刚地弓形虫磷酸甘油酸变位酶2基因片段克隆、表达及抗原性分析

目的克隆、表达刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)磷酸甘油酸变位酶2(TgPGAM2)基因片段,并分析其抗原性。方法提取弓形虫RH株速殖子总RNA,逆转录合成cDNA。PCR扩增TgPGAM2基因。扩增产物经双酶切后连接入pET30a(+)载体,重组质粒转化大肠埃希菌(E.coli)DH5α,阳性菌落经PCR和双酶切鉴定,并测序。将测序正确的重组质粒pET30a(+)-TgPGAM2转化至E.coli BL21并加入异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结合考马斯亮蓝染色检测表达产物。以兔抗弓形虫血清为一抗,蛋白质印迹(Western blotting)分析重组蛋白的抗原性。结果PCR扩增产物约为750 bp。菌落PCR、双酶切和测序结果显示,重组质粒pET30a(+)-TgPGAM2构建成功。SDS-PAGE结果显示,经IPTG诱导获得相对分子质量(Mr)约30 000的可溶性重组蛋白。Western blotting分析证实其能被兔抗弓形虫血清识别。结论刚地弓形虫RH株TgPGAM2基因片段可在原核表达系统中表达,且该可溶性重组蛋白具有抗原性。     

刚地弓形虫缓殖子期特异抗原BSR4的重组表达与免疫特性的初步研究

目的重组表达刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)Prugniaud(PRU)株缓殖子期特异抗原(BSR4)基因,并检测其免疫特性。方法将已构建的重组表达质粒pET28a(+)-BSR4转化至大肠埃希菌(E.coli)BL21中,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达并纯化。分别以慢性感染PRU株刚地弓形虫小鼠血清和健康小鼠血清为一抗,用蛋白质印迹(Western blottting)鉴定BSR4重组蛋白的免疫反应性。用3H-TdR掺入法检测慢性感染PRU株刚地弓形虫小鼠脾淋巴细胞对不同浓度BSR4重组蛋白的特异性增殖水平,计算刺激指数(SI)。以BSR4重组蛋白为抗原,用ELISA法检测急性(抗弓形虫IgG-IgM+)和慢性(抗弓形虫IgG+IgM-)弓形虫病患者血清,以及健康人血清,各20份,评判该蛋白的免疫反应性。结果重组质粒pET28a(+)-BSR4经IPTG诱导后表达重组蛋白BSR4,经变性、复性和纯化后获得相对分子质量(Mr)45 000的可溶性蛋白。Western blotting分析结果显示,该蛋白能被慢性弓形虫感染小鼠血清识别。脾淋巴细胞增殖试验表明,1、5和25μg/ml重组蛋白BSR4刺激感染弓形虫小鼠脾淋巴细胞的SI分别为1.13、0.88和1.17,显著高于未感染组(分别为0.46、0.24和0.49,均P<0.01)。ELISA检测结果显示,BSR4抗原能被慢性弓形虫病患者血清(IgG+IgM-)特异性识别(20/20),而不能被急性弓形虫病患者血清(IgG-IgM+)识别(0/20)。结论重组BSR4蛋白具有特异的免疫原性和免疫反应性。     

无锡地区鸡弓形虫感染的血清流行病学调查

目的了解无锡地区散养鸡的弓形虫感染状况。方法应用ELISA方法调查无锡地区309例散养鸡的弓形虫抗原、抗体阳性率,并与150例集约化养殖鸡的弓形虫感染率进行比较,其中一项阳性即视为弓形虫感染阳性。结果 309例散养鸡中,抗原阳性29例,阳性率为9.39%;抗体阳性53例,阳性率为17.15%;双阳性13例,双阳性率为4.21%;散养鸡总体阳性率为22.33%。集约化养殖鸡总体弓形虫感染率为2.67%。散养鸡感染率显著高于集约化养殖鸡感染率(χ2=29.19,P<0.01)。结论无锡地区散养鸡群弓形虫感染率较高,应引起重视。     

隐性弓形虫感染对人行为影响及可能机制概述

本文综述了弓形虫感染对人行为的影响及其可能的机制,以期为进一步揭示寄生虫感染与宿主行为的关系提供参考。     

弓形虫P30基因-乳酸乳球菌重组质粒的构建及其表达

目的构建表达弓形虫昆山分离株P30基因的乳酸乳球菌表达载体L2-Ps-P30-T,并在乳酸乳球菌中表达P30蛋白。方法用BamHⅠ/XhoⅠ将P30从质粒pSK-P30中切出并克隆至质粒pSK-PsT,构建pSK-Ps-P30-T质粒;用PvuⅡ将表达元件-Ps-P30-T-从pSK-Ps-P30-T质粒中切出,以相同的酶切位点导入大肠埃希菌与乳酸乳球菌穿梭质粒pTRKL2,构建L2-Ps-P30-T质粒;通过电转化将L2-Ps-P30-T导入乳酸乳球菌中,以Western blot鉴定P30蛋白的表达。结果酶切及PCR鉴定质粒L2-Ps-P30-T构建正确,并在乳酸乳球菌中表达能被弓形虫病患者血清识别的分子质量单位为30ku的蛋白。结论重组载体L2-Ps-P30-T构建正确,电转化入乳酸乳球菌后能表达具有反应原性的P30蛋白。     

Vaccination against murine toxoplasmosis using recombinant Toxoplasma gondii SAG3 antigen alone or in combination with Quil A

PURPOSE: Surface antigen 3 (SAG3) of Toxoplasma gondii is very similar in structure to the major surface antigen 1 (SAG1). Although numerous studies have supported the importance of SAG1 in protection against T. gondii infection, few reports exist on SAG3. MATERIALS AND METHODS: Glutathione-S-transferase (GST)-fused SAG3 of T. gondii (rSAG3) were immunized into BALB/c mice alone or in combination with Quil A (rSAG3/Quil A), and then evaluated the protective immunity in vivo and in vitro against murine toxoplasmosis. RESULTS: Immunization with rSAG3 or rSAG3/Quil A resulted in significantly more survival days and fewer brain cysts after challenge with T. gondii compared to an infected control group. Mice immunized with rSAG3 alone or in combination with Quil A produced significantly more specific IgG2a antibody, whereas specific IgG1 antibody titers did not increase. The percentage of CD8+ T cells, IFN-gamma mRNA expression, and nitric oxide production significantly increased in rSAG3- and rSAG3/Quil A-immunized mice. CONCLUSION: These results indicate that vaccination with Toxoplasma rSAG3 results in partial protective immunity against T. gondii infection through induction of a Th1-type immune response, and that protective immunity is accelerated by the modulating effects of Quil A.     

Molecular Survey of Toxoplasma gondii in Sheep,Cattle and Meat Products in Chaharmahal va Bakhtiari Province,Southwest of Iran

Background

Toxoplasmosis is a worldwide spread disease. The present study examined the prevalence of Toxoplasma gondii infection among animals of edible meat (cattle and sheep) in Chaharmahal va Bakhtiari Province (Southwest of Iran) in 2012. Furthermore, we attempted for the first time to identify this parasite from the meat products in the province.

Methods

The tongue, brain, femur muscle and liver of 50 sheep and 70 cattle as well as 50 samples of meat products were selected and collected to perform molecular survey using Nested-PCR method.

Results

Of the studied sheep, 38% were infected. The infection rate in the age groups under 1 year, 1-2 years, and more than 2 years was 25%, 35.29% and 52.94%, respectively. The infection rate in femur muscle, brain, liver and tongue was 28%, 32%, 30% and 16%, respectively. Of the studied cattle, 8.57% were infected. The infection rate in the age groups 1-2 years, 2-4 years, and more than 4 years was 3.7%, 9.09% and 14.28%, respectively. Sheep was infected 6 times more than cattle (OR = 6.53 CI = 2.374-18.005).The infection rate among samples of meat products was 12% (6 samples out of 50 samples).

Conclusion

Due to the high rate of this parasitic infection among the slaughtered animals as well as meat products in this region, the use of infected material can be one of the main risk factors of transmission of the parasite to humans.     

某肿瘤医院儿童血液病患者 TORCH 感染状况研究

目的 研究中国科学技术大学附属第一医院西区(安徽省肿瘤医院)儿童血液病患者 TORCH 感染的状况。方法 选取 2015 年 11 月—2019 年 7 月在该院儿血科住院的 354 例患儿为研究对象,采用化学发光免疫测定仪检测患儿血 TORCH 的 IgG、IgM 抗体,分析 354 例患儿 TORCH 感染模式、年龄和疾病分布状况。 结果 弓形虫(TOX)、风疹病毒(RV)、巨细胞病毒(CMV)IgM 阳性率分别为 0. 6%、4. 2%和 7. 3%;TOX、RV、CMV、单纯疱疹病毒(HSV-Ⅰ、HSV-Ⅱ)的 IgG 阳性率分别为 21. 2%、88. 1%、91. 2%、49. 2%、15. 8%。 合并感染 1 例,为 CMV 和 RV 合并感染。 不同年龄段儿童 RV-IgM、CMV-IgM、RV-IgG、HSV-Ⅰ-IgG 和 HSV-Ⅱ-IgG 阳性率差异有统计学意义。 卡方趋势检验结果显示,RV-IgM、CMV-IgM 和 HSV-Ⅱ-IgG 阳性率随着患儿年龄增加而下降,RV-IgG 和 HSV-Ⅰ-IgG 阳性率随患儿年龄增加而上升。 不同疾病类型的患儿,其 TOX-IgG、HSV-Ⅰ-IgG、HSV-Ⅱ-IgG 阳性率差异有统计学意义。 结论 对血液病患儿开展 TORCH 血清学检测,可明确其感染类型和既往感染情况,为血液病的诊断和治疗提供帮助。     

安徽省芜湖市特殊人群弓形虫感染现状调查

目的 了解芜湖市特殊人群弓形虫感染现状,探讨主要易感因素,为制订弓形虫病防治措施提供依据。方法 抽取芜湖市孕妇、家庭养猫/犬者、畜产品加工人员、肿瘤病人、HIV/AIDS患者等5类人群作为调查对象,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中弓形虫特异抗体IgM 和IgG,并进行问卷调查,分析感染危险因素。结果 共调查3 378人,弓形虫阳性率为11.07%,其中IgM 阳性率为0.83%,IgG 阳性率为10.24%。60岁及以上年龄组感染率最高(14.13%),各年龄组感染率的差异具有统计学意义(χ ²=17.327,P <0.05)。文化程度较高人群弓形虫感染率较低,不同文化程度人群间弓形虫感染率差异有统计学意义(χ²=20.278,P <0.05)。孕妇、家庭养猫/犬者、畜产品加工人员、肿瘤病人、HIV/AIDS患者的感染率分别为9.65%、12.03%、12.75%、15.68%、7.06%,各人群间感染率的差异具有统计学意义(χ²=15.625,P <0.05)。易感因素调查发现,弓形虫感染与经常吃火锅、烧烤、生熟砧板不分及不了解弓形虫防治知识等因素存在统计学关联。结论 芜湖市特殊人群弓形虫感染率较高,需有针对性地加强弓形虫病防治知识的宣传教育,增强个人防护意识,养成良好的饮食和卫生习惯。     

弓形虫诱导人白血病细胞K562凋亡的实验观察

目的 探讨弓形虫对体外培养的人白血病细胞K562（简称K562细胞）有无抑制作用和诱导细胞凋亡作用。方法 取培养至对数生长期的K562细胞（浓度为5×10^-4/ml和1×10^-6/ml）分别接种于96孔培养板（100 μl/孔）及50 ml培养瓶（1.5 ml/瓶）中，加入不同浓度的弓形虫速殖子（1×10⁴、2×10⁴、4×10⁴、8×10⁴及16×10⁴个/ml），作用48 h, 用四甲基氮噻唑蓝（MTT）法检测其对K562细胞增殖的抑制作用；荧光显微镜、琼脂糖凝胶电泳及流式细胞仪检测细胞凋亡。 结果 上述不同浓度弓形虫速殖子作用48 h，对K562细胞增殖的抑制率依次为17%、28%、48%、50%及55%。各实验组吸光度（A₄₉₀）与对照组比较差异均有统计学意义（t=3.606及5.918， P<0.05； t=9.171、7.841、7.067， P<0.01）。荧光显微镜观察实验组培养的K562细胞，出现细胞核固缩及凋亡小体。琼脂糖凝胶电泳见DNA梯形条带。流式细胞仪检测到细胞凋亡峰（48 h），上述不同浓度弓形虫速殖子诱导K562细胞凋亡数分别占总数的5.53%、7.12%、10.34%、21.14% 及29.68%。对照组未出现凋亡小体。 结论 弓形虫速殖子对体外培养K562细胞增殖有明显的抑制作用，并可诱导K562细胞凋亡。