C反应蛋白测定在小儿败血症中的应用

目的　本研究的目的在了解C反应蛋白的 (CRP)测定对于小儿败血症的诊断价值。方法　连续选取2 0例白细胞总数不高的小儿败血症患者 ,作回顾性研究对象。比较其治疗前和治疗后 7～ 1 0d后疾病的痊愈或明显好转时CRP水平 ,并与体温、白细胞分类结果进行比较。结果　治疗后CRP水平 (0 57± 0 68μg/ml)显著低于治疗前水平 (5 90± 3 57μg/ml) ,P <0 0 0 1 ;治疗前CRP的阳性率为 1 0 0 % ,显著高于嗜中性粒细胞比率 >75 %的阳性率 (30 % )和体温高于 37 5℃的阳性率 (30 % ) ,P <0 0 0 5。结论　CRP可以作为一种反映细菌感染的敏感指标 ,有助于不典型小儿败血症的诊断和疗效观察。     

中国汉坦病毒H82O5株G2糖蛋白基因的克隆及在真核细胞中的瞬时表达

从感染病毒乳鼠脑组织提取总RNA，采用RT－PCR和分子克隆技术将扩增到的G2糖蛋白基因插入含CMV启动子的pcDNA3.1/His质粒载体中，通过脂质体介导转染COS－7细胞，用SDS－PAGE、Western-blot及IFIA方法分别测定表达产物的相对分子量及特异性。结果证明获得正向插入的G2－pcDNA3.1/His重组表达质粒，表达产物的相对分子量为56ku，与理论预期大小一致，并且可与汉坦病毒H8205株的腹水抗体起特异反应。表明构建的G2－pcDNA3.1/His重组质粒所表达的蛋白为中国汉坦病毒株特有，能在哺乳动物细胞中表达并具有抗原性，重组质粒可应用于汉坦病毒的DNA疫苗研究。     

Agilent 2100 Bioanalyzer在基因差异表达研究中的应用

目的观察Agilent 2100 Bioanalyzer 芯片分析系统(以下简称Bioanalyzer)在基因差异表达研究中的应用。方法应用限制性显示技术分别从正常和热休克处理后的酿酒酵母细胞中分离出cDNA片段,然后再用Bioanalyzer和传统的琼脂糖凝胶电泳技术对RD-PCR产物进行检测分析。结果Bioanalyzer能更快速、敏感地分离和显示差异表达的基因片段,并且通过对差异片段进行定量比较,发现了数个表达有明显差异的基因片段。结论Bioanalyzer在基因差异表达研究中具有重要的应用价值。     

Cytokeratin expression in a congenital multipotential primitive neuroectodermal tumor

A case of an uncommon congenital primitive neuroectodermal cerebellar tumor (PNET) in a 5-month-old child is reported. After subtotal surgical resection, the residual tumor did not respond to radiation and chemotherapy. Histologically, the tumor was composed of small, round, undifferentiated cells and several other patterns like astrocytomatous, oligodendrogliomatous, and ependymomatous structures. Immunostaining was positive for most of the cells for vimentin and S 100, fewer were positive for glial fibrillary acid protein (GFAP) and neuron-specific enolase, and only a few for synaptophysin. Surprisingly, the tumor showed strong expression of several monoclonal cytokeratins (CK) with different molecular weights, together with epithelial membrane antigen. Furthermore, we found a coexpression of the tumor cells for CK and vimentin, while CK-GFAP and CK-S 100 were negative. Ultrastructurally, intracyto-plasmic intermediate filaments could be observed corresponding to immunohistochemical CK expression. The very strong CK and vimentin expression in this case was interpreted as a sign of the embryonic nature of the tumor.     

胞嘧啶脱氨酶的原核表达和多克隆抗体的制备

目的：在原核系统中表达并纯化大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶（cytosine deaminase,CD)，制备鼠抗大肠杆菌CD多克隆抗体，方法：亚克隆CD基因到原核表达载体pMAL-c2和pBV222中，并转化入大肠杆菌DH5α内，诱导表达并纯化MBP-CD和6his-CD融合蛋白，用纯化的MBP-CD融合蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体。结果：通过重组质粒的酶切筛选出重组阳性克隆，成功地表达和纯化出MBP-CD和6his-CD融合蛋白，用纯化的MBP-CD成功制备了鼠抗CD多克隆抗体，并用6his-CD和GST-CD重组蛋白进行Western印迹分析，证实了抗体的正确性，结论：应用多克隆抗体可以检测体内外CD基因的表达，为临床前和临床上深入开展CD基因的生物治疗研究提供重要的实验材料。     

重组结核分支杆菌16000蛋白抗原(rPA16)的免疫原性研究

目的：研究结核分枝杆菌重组16000蛋白（rPA16)诱发家兔产生抗体的能力并评价其血清学诊断的价值。方法：家兔按注射的抗原及佐剂的不同分组，皮下多点注射分别进行免疫，6次免疫后采血，双向琼脂扩散试验和酶联免疫吸附试验（ELISA）跟踪兔血清抗体效价的时间效应并检测兔血清与所试各类分支杆菌PPD有无交叉反应；同时检测rPA16与各分支杆菌PPD的免疫羊血清的反应，并用rPA16抗原检测人血标本，分析该抗原的临床检测的敏感性和特异性。结果：兔血清抗体效价结果显示：5个月后，加佐剂的抗原组的兔免疫血清仍能检测到抗体，不加佐剂组2个月后血清抗体检测即为阴性，ELISA检测兔免疫血清比双向琼脂扩散方法要更敏感，rPA16抗原加佐剂引起的兔血清抗体滴度最高可达1：6400，不加佐剂组的血清抗体滴度仅为1：400，ELISA法分析抗rPA16的兔血清的特异性表明其特异笥较好，仅与牛、人型结核分支杆菌的PPD呈阳性反应，与其他所试分支杆菌PPD反应均为阴性，同时又分析了rPA16抗原的特异性，与人型PPD相比，该抗原只与所试各类分支杆菌，BCG、牛分支杆菌免疫的血清呈阳性反应，而人型PPD则基本上与结核分支杆菌免疫的血清均呈阳性反应，ELISA检测血清标本结果：肺结核病组中rPA16和PPD检测敏感性分别为64.8%和75.2%；健康组，卡介苗接种阳转健康组，rPA16和PPD检测特异性分别为96.2%,88.5%和94.3%,66.7%。结论：rPA16具有较强的免疫原性和一定的特异性，可能成为结核病血清学诊断试剂之一。     

谷胱甘肽合成酶系基因协调表达体系的构建

通过 PCR获得 E.coli B谷胱甘肽合成酶系基因 ( gsh I,gsh II)片段 ,结合定点突变稀有起始密码子 ,设定 gsh I与 gsh II位置与距离 ,构建双顺反子重组表达载体 p Trc99A/gsh I- gsh II,建立GSHI、GSH- II蛋白表达体系。结果表明 :以 0 .0 8mmol/L IPTG于 2 8℃诱导工程菌 E.coli BL2 1( DE3) ( p Trc99A/gsh I- gsh II) ,GSH- I、GSH- II蛋白比为 4.5∶ 1 ( m∶ m)时谷胱甘肽合成能力最高 ,达到每克湿菌体 8.5 mg。通过构建单顺反子重组表达载体 p Trc99A/gsh I、p Trc99A/gsh II测定GSH- I与 GSH- II蛋白的最适配比 ,结果表明 :在 GSH- I、GSH- II蛋白总量恒定的情况下 ,要提高谷胱甘肽产率 ,两者比例以 3∶ 1～ 6∶ 1为宜     

PTEN基因蛋白在胆囊癌组织中表达的研究

目的 :探讨抑癌基因PTEN蛋白在胆囊癌组织中的表达情况及其临床病理意义。方法 :应用免疫组化对 2 8例胆囊腺癌 ,4例胆囊鳞癌及其相应癌旁组织中PTEN蛋白进行检测 ,并结合患者的临床病理资料进行分析。结果 :PTEN蛋白在 32例癌旁组织中全都呈阳性表达 ,而癌组织中PTEN阳性表达率仅 34.4 %。胆囊癌组织中PTEN蛋白阳性表达与患者性别、年龄及组织类型无明显相关性 ,但与组织分化程度明显相关。结论 :PTEN蛋白在胆囊癌组织中阳性表达率较低 ,说明该基因失活可能在胆囊癌发生发展中起重要作用。PTEN阳性表达对胆囊癌患者的预后有一定意义     

Pharmacokinetics, metabolism and renal excretion of sulfatroxazole and its 5-hydroxy- and N4-acetyl-metabolites in man

Hydroxylation is the predominant pathway of metabolism for sulfatroxazole in the body, accounting for 70 per cent of the dose. Fifteen per cent of the dose is acetylated unimodally and 10 per cent is excreted unchanged. The half-lives of sulfatroxazole and its metabolites 5-hydroxysulfatroxazole and N4-acetylsulfatroxazole are approximately 22 h after administration of sulfatroxazole. N4-acetylsulfatroxazole, taken as parent drug, is eliminated by renal excretion (92 per cent of the dose). The initial elimination half-life of N4-acetylsulfatroxazole is 4.5 h, which later increases to 70 h as the result of the acetylation-deacetylation equilibrium. Probenecid inhibits the renal excretion of the metabolites 5-hydroxy- and N4-acetylsulfatroxazole. Inhibition of the N4-acetyl metabolite favours the deacetylation, which results in an increase of the T 1/2 of sulfatroxazole from 20 to 30 h. The protein binding value of sulfatroxazole is 84 per cent, that of N4-acetylsulfatroxazole is 37 per cent. Sulfatroxazole is excreted renally by passive processes, while the metabolites are excreted by both passive and active processes.