血管内皮前体细胞在糖尿病足治疗中的应用

糖尿病是严重损害我国人口健康的主要疾病之一,糖代谢紊乱所引发的血管病变是导致糖尿病患者致残和致死的丰要原因。如何防治糖尿病血管病变所产生的并发症是糖尿病研究的热点课题。糖尿病足是糖尿病患者由于神经或血管病变导致足部缺血性坏死并合并感染的一种严重并发症。由于对其发生机制不完全明了,目前临床缺乏特异有效的治疗手段。     

P-糖蛋白抑制剂对两性霉素B血脑屏障转运的作用

目的 探讨P-糖蛋白抑制剂对两性霉素B(AmB)血脑屏障转运的影响.方法 应用小鼠脑血管内皮细胞建立体外血脑屏障模型,选取维拉帕米作为P-糖蛋白抑制剂,AmB作为受试底物,经细胞毒性实验选定合适的温育时间及药物浓度,分别进行不同时间点的AmB细胞摄取实验及不同维拉帕米浓度的AmB细胞摄取实验.组间均数比较采用单因素方差分析,均数两两比较采用Bonferroni检验.结果 AmB的血脑屏障转运随时间延长不断积累,与同一时间点对照组相比,抑制剂组在90 min(t=6.753,P=0.001)、120 min(t=3.574,P=0.016)、150 min(t=4.759,P=0.005)处AmB细胞摄取水平明显升高,其余时间点两组间差异无统计学意义.与阴性对照组相比,AmB细胞摄取水平在不同浓度维拉帕米组(2、5、10、50、75和100μmol/L)均有显著提高(P=0.000、0.014、0.000、0.014、0.000、0.000),且随维拉帕米浓度升高增加幅度更明显.结论 P-糖蛋白抑制剂维拉帕米可提高脑毛细血管内皮细胞对AmB的摄取作用,提示P-糖蛋白参与血脑屏障AmB的转运.     

Tet-on系统对胰岛细胞瘤中TRB3基因的表达调控作用

目的构建Tet-on系统可控表达TRB3基因的胰岛细胞瘤细胞株。方法通过Tet-on系统将TRB3质粒转染INS-rβ（r9）细胞中，经潮霉素筛选，克隆扩增得到可诱导表达TRB3基因的细胞系。采用实时定量RT-PCR、细胞免疫化学和Western Blot检测该基因表达的可诱导性。结果三种检测方法都显示，500ng／ml DOX诱导48h可使转染的r9细胞中TRB3基因表达达到峰值，mRNA表达可上调60倍。结论通过本研究结果得到可控的TRB3高表达细胞株，为进一步研究该基因在胰腺肿瘤细胞中的功能提供了良好的细胞模型。     

线粒体分裂对胰岛β细胞功能的影响

目的 探讨线粒体分裂对胰岛β细胞功能的影响.方法 通过可诱导表达野生型动力相关蛋白1(Drp-1 WT)基因和突变型Drp-1(Drp-1K38A)基因的大鼠INS-1 β细胞,分析不同葡萄糖条件下,线粒体分裂对胰岛β细胞功能的影响.结果 在高糖条件下,强力霉素诱导后的Drp-1WT细胞线粒体分裂过程增强,网络状结构部分断裂,多呈点状结构,细胞胰岛素分泌功能降低(P<0.01),线粒体膜电位降低(P<0.05),细胞内ATP含量减少(P<0.05),细胞色素C表达增加,而在Drp-1K38A细胞中,上述变化明显减轻.结论 线粒体分裂增强可抑制胰岛β细胞功能.

Abstract：

Objective To investigate the effect of mitochondrial fission on the function of pancreatic β cells.Methods INS-1 stable cell lines allowing inducible expression of either wild-type dynamin-related protein 1 (Drp-1 WT)or its dominant-negative mutant(Drp-1 K38A)were used.The effect of mitochondrial fission on the function of pancreatic β cells were investigated under different concentrations of glucose.Results There were increased mitochondrial fission and disintegration of the mitochondrial reticulum into multiple punctiform organelles in Drp-1 WT cells induced with doxycycline under high glucose condition.Insulin secretion(P<0.01),mitochondrial membrane potential(P<0.05),and ATP content(P<0.05)were decreased and cytochrome C expression was increased after the expression of Drp-1 WT under high glucose condition while these changes were markedly mild in Drp-1 K38A expression cells.Conclusion The increased mitochondrial fission inhibits pancreatic β cell function.     

清开灵注射液对血脑屏障模型通透性的影响

目的通过观察清开灵注射液对血脑屏障（BBB）模型通透性的影响,探究其抗脑缺血再灌注损伤作用的可能机制及靶点。方法采用细胞插入器培养单层脑微血管内皮细胞,建立体外BBB模型,三气培养箱中1%O2模拟缺氧培养24 h,分为正常组、缺氧组、清开灵小剂量组和大剂量组,通过对跨内皮细胞电阻（TEER）和辣根过氧化物酶（HRP）透过率的测定,观察清开灵注射液对缺氧损伤BBB通透性的影响。结果清开灵注射液可改善缺氧对BBB造成的损伤,提高TEER,降低跨内皮细胞通透性,并且有剂量依赖的趋势,清开灵注射液大剂量组与缺氧组比较,差异有统计学意义（P〈0.01）,清开灵注射液小剂量组改善作用虽不如大剂量组显著,但亦能减少HRP透过BBB（P〈0.05）。结论清开灵注射液能有效改善缺氧损伤造成的BBB功能受损。     

实验性牙周炎动物模型的研究进展

牙周炎是指发生在牙龈、牙周膜、牙槽骨和牙骨质的炎症性、破坏性疾病,是人类最古老、最普遍的疾病之一,其发病率在60％～90％,是造成成年人牙齿丧失的主要原因之一[1].本文就近年来国内外实验性牙周炎动物模型建立的概况作一综述. 1牙周炎发生的基本条件 牙周炎是菌斑微生物引起的感染性疾病,菌斑微生物是引发牙周炎的始动因子,是造成牙周炎破坏的必需因素.牙菌斑中存在少量致病菌,它能破坏宿主的防御能力,引发牙周组织的破坏.宿主自身的易感性在牙周炎的发生发展过程中也起着十分重要的作用,包括遗传因素、性激素水平、全身免疫状态、系统性疾病等都会影响宿主的防御功能,影响牙周炎的发生.     

胰岛α细胞培养上清液对INS-1细胞胰岛素释放与合成的影响

在培养的INS 1细胞中 ,分别加入不同比例的胰岛α细胞培养上清液 (以下简称上清液 ) ,在不同浓度葡萄糖的刺激下 ,分别孵育不同时间 ,用放射免疫法测定INS 1细胞培养基中的胰岛素含量。在 2 0mmol L葡萄糖浓度下 ,不同刺激时间 ,不同浓度的上清液刺激INS 1细胞分泌的胰岛素显著高于 0 %上清液 (以下简称对照组 ,P <0 0 5或0 0 1 )。在 0、1 85mmol L葡萄糖刺激时 ,不同浓度的上清液对INS 1细胞的胰岛素分泌无明显作用 ,而在 5 6、1 6 7和 5 0mmol L葡萄糖刺激时 ,不同浓度的上清液刺激INS 1细胞分泌的胰岛素显著高于对照组 (P <0 0 5或 0 0 1 )。RT PCR结果显示 ,在 1 6 7mmol L葡萄糖刺激 4、1 2和 2 4h后 ,30 %上清液对INS 1细胞胰岛素mRNA水平均无明显影响。提示胰岛α细胞培养上清液对糖刺激的INS 1细胞的胰岛素分泌有促进作用 ,但不影响胰岛素的生物合成     

微血管内皮细胞的分离、纯化和功能特性

近年来的研究表明，微血管内皮细胞在形态、表型和功能等方面都不同于大血管内皮细胞，因此，采用微血管内皮细胞，而不是脐静脉内皮细胞来研究发生于组织器官水平的病变已经成为一种共识。然而，由于细胞分离培养技术的限制，微血管内皮的研究在我国还是一个薄弱的研究领域。近年来随着微血管内皮细胞分离、纯化、培养技术的提高，各种不同组织器官的微血管内皮细胞相继培养成功。利用体外培养的微血管内皮细胞作为细胞模型来研究各种疾病的发病机制已经成为医学研究的重要手段。本文回顾了近年来的相关文献，就微血管内皮细胞的分离培养、鉴定及不同组织器官微血管内皮细胞的功能特性作一简要综述。