血清miRNA-494和miRNA-125a表达在腰椎间盘退变疾病中的临床应用

［摘要］ 目的 探讨血清miRNA-494和miRNA-125a表达与腰椎间盘退变程度的相关性。 方法 选择腰椎间盘膨出或突出患者45例为退变组,下腰痛患者42例为对照组,所有患者均行腰椎MRI,通过磁共振弥散加权成像技术分析腰椎间盘退变程度与椎间盘Pfirrmann(PM)分级的关系。 结果 对照组共检查126个椎间盘,其中分级在Ⅰ级和Ⅱ级（正常）99个椎间盘,占78.6%（99/126）, Ⅲ级、Ⅳ级和Ⅴ级27个椎间盘,占21.4%（27/126）;退变组共检查135个椎间盘,其中分级在Ⅰ级和Ⅱ级（正常）17个椎间盘,占12.6%（17/135）,Ⅲ级、Ⅳ级和Ⅴ级118个椎间盘,占87.4%（118/135）。2组PM分级构成比差异有统计学意义（P＜0.05）, 退变组表观弥散系数(apparent diffusion coefficient,ADC）值低于对照组（P＜0.05）。退变组血清miRNA-125a较对照组明显降低,血清miRNA-494水平较对照组明显升高（P＜0.05）。退变组miRNA-125a表达水平与ADC值呈正相关（r=0.853,P＜0.01）,miRNA-494表达水平与ADC值呈负相关（r=-0.897,P＜0.01）。血清miRNA-125a和miRNA-494的ROC曲线分析显示miRNA-125a和miRNA-494的曲线下区域面积分别为0.893（95%CI=0.815～0.971,P＜0.01）、0.852（95%CI=0.762～0.932,P＜0.01）,敏感度分别为87.9%和93.7%,特异度分别为77.0%和67.7%,准确度分别为80.0%和77.7%,阳性预测值分别为92.3%和92.1%,阴性预测值分别为81.8%和76.9%。 结论 血清miRNA-494和miRNA-125a的表达可能与椎间盘退变疾病的发病机制有关,检测其表达水平可为椎间盘退变疾病的早期诊断及治疗提供基因依据。     

miR-655-3p在头颈鳞状细胞癌中的表达改变及其临床意义

［摘要］ 目的 初步探讨miR-655-3p在头颈鳞状细胞癌中的表达情况及其可能的临床意义。 方法 通过实时荧光定量反转录聚合酶链反应（quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR）的方法,检测头颈鳞状细胞癌组织及其配对癌旁正常组织中miR-655-3p的相对表达水平,并分析其相对表达水平与头颈鳞状细胞癌患者临床病理参数之间的关系。 结果 miR-655-3p在头颈鳞状细胞癌组织样本中相对表达水平明显低于配对癌旁正常组织样本中（P＜0.05）;miR-655-3p高表达组和低表达组在临床分期（P=0.038）、组织分化程度（P=0.036）及是否发生颈部淋巴结转移（P=0.042）各临床特征中的构成比差异有统计学意义。而在患者性别、年龄、吸烟、饮酒等临床特征组的构成比中差异无统计学意义（P＞0.05）。 结论 头颈鳞状细胞癌中miR-655-3p表达降低,其表达水平与患者临床分期、癌组织分化程度及是否伴有颈部淋巴结转移等临床特征相关,提示其可能作为抑癌基因,在头颈鳞状细胞癌中表达失活,某种程度上促进了头颈鳞状细胞癌的发生发展。     

Genetic,genomic and epigenetic studies as tools for elucidating disease pathogenesis in primary Sjögren’s syndrome

Primary Sjögren’s syndrome (pSS) is characterized by lymphoid infiltration of lacrimal and salivary glands leading to xerophthalmia and xerostomia. pSS is a complex disease involving both genetic and environmental risk factors. Technological advances over the past 10 years have revolutionized genetics and genomics research enabling high-throughput characterization and analysis of DNA and RNA in patient samples on a genome-wide scale. Further, application of high-throughput methods for characterization of epigenetic variation, such as DNA methylation status, is increasingly being applied to AID populations and will likely further define additional risk factors for disease risk and outcome. Main results obtain in pSS through these various approaches are reviewed here.     

MicroRNAs as components of regulatory networks controlling erythropoiesis

Over the last two decades, the role of microRNAs has been extensively investigated, and it has become clear that these small non-coding RNAs play an essential role in several biological processes including erythropoiesis and that their dysregulation is associated with pathologies. Recent technical innovations have considerably advanced this field and allowed extensive study of microRNA expression and regulation in a variety of cell types. In erythropoiesis, microRNA regulation is involved at defined stages and promotes either stem cell proliferation or erythroid cell differentiation. In this review, while recapitulating the maturation steps of erythroid cells, we discuss the progresses in our understanding of microRNA regulation in the erythroid lineage and their contribution to erythroid disorders.     

miR-137调控人脑胶质瘤细胞增殖侵袭能力的体内外研究

目的探讨miR-137调控人脑胶质瘤细胞的增殖侵袭性生长能力及其机制。方法采用实时PCR分析miR-137在不同品系胶质瘤细胞及不同级别胶质瘤样本中的表达;脂质体介导miR-137模拟物转染胶质瘤细胞,实时PCR检测转染后miR-137的表达;应用MTT法、流式细胞术评价细胞生长和增殖的生物学特征变化;划痕实验、transwell细胞体外迁移实验检测肿瘤细胞迁移、侵袭能力;动物实验评价体内条件下肿瘤生长能力变化;Western blot、免疫组织化学染色检测肿瘤细胞Ki-67、MMP9表达水平。结果实时PCR分析显示：miR-137在胶质瘤中低表达。miR-137模拟物转染LN229和U87细胞后,实时PCR显示：miR-137表达上调;MTT法及流式细胞术显示细胞生长受抑,出现G0/G1期阻滞;划痕实验及transwell实验证实：细胞迁移侵袭能力下降;进一步Western blot、免疫组织化学染色显示：增殖侵袭相关蛋白Ki-67、MMP9表达降低;动物实验反映：肿瘤细胞生长受抑制。结论 miR-137高表达可抑制胶质瘤细胞生长和侵袭能力,提示miR-137可作为基因治疗脑胶质瘤的候选靶点。     

LncRNA-MALAT1通过miR-142-3p/TEAD1分子轴调控结直肠癌细胞增殖与凋亡#br#

目的　探讨长链非编码RNA-肺腺癌转移相关转录子1（LncRNA-MALAT1）对结直肠癌细胞增殖与凋亡的影响及相关作用机制。方法　通过Real-time PCR与Western blot实验检测结直肠癌细胞株与人正常结肠上皮细胞中LncRNA-MALAT1、miR-142-3p基因以及TEA结构域转录因子1（TEAD1）蛋白的表达;使用si-MALAT1转染HCT116细胞,在此基础上共转染miR-142-3p inhibitor,利用Real-time PCR与Western blot检测细胞中LncRNA-MALAT1与miR-142-3p基因以及TEAD1、Bax、Bcl-2与Cyclin D1蛋白的表达,通过CCK-8实验检测细胞的增殖水平,通过流式细胞术检测细胞的凋亡水平,通过双荧光素酶实验检测LncRNA-MALAT1与miR-142-3p以及miR-142-3p与TEAD1的结合。结果　与人正常结肠上皮细胞相比,结直肠癌细胞株中LncRNA-MALAT1基因与TEAD1蛋白呈高表达,miR-142-3p基因呈低表达（P＜0.05）;沉默LncRNA-MALAT1能够促进miR-142-3p基因与Bax蛋白表达,抑制LncRNA-MALAT1基因以及Bcl-2、Cyclin D1与TEAD1蛋白表达,抑制细胞增殖,并促进细胞凋亡;在此基础上沉默miR-142-3p能够对上述调控作用实现部分逆转;双荧光素酶实验结果显示,LncRNA-MALAT1与miR-142-3p以及miR-142-3p与TEAD1能够结合。结论　LncRNA-MALAT1能够结合miR-142-3p,促进miR-142-3p靶基因TEAD1表达,进而促进结直肠癌细胞增殖,抑制其细胞凋亡,促进结直肠癌的病理进程。     

微小RNA-27b-3p与基质金属蛋白酶13在人软骨细胞的对应关系

目的探讨微小RNA-27b-3p(miR-27b-3p)与基质金属蛋白酶-13(MMP-13)在人软骨细胞表达及其靶向对应关系。 方法运用蛋白质印迹法(WB)与实时定量PCR技术(qRT-PCR)明确miR-27b-3p与MMP13在正常和骨关节炎(OA)人软骨细胞的表达。利用不同浓度的白介素(IL)1β干预原代人软骨细胞24 h,或利用不同时间点的IL-1β(10 ng/ml)干预原代人软骨细胞。利用原位杂交、转染及双荧光素酶报告技术确定miR-27b-3p与MMP13的靶向对应关系;结合运用核转录因子-κB(NF-κB)和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路抑制剂评估其作用机制。两组资料比较采用独立样本t检验,多组资料比较采用单因素方差分析,LSD法多重比较检验。 结果WB、qRT-PCR和原位杂交检测结果显示,与正常软骨相比,OA软骨中miR-27b-3p表达降低(t＝5.07,P<0.01),MMP13表达升高(t＝－6.31,P<0.01)。IL-1β干扰后的结果显示miR-27b-3p表达降低(F＝129.54,P<0.05),MMP-13表达升高(F＝394.50,P<0.05)。通过TargetScan数据库和荧光素酶报告基因检测结果分析,野生型-MMP13组荧光素酶活性降低(F＝55.27,P<0.001),突变型-MMP-13荧光素酶活性变化没有统计学意义(P＝0.654)。利用特异性MAPK信号抑制剂和NF-kB抑制剂干预IL-1β诱导软骨细胞模型结果提示,与对照组相比,抑制剂组的MMP13表达水平降低(F＝28.43,P<0.001),miR-27b-3p表达水平增高(F＝35.04,P<0.001)。 结论miR-27b-3p在OA软骨细胞呈现低表达,并负向调控MMP13的表达,其作用机制可能是通过NF-κB和MAPK信号通路,这结果提示这miR-27b-3p可能作为OA诊断与治疗的潜在靶点。     

miR-301b在调节脂肪细胞分化中的作用

摘要： 目的 研究 miR-301b 在调节间充质干细胞向脂肪细胞分化过程中的作用。方法 对小鼠骨髓基质细胞 ST2 进行脂肪细胞诱导分化, 并利用 qRT-PCR 检测细胞分化过程中成脂分化诱导组相对于阴性对照组的 miR-301b 表达变化。对 ST2 细胞转染 miR-301b mimics 并进行成脂诱导分化, 利用 qRT-PCR 和 Western blot 技术检测 miR- 301b mimics 转染组和阴性对照片段 （NC） 转染组细胞的脂肪特异性基因和蛋白表达水平的变化。结果 成脂分化诱导组 miR-301b 相对表达水平 （0.219±0.021） 较对照组 （1.000±0.425） 减少 （P＜0.05）。miR-301b mimics 转染组的脂肪细胞特异性转录因子过氧化物酶体增殖物激活受体 （PPARγ）、 CCAAT 增强子结合蛋白 （C/EBPα） 和脂肪型脂肪酸结合蛋白 （aP2） 的相对表达量均较 NC 转染组降低 （P＜0.05）。miR-310b mimics 转染组与 NC 转染组相比, 标志基因aP2、 转录因子PPARγ 和C/EBPα 蛋白的表达量均减少 （P＜0.05）。结论 miR-301b可抑制脂肪细胞分化。