STAg联合ESA鼻内免疫小鼠对弓形虫垂直传播的阻断作用

观察弓形虫可溶性速殖子抗原（Soluble tachyzoite antigen,STAg）与排泄-分泌抗原（Excreted/secreted antigens,ESA）单独或联合鼻内免疫小鼠对弓形虫垂直传播的阻断作用。分别用PBS 20μL和STAg 20μg、ESA 20μg及联合抗原（STAg 10μg＋ESA 10μg）鼻内免疫BALB/c处女鼠2次,间隔2周。末次免疫后第13天处女鼠与雄鼠以2∶1同居。妊娠第8天用弓形虫速殖子（8000个/只）灌胃攻击所有孕鼠。妊娠第18天处死,计算活胎率,并测定孕鼠肝、胎盘和胎鼠脑组织弓形虫抗原和孕鼠脾组织内虫荷,同时测定孕鼠小肠冲洗液SIgA、血清IgG水平。结果表明,ESA组和联合抗原组活胎率显著高于PBS组,STAg组、ESA组和联合抗原组胎盘及胚胎感染率均低于PBS组,联合抗原组最低。孕鼠在弓形虫速殖子攻击后,PBS组明显出现竖毛、倦怠、腹部塌陷等异常表现,感染率为100%,死亡率为22.22%,而STAg组、ESA组和联合抗原组有轻微症状,感染率分别为85.71%、57.14%、57.14%,死亡率分别为16.67%、0%、0%。STAg组、ESA组和联合抗原组脾组织内虫荷均显著低于PBS组,减虫率分别为72.19%、72.29%、78.45%,ESA组和联合抗原组小肠冲洗液特异性SIgA均显著高于PBS组,联合抗原组最高,血清特异性IgG抗体水平差异不显著。由此可见,ESA单独或与STAg联合免疫可诱导孕鼠小肠液高水平SIgA,显著降低脾组织虫荷,显著提高胚胎存活率,表现出明显的垂直传播阻断的作用。     

Isolation of a Toxoplasma gondii cyclin by yeast two-hybrid interactive screen

GAL4-based yeast two-hybrid cDNA libraries from Toxoplasma gondii RH strain were constructed and screened for interactors of a putative T. gondii cdc2-related kinase, TgCRK2. A screen of 3.2 million transformants yielded a single yeast clone that harbored a protein fusion capable of specifically interacting with TgCRK2. Sequencing revealed the cDNA insert (TgCYC1) had homology to the cyclin class of proteins. The TgCYC1 cDNA fragment was used to probe a conventional T. gondii cDNA library and a 2.65 kb cDNA coding for a predicted protein of 582 amino acids was obtained. Based on comparison with a 5'-RACE product from tachyzoite mRNA, the 2.65 kb cDNA for TgCYC1 appeared to be complete. TgCYC1 had the highest similarity to Plasmodium falciparum CYC1 and displayed sequence characteristics that place it in the cyclin H class of eukaryotic cyclins. In synchronous tachyzoite populations the level of TgCYC1 mRNA was unchanged indicating it is not cell cycle regulated at the mRNA level. TgCYC1 rescues the G(1)/S cyclin cell cycle defect in S. cerevisiae strain DL1 demonstrating that this apicomplexan cyclin can function in an established heterologous model system.     

弓形虫ROP2基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

目的 :构建弓形虫棒状体蛋白 (ROP2 )基因重组质粒并在大肠杆菌中表达 ,用于筛选弓形虫新的诊断抗原和疫苗分子。方法 :根据ROP2基因已知序列 ,设计合成一对引物 ,用PCR方法从弓形虫RH株基因组DNA中扩增出ROP2基因片段 ,再克隆到pGEX 4T 1质粒 ,重组质粒经酶切及PCR鉴定 ,而后进行测序 ;重组质粒在大肠杆菌BL2 1 (DE3)中进行ITPG诱导表达 ,表达产物经SDS PAGE及WesternBlot分析。结果 :ROP2基因PCR产物大小与预期相符 ,约 1 0 4 3bp ,重组质粒经酶切及PCR鉴定表明获得正确重组子 ,测序结果与已知序列基本吻合 ;SDS PAGE及免疫印迹显示ROP2融合蛋白表观分子量约为 5 5kDa ,表达产物约占菌体总蛋白1 7% ,具有一定的免疫反应性。结论 :克隆并表达了弓形虫ROP2基因 ,为下一步弓形虫诊断及疫苗研究奠定了基础     

新生儿TORCH感染的血清学检测与临床分析

目的 对新生儿进行TORCH感染的血清学检查及临床表现分析。方法 用ELASA法检测血清中TORCH(弓形体、风疹病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒)IgM。结果 2000年1月至2003年1月本院新生儿重症监护室(NICU)共收治新生儿l554例，其中48例为TORCH感染，巨细胞病毒感染率最高占52．1％；风疹病毒感染占33．3％；单纯疱疹病毒感染占14．6％。未发现弓形体抗体阳性的患儿。结论 新生儿TORCH感染可造成多器官损伤，主要为听力异常、高胆红素血症和肝功能异常、神经系统损伤、心肌损伤、血小板减少、先天性心脏病。计划免疫、母亲孕期筛查、新生儿早期筛查、干预治疗非常重要。     

孕妇弓形虫感染与垂直传播的研究

目的 :探讨孕妇弓形虫感染对胎儿的影响。方法 :采用酶免三联诊断法对 35 6例母婴配对标本进行血清学检测。结果 :产妇弓形虫感染率平均为 19 1% ,各单项检测分别为循环抗原 (CAg) 15 2 %、IgM2 5 %、IgG3 4% ;新生儿弓形虫感染率平均为 17 7% ,其脐血各单项检测分别为CAg16 9%、IgM0 3%、IgG2 2 %。CAg垂直传播率为 35 2 % ( 19/5 4)。 4例畸胎儿中 1例脐血弓形虫CAg阳性。结论 :孕妇感染弓形虫可通过胎盘垂直感染胎儿 ,应引起围产医务工作者的高度重视 ,加强对弓形虫感染的早期诊断和及时治疗     

弓形虫主要表膜P30抗原的免疫保护作用研究

目的 研究弓形虫主要表膜P30抗原免疫小鼠所诱导的免疫性保护作用及免疫保护机制。方法 将单克隆抗体免疫亲和层析分离纯化的P30抗原免疫C57BL／6纯系小鼠,然后用弓形虫RH株速殖子和Fukaya株包衰攻击感染,观察P30抗原免疫对急性弓形虫感染鼠死亡时间及慢性感染鼠脑内包囊形成的影响,同时对感染后不同时间鼠血清特异性抗体水平、IL－2及IFN－r细胞因子水平和脾T淋巴细胞亚群动态变化进行了测试分析。结果 显示P30抗原免疫可在一定程度上延长感染小鼠的存活时间,减少脑内包囊的形成数量,增强小鼠抵抗急慢性弓形虫感染的能力。在感染后不同时期免疫鼠血清中特异性抗休还清瘃IFN－r、IL－2水平均高于同期对照鼠,而且免疫鼠脾CD4^ t CD8^ T淋纠细胞尤其是CD8^ 细胞的数量在感染早期升高较快,至感染后4周达高峰,两者的比值随感染时间的延长而逐渐下降。结论 P30抗原免疫对感染小鼠具有明显的保护作用,是细胞免疫和体液免疫共同作用的结果,尤其是细胞免疫可能发挥着更为重要的作用。     

弓形虫包囊超微结构的观察

目的：观察弓形虫包囊的超微结构,鉴定体外细胞培养所形成的包囊。方法：体外用HeLa细胞作载体培养PP株弓形虫形成包囊;体内用感染Fukaya株弓形虫的小鼠脑包囊,分别做电镜标本并观察。结果：两者都观察到包囊的特征性超微结构且结果相类似。结论：弓形虫在体外一定培养条件下可以形成包囊,并与体内包囊的超微结构相似。     

山东地区饲养动物与接触动物职业者弓形虫感染调查

目的 了解山东地区饲养动物与接触动物职业弓形虫感染情况,为防治该病提供有价值的资料。方法 采用滤纸干血滴间接血凝试验(IHAT)对饲养动物和接触动物职业重点人群进行弓形虫感染状况调查。结果 在饲养不同种类动物的人群中,以养猫同时养狗户弓形虫感染率为高(70．00％),从事接触动物职业的人群弓形虫感染率平均为8．67％,其中以猪肉制品加工的感染率为高(10．23％),牛、羊肉类加工感染率次之为9．67％,加工兔、鸡肉类最低为1．85％。在接触动物职业人群中男性感染率为9．64％;女性为7．62％,无显性差异。从事该职业1年内的男性感染率为2．86％,女性感染率为3．64％,而从事11～20年的男性感染率为12．50％,女性为7．89％;女性从事21～30年的感染率为15．38;男性为10．00%。讨论接触动物职业时间长短与感染具有显性差异,提示弓形虫感染率可随接触动物时间的延长而增高。     

小儿脑瘫与弓形虫感染关系的研究

目的 探讨海南小儿不明原因脑瘫与弓形虫感染的关系,为诊治小儿脑瘫提供依据,方法 以住院确诊不明原因脑瘫患儿为研究组,体检正常的小儿为对照组,比较两组弓形虫抗体ＩｇＧ和ＩｇＭ、循环抗原（ＣＡｇ）、ＤＮＡ的四项检测,分析弓形虫感染与脑瘫的关系。结果 研究组检测 ７９例脑瘫患儿中,弓形虫阳性３３例,感染率为４１．８％,对照组检测２６９例中,弓形虫阳性２３例,感染率为８．６％,两组对比差别非常显著（Ｐ＜０．００１）。结论 弓形虫感染是海南不明原因脑瘫患儿的主要原因之一,对于孕妇、新生儿和婴幼儿的弓形虫感染检测,是防治脑瘫发生的手段之一。     

弓形虫P30基因非融合蛋白表达的研究

目的构建弓形虫主要表面抗原P30基因的原核表达载体并在E.coli中进行表达.方法采用定向克隆的方法,将PCR扩增得到的P30片段,插入原核表达质粒pBV220上,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,于氨苄LB培养平板上筛选阳性克隆,经过酶切及PCR扩增鉴定重组子.将含阳性重组子pBV220-P30的工程菌经温度诱导表达,SDS-PAGE电泳及免疫印迹分析.结果成功构建了pBV2200-P300重组质粒;SDS-PAGE电泳及Western-blot显示表达P30非融合蛋白的分子量为29kD,且能被弓形虫高免鼠血清识别.结论从弓形虫基因组DNA中获取P30基因,并成功构建了pBV220-P30重组质粒,诱导表达了P30非融合蛋白.对弓形虫病基因疫苗研制奠定了基础.