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81.
采用新近发展的cDNA代表性差异分析法筛选鼻咽癌中不表达的或表达降低的cDNA序列。结果显示:有9个与已知基因高度同源的cDNA序列。通过对这些已知基因的结构和功能分析,发现有与细胞骨架成分相关的基因:αactinin,ezrin和细胞角蛋白13;直接与瘤基因和抑瘤基因相互作用的基因:鲨烯合成酶和TRIP1基因;直接参与DNA合成以及调控基因转录和翻译的基因:TAFⅡ68和组蛋白H10;另外还有人类补体因子B及类转运RNA合成酶的基因。这些基因大多具有相当于抑瘤基因的功能。从而进一步说明鼻咽癌的发生是多基因相互作用的结果。 相似文献
82.
人肺癌相关抗原的基因克隆 总被引:4,自引:0,他引:4
目的克隆人肺癌相关抗原的基因。方法用λgt11Sfi-Not定向克隆载体构建人肺鳞癌细胞系L-78的cDNA文库,并以抗人肺癌单抗ALT-04为探针进行了筛选。对名为hlc-14的cD-NA克隆作了测序分析与进一步研究。用重组的pXJ41-hlc14质粒转染NIH3T3细胞,通过免疫组化法对克隆基因进行了表达检测与鉴定,还观察了转染细胞的软琼脂集落形成能力。结果建成1.4×106pfu/ml人肺癌cDNA文库,经过四轮免疫学筛选获得6个cDNA克隆,最大的cDNA克隆为hlc-14,长954bp。对该克隆的测序结果与基因库资料比较,未发现同源序列。hlc-14cDNA转染的NIH3T3细胞有明显的肺癌相关抗原表达,并且在软琼脂中的集落形成能力增强。结论hlc-14是一个新的肺癌相关抗原的cDNA序列。这一序列的发现为阐明肺癌的发病机理、探索肺癌基因治疗的靶基因提供了新的线索 相似文献
83.
目的:克隆人输卵管蛋白(hOviductin)全长cDNA序列,真核细胞中表达,并了解hOviductin是否与大鼠卵母细胞结合。方法:构建人输卵管黏膜上皮细胞cDNA文库,以~(32)P标记的兔输卵管蛋白全长cDNA序列为探针,自文库中筛选hOviductin全长cDNA序列。将获得的hOviductin编码区cDNA序列插入pEGFP-N1真核表达载体,转染HeLa细胞,表达分泌重组的绿色荧光蛋白(EGFP)-hOviductin,并估量其浓度。激光扫描共聚焦显微镜下观察EGFP-hOviductin与大鼠卵巢的卵丘细胞-卵母细胞复合物(COC)或去除透明带后的裸卵的结合情况。结果:所构建的cDNA文库重组率为98.5%,滴度为1.1×10~6pfu/mL。克隆所得hOviductin全长cDNA约为2500 bp,Gen-Bank的登录号为AY189737。EGFP-hOviductin在条件培液中的浓度为0.236 nmol/L,能结合在去透明带的大鼠裸卵质膜外表面,而未见其与COC结合。结论:hOviductin能在HeLa细胞中表达分泌,其分泌产物可结合于大鼠裸卵质膜外表面。 相似文献
84.
目的 应用抑制性消减杂交技术,构建人甲状腺癌与正常甲状腺差异表达的cDNA消减文库。方法 分别从甲状腺癌及正常甲状腺组织中提取总RNA,应用高效、灵敏的抑制性消减杂交技术,构建成功cDNA消减文库,再转染大肠杆菌进行文库扩增。结果 构建成功具有高消减效率的人甲状腺癌组织cDNA消减文库,文库扩增得到了400个克隆,随机挑取50个制备质粒,酶切分析均得到50bp-400bp大小插入片段,这些片段可能就是载有高度特异性的目的片段。结论 人甲状腺癌组织cDNA消减文库的建立为进一步克隆甲状腺癌特异性表达的新基因奠定了基础。 相似文献
85.
克隆人心肌肌钙蛋白I(cTnI)基因全序列,并进行分泌表达。从人心肌组织提取总RNA,经逆转录得到cDNA第一链,以此为模板,PCR扩增目的条带,重新设计上游引物,用相同PCR程序完成点突变;突变后PCR产物克隆入Pfd5载体,并用PCR、SpeI XhoI双酶切、载体测序等方法鉴定;用ITPG诱导cTnI的表达。PCR扩增出630bp左右条带,Pfd5—cTnI融合表达载体用PCR、SpeI Xho1双酶切均可见630bp左右条带,测序结果与预期序列一致;诱导后培养基及细胞周质均检测到cTnI蛋白免疫原活性。人心肌肌钙蛋白I得到成功表达。 相似文献
86.
正常肝组织与肝硬化组织差异表达基因的削减cDNA文库的构建及差异基因的初步筛选 总被引:1,自引:0,他引:1
目的构建人正常肝组织与肝硬化组织差异表达基因的削减cDNA文库.方法采用抑制削减杂交技术,以正常肝组织及有肝癌背景的肝硬化组织作为对比材料.分离出mRNA,经反转录后,通过两轮杂交、两次PCR和T/A克隆构建了两种组织间差异表达基因的cDNA削减文库.结果挑取70个克隆进行酶切和PCR鉴定,显示65个克隆有250~2000 bp插入片段.结论用SSH和T/A克隆技术成功构建了正常肝组织与肝硬化组织差异表达基因的削减cDNA文库.该文库的建立为进一步筛选、鉴定出肝癌发生过程中的相关调控基因奠定了基础,也有助于阐明肝硬化在肝癌发生过程中所起的作用. 相似文献
87.
88.
mRNA 差异显示方法是分离、克隆基因的先进技术。我们采用mRNA 差异显示方法克隆并鉴定了小细胞肺癌新的相关基因cDNA片段 ,现报告如下。一、材料与方法1.材料 :标本来源于中国医科大学第一临床学院胸外科一例小细胞肺癌患者。2 .方法 :应用mRNA差异显示技术克隆与鉴定出 3个差异cDNA片段 ,在国际互联网上应用blastsimilaritysearchingsystem进行同源性比较和分析。二、结果1.mRNA差异显示结果 :锚定引物和随机引物所得的差异显示结果显示出多条cDNA条带 ,选择其中 3条cDNA差异带用于分析 (其中差异带A为癌组织所特有 ,差异带B、… 相似文献
89.
大鼠颌下腺血管内皮生长因子cDNA的转移及表达 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:探讨以颌下腺为靶器官,进行血管内皮生长因子(VEGF)基因治疗后,颌下腺中VEGF含量变化。方法:构建了VEGF基因表达的真核细胞表达载体,以阳离子脂质体为介质,向大鼠颌下腺转染外源性的VEGF基因,应用RT-PCR技术观察VEGF基因的表达,ELISA方法检测颌下腺中VEGF的含量变化。结果:转pBKCMV-VEGF121基因后第1天,大鼠颌下腺内VEGF的表达及涎液中VEGF的含量即开始 相似文献
90.
一种新的胸腺素α原cDNA 总被引:2,自引:1,他引:1
我们克隆了有中国人特征的胸腺素α原全长cDNA,并进行测度分析。方法从健康中心人PBMCPoly(A)^+RNA中采用RT-PCR法克隆huPTMAαcDNA,酶切鉴定,序列分析,结果经测序后发现该基因是一个国外的高加索人种胸腺素α原有86.4%,同源性的新基因。结论从中国人中新发现了一个huPTMAα基因,并于日前被美国NCBI(NationalCenter of bIOTECHNOLOGYiN 相似文献