Sertoli细胞,而另一例移植前显示出正常生精上皮结构的标本,在移植到裸鼠背部110d后,仍然观察到圆形和长形精子细胞存在。结论将成人睾丸组织移植到免疫缺陷小鼠体内,110d后仍观察到有生精细胞的存活。     

氯吡格雷对异种移植心脏急性血管性排斥反应的影响

目的观察氯吡格雷对豚鼠-大鼠非协调性异种移植心脏急性血管性排斥反应的影响。方法采用颈部异位心脏移植模型,分2组:对照组(n=10)以眼镜蛇毒因子预处理;实验组(n=8)以眼镜蛇毒因子加氯吡格雷联合预处理。观察比较移植物存活时间、病理变化及细胞凋亡情况。结果移植物病理表现均为急性血管性排斥反应改变。实验组经氯吡格雷预处理的移植物P选择素表达积分减少[(1.66±0.32)vs(2.52±0.22),P<0.05),凋亡指数降低[(11.5±2.8)vs(15.6±3.9),P<0.05),移植物平均存活时间明显长于对照组[(50±4)hvs(41±2)h,P<0.05)。结论氯吡格雷可延长非协调性异种移植物存活时间,减轻异种移植免疫损害。     

《异种移植》出版

本书是以参加国家自然基金重大项目“异种移植的基础研究”的专家为主撰写的，主编为上海交通大学医学院周光炎教授和中国科学院遗传与发育研究所分子发育开放实验室主任孙方臻。主要介绍异种移植的基础理论、面临的问题以及解决这些问题的思路与方法，包括异种移植物排斥反应的机制与防治对策、供动物的基因改造与选育、人畜共患病的防御、异种皮肤和胰岛细胞移植、异种移植的实验研究方法与临床研究状况等。对从事移植临床工作、移植和免疫学研究、     

《异种移植》出版

本书是以参加国家自然基金重大项目“异种移植的基础研究”的专家为主撰写的，主编为上海交通人学医学院周光炎教授和中国科学院遗传与发育研究所分子发育开放实验室主任孙方臻。主要介绍异种移植的基础理论、面临的问题以及解决这些问题的思路与方法，包括异种移植物排斥反应的机制与防治对策、供动物的基因改造与选育、人畜共患病的防御、异种皮肤和胰岛细胞移植、异种移植的实验研究方法与临床研究状况等。对从事移植临床工作、移植和免疫学研究、分子和细胞生物学研究、核称植及干细胞生物工程研究、畜牧兽医学研究的科技工作人员及相关领域的大专院校师生来说，本书是一本不可多得的参考书。     

内皮抑素抑制SKOV3细胞生长及其在裸鼠皮下移植瘤中的作用机制

目的:探讨内皮抑素对卵巢癌SKOV3细胞及其荷瘤鼠卵巢癌组织的生长作用及机制。方法:MTT法观测内皮抑素对体外SKOV3细胞的抑制作用,透射电镜观察细胞凋亡、免疫细胞化学检测SKOV3;细胞中bcl-2和bax蛋白表达;将SKOV3细胞移植至裸鼠皮下,观察内皮抑素对皮下移植瘤生长的影响;TUNEL和电镜法观察肿瘤细胞的凋亡,免疫组织化学和RT-PCR法检测瘤组织中bcl-2和bax的表达。结果:内皮抑素具有体外抑制SKOV3细胞增殖的作用(P<0．01);能诱导SKOV3细胞凋亡,但对bcl-2和bax的表达无明显影响。内皮以抑素能抑制裸鼠皮下移植瘤的生长(P<0．05);其中bcl-2的表达低于对照组,而bax表达无明显改变。结论:内皮抑素具有抑制SKOV3细胞及皮下移植瘤生长的作用,其机制可能与诱发细胞凋亡和调节bcl-2／bax表达相关。     

脱细胞异种(猪)真皮基质修复体表组织缺损凹陷的临床作用

对患者体表组织缺损凹陷的修复关键是寻找一种理想的填充材料。多年来，在整形外科界都采用传统的自体真皮脂肪瓣填充，由于其吸收率高达50％～60％，且取材供区造成新的缺损，临床效果一直不理想。自2002年11月-2005年12月以来，我们采用脱细胞异种（猪）真皮基质作为填充材料，对10例不同部位体表软组织缺损凹陷的患者进行皮下充填，取得满意效果。