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91.
Anticancer Drug Resistance of HeLa Cells Transfected With Rat Glutathione S-transferase pi Gene 总被引:3,自引:0,他引:3
Cao W Zuo J Meng Y Wei Q Shi ZH Ju LM Fang FD 《Biomedical and environmental sciences : BES》2003,16(2):157-162
Objective To establish a cytologic expressing system of rat glutathione S-transferase pi (GST-pi) cDNA for detecting the resistance of HeLa cells to anticancer drugs. Methods The assessment was made with various anticancer drugs (adriamycin, mitomycin, cisplatinum and vincristine) that showed different cytotoxicities in transfectant HeLa cells with pSV-GT containing rat GST-pi cDNA (HeLa/pSV-GT) or control pSV-neo (HeLa/pSV-neo). Expression levels of GST-pi mRNA in HeLa/pSV-GT and HeLa/pSV-neo were measured by in situ hybridization using Digoxin-labelled cDNA probe. Results HeLa/pSV-GT expressed significantly high degree of GST-pi mRNA, whereas both HeLa/pSV-neo and HeLa cells had very low expression. Cytotoxicities of HeLa/pSV-GT and HeLa/pSV-neo with 4 anticancer drugs were measured by MTT assay. Drug concentrations for yielding 50% inhibition (IC50) in HeLa/pSV-GT by adriamycin, mitomycin and cisplatinum were 70.13μg/mL, 10.95μg/mL and 16.52μg/mE respectively. In contrast, IC50 in HeLa/pSV-neo was 10.34μg/mL, 7.48μg/mL and 13.70μg/mE respectively. The cytotoxicities of vincristine on both HeLa/pSV-GT and HeLa/pSV-neo were not significantly different. Conclusions Our findings suggest that HeLa/pSV-GT containing rat GST-pi cDNA is resistant to some anticancer drugs due to overexpression of GST-pi. Also, HeLa/pSV-GT cell line could serve as a useful cytogenetic model for further research. 相似文献
92.
地塞米松体外诱导宫颈癌细胞株凋亡及其机制的研究 总被引:4,自引:0,他引:4
目的 :研究地塞米松 (Dex)体外能否诱导宫颈癌细胞株 (HeLa细胞 )发生凋亡及其机制。方法 :采用透射电镜、DNALadder、流式细胞仪等方法进行凋亡检测 ,用ECLWesternblot方法检测凋亡过程中相关基因表达的变化。结果 :地塞米松体外作用于HeLa细胞后 ,透射电镜观察到了凋亡小体 ;DNALadder法也检测到了凋亡时DNA降解形成的梯带 ;流式细胞仪检测到了细胞凋亡峰 ,且峰值随着处理时间的延长而增高。在凋亡过程中 ,凋亡相关基因bcl 2表达下调 ,而p5 3基因表达无明显改变。结论 :地塞米松体外能诱导HeLa细胞发生凋亡 ,其机制与bcl 2基因的表达下调有关 相似文献
93.
氟哌啶醇对人红白血病耐多柔比星细胞株多药耐药性的逆转及其机制 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 从临床常用药物中探寻逆转肿瘤耐药性的活性物质。方法 应用MTT法测定不同浓度Hal处理的瘤细胞对 0~ 2 0 μmol·L- 1多柔比星 (Dox)的敏感性的影响。RT PCR法分析 12 .5 μmol·L- 1氟哌啶醇 (Hal)处理后多药耐药基因 (MDR1) ,多药耐药相关蛋白 (MRP)和谷胱甘肽S转移酶Pi(GSTπ)mRNA表达的变化。通过流式细胞术观察 0 ,6 .2 5 ,12 .5 ,2 5 μmol·L- 1Hal对细胞内药物蓄积和细胞周期进程的影响。结果 Hal对K5 6 2 /Dox的耐药性具有明显的逆转作用。在 12 .5 ,6 .2 5及 3.12 5 μmol·L- 1时的逆转倍数分别为 8.35 ,4 .2 1及 2 .16。用 12 .5μmol·L- 1Hal处理后 ,MDR1及MRP的mRNA表达水平均呈现时间依赖性明显降低 ,分别较原水平下降76 .3%及 6 4.6 %。药后d 2GSTπmRNA表达下降6 6 .1% ,于d 3回升。Hal处理细胞lh后 ,Dox在细胞内蓄积量明显增加 ,并呈浓度依赖性 ;此外 ,Hal可明显增强Dox对K5 6 2 /Dox细胞的G2 /M阻滞作用 ,12 .5 μmol·L- 1浓度可以使 5 μmol·L- 1Dox的G2 /M阻断由单独应用时的 9.9%± 4 .3%增加到2 3.4 %± 3.0 %。结论 Hal具有较强的逆转K5 6 2 /Dox细胞MDR的作用 ,其逆转机制为多种途径 ,包括相关基因mRNA的表达下调 ,增加细胞内药物蓄积 ,增强Dox对K5 6 2 /Dox在G2 相似文献
94.
人乳中的乳铁蛋白(hLf)对细菌、真菌、病毒和内毒素等的感染有重要预防作用。虽然通过动物、真菌等可以生产重组人乳铁蛋白,但这类系统需要昂贵的提纯工艺,且产品中还可能含有难去除的致病微生物和动物细胞源性的感染性蛋白质等有害物质。为了在栽培植物细胞产生hLf,作者用过氧化酶 相似文献
95.
"彗星"分析法检测人癌裸鼠移植瘤的放射敏感性 总被引:3,自引:0,他引:3
目的 探讨“彗星”分析法应用于人实体肿瘤放射敏感性检测的可能性。方法 应用“彗星”分析法 ,以尾力距之比 (RTM)作为终指标 ,检测人肺腺癌、人食管鳞癌和人鼻咽鳞癌等 3种人癌裸小鼠移植瘤的放射敏感性。裸小鼠移植瘤组织被消化并稀释成细胞浓度为 4× 10 4ml的单细胞悬液后 ,分成对照组 (0Gy)和不同剂量照射组 ,照射组分别给予 2、5、10和 15Gy的 6MVX射线的冰上照射 ,照射后立即进行“彗星”分析。结果 3种人癌裸小鼠移植瘤细胞未照射时 (0Gy)的尾力矩 (TM)差异有显著性意义 (F =9.11,P <0 .0 1)。不同剂量 (2、5、10和 15Gy)照射后 ,3种人癌裸小鼠移植瘤细胞未做校正时的TM所反映放射敏感性由高到低的变化趋势依次为 :肺腺癌 >食管鳞癌 >鼻咽鳞癌 ,显然与临床一般印象不符 ;而经与对照组进行“本底”校正后的RTM所反映放射敏感性由高到低的变化趋势依次为 :食管鳞癌 >鼻咽鳞癌 >肺腺癌 ,则符合临床一般印象。结论 ①应用“彗星”分析法检测实体肿瘤的放射敏感性 ,尾力矩必须进行“本底”校正 ,即扣除对照组本底误差后的尾力矩才能很好地反映实体肿瘤的放射敏感性差异。②“彗星”分析法可用于检测人体肿瘤组织的放射敏感性。 相似文献
96.
目的 研究新一代硝基咪唑衍生物 Doranidazole在低氧环境下对胰腺癌细胞的放射增敏效果。方法 在低氧和加Doranidazole环境下对人胰腺癌细胞系施行单次大剂量γ线照射 ,通过微孔板荧光酶标仪检测细胞死亡率来研究放射增敏作用。细胞死亡的增敏效果从时间相关性及形态学方面进行评价。Doranidazole在低氧环境下的选择性增敏效果利用流式细胞技术进行验证。结果 在7种胰腺癌细胞系中 ,5种细胞实行 30Gy大剂量照射 5d后的细胞死亡率在低氧环境下因Doranidazole的添加而显著增高 ;而常规环境下却无明显的增敏作用。同时提示Doranidazole在低氧环境下的选择性增敏作用有时间相关性。结论 Doranidazole在低氧环境下对胰腺癌细胞大剂量γ线照射具有明确的增敏效果 相似文献
97.
整合常规技术探索肿瘤差异表达基因 总被引:1,自引:0,他引:1
目的建立一种简单实用的、探索肿瘤差异表达基因的方法.方法从骨髓瘤细胞株U266中分离出CD45 和CD45-细胞,结合应用减法杂交、抑制性PCR、T/A克隆、测序等技术,寻找CD45 和CD45-细胞间的差异表达基因.结果减法杂交可缩减约20倍的高丰度表达基因,意即低丰度表达基因富聚约20倍. 用正向或负向减法探针,分别和来源于CD45 细胞克隆的质粒DNA杂交,筛选500个表达克隆,发现了几个差异表达基因,并经RT-PCR证实.结论采用常规分子生物学方法建立起来的综合技术,可以用来研究肿瘤性疾病的差异表达基因,且简单实用,能在普通分子生物学实验室开展. 相似文献
98.
人肝癌原发性耐药细胞亚系的建立及耐药机制的初步探讨 总被引:3,自引:0,他引:3
目的从人肝癌细胞系HeFG2中筛选出原发性耐药株,建立相应的细胞亚系并探讨其耐药机制.方法采用阿霉素(adriamycin,ADM)大剂量冲击法筛选原发性耐药细胞株,倒置显微镜下观察其形态学变化,细胞计数法绘制生长曲线,MTT法检测药物敏感性,流式细胞术分析细胞周期和检测耐药蛋白的表达.结果随冲击次数的增加,筛选出细胞的耐药指数(resistance index, RI)逐渐升高,筛选3次后对ADM的RI可达30.5;其形态学特点、生长特性及细胞周期分布与亲本细胞有明显差异,同时发现耐药蛋白P-gp、MRPt LRP表达增强.结论肝癌细胞系HepG2是个非均质的群体,其中存在着原发性耐药细胞株. 相似文献
99.
目的 肾胚瘤是一种较常见的儿科实体肿瘤,该肿瘤的发生与抑癌基因WT1密切相关。本研究的目的是利用脂质体介导转染法将WT1cDNA导入G401细胞,研究WT1基因对G401细胞生长凋亡及致瘤性的作用。方法 通过Western blot检测WT1基因在肾胚瘤中的表达、采用碘化丙锭(PI)染色法检测G401细胞的凋亡情况、并且对G401的致瘤性进行分析,探讨WT1基因在肾胚瘤发生及治疗中的作用。结果 WT1 DNA可诱导G401细胞凋亡,并且使其致瘤性有所降低。结论 该结果为确定WT1在肾胚瘤病因方面的作用、为肾胚瘤的基因治疗提供重要的依据。 相似文献
100.
PKC-α反义核酸对子宫颈癌HeLa细胞增殖及c-myc、c-jun表达的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 探讨PKC α反义核酸对Hela细胞增殖及c myc、c -jun表达的影响。方法 采用脂质体(LP)介导法 ,用 0 0 1~ 1 0 0 μmol/L各浓度PKC α反义核酸 (asODN)转染HeLa细胞 ;MTT法及软琼脂克隆形成分法别检测HeLa细胞生长指数 (growthindex,GI)及其体外增殖能力 ;免疫组化法检测PKC -α、及c -myc、c -jun的表达。结果 PKC -αasODN 0 0 5 1 0 0 μmol/L各浓度组Hela组胞GI显著降低 (P <0 0 5 ) ,且呈量效依赖关系 ;其中 1 0 0 μmol/和 0 5 0 μmol/LPKC -αasODN对HeLa细胞生长有非常显著抑制作用 (P <0 0 1) ;0 5 0 μmol/LPKC -αasODN组HeLa细胞软琼脂克隆形成率均低于对照组 (P <0 0 5 ) ,并可下调其PKC-α、c -myc、c-jun的表达 (P <0 0 5 )。结论 LP介导PKC -αasODN转染Hela细胞 ,可有效阻断HeLa细胞PKC -α的表达 ,抑制其体外生长和增殖能力 ,下调c -myc、c -jun蛋白表达 ;PKC -αasODN可能通过下调c-myc、c -jun表达发挥作用。 相似文献