全文获取类型
收费全文 | 5710篇 |
免费 | 345篇 |
国内免费 | 211篇 |
专业分类
耳鼻咽喉 | 18篇 |
儿科学 | 94篇 |
妇产科学 | 61篇 |
基础医学 | 1078篇 |
口腔科学 | 110篇 |
临床医学 | 400篇 |
内科学 | 714篇 |
皮肤病学 | 61篇 |
神经病学 | 193篇 |
特种医学 | 158篇 |
外国民族医学 | 2篇 |
外科学 | 381篇 |
综合类 | 1159篇 |
现状与发展 | 1篇 |
预防医学 | 638篇 |
眼科学 | 28篇 |
药学 | 834篇 |
5篇 | |
中国医学 | 52篇 |
肿瘤学 | 279篇 |
出版年
2024年 | 8篇 |
2023年 | 44篇 |
2022年 | 90篇 |
2021年 | 116篇 |
2020年 | 122篇 |
2019年 | 99篇 |
2018年 | 115篇 |
2017年 | 122篇 |
2016年 | 161篇 |
2015年 | 174篇 |
2014年 | 349篇 |
2013年 | 376篇 |
2012年 | 382篇 |
2011年 | 442篇 |
2010年 | 396篇 |
2009年 | 314篇 |
2008年 | 332篇 |
2007年 | 341篇 |
2006年 | 338篇 |
2005年 | 281篇 |
2004年 | 224篇 |
2003年 | 202篇 |
2002年 | 182篇 |
2001年 | 147篇 |
2000年 | 133篇 |
1999年 | 118篇 |
1998年 | 93篇 |
1997年 | 57篇 |
1996年 | 63篇 |
1995年 | 62篇 |
1994年 | 57篇 |
1993年 | 46篇 |
1992年 | 44篇 |
1991年 | 44篇 |
1990年 | 39篇 |
1989年 | 29篇 |
1988年 | 28篇 |
1987年 | 28篇 |
1986年 | 18篇 |
1985年 | 13篇 |
1984年 | 8篇 |
1982年 | 8篇 |
1981年 | 3篇 |
1980年 | 8篇 |
1978年 | 1篇 |
1977年 | 3篇 |
1976年 | 2篇 |
1975年 | 1篇 |
1974年 | 1篇 |
1973年 | 1篇 |
排序方式: 共有6266条查询结果,搜索用时 15 毫秒
71.
72.
目的 探讨可溶性 HLA-G1(sHLA-G1)对人 NK-92 细胞杀伤活性的抑制与细胞表面免疫球蛋白样转录分子 2(ILT2)和杀伤细胞免疫球蛋白样受体 2DL4(KIR2DL4)受体的关系。 方法 ①通过原核表达技术获得 sHLA-G1 重组蛋白(重组蛋白),并采用蛋白质印迹法进行鉴定。②取 NK-92 细胞,加入终浓度 20 μg/ml 的重组蛋白分别培养 10、30 min,再分别加入抗 HLA-G1/G5、抗ILT2 和抗 KIR2DL4 抗体,采用流式细胞术检测各组 NK-92 细胞表面 sHLA-G1 和 ILT2、KIR2DL4 受体表达阳性率;以 NK-92 细胞单独培养作为对照组。③以人白血病 K562 细胞为靶细胞,以经不同方式处理的 NK-92 细胞为效应细胞,效靶比为5:1,共同培养 2 h,采用流式细胞术检测 NK-92 细胞对 K562 细胞的杀伤率。NK-92 细胞处理方式为单纯重组蛋白处理(分别加入终浓度为 0、10、20 μg/ml 的重组蛋白培养 30 min)和表面受体封闭 + 重组蛋白处理(分别加入抗 ILT2、抗 KIR2DL4、抗 LT2 + 抗 KIR2DL4 抗体培养 30 min,再分别加入终浓度为 0、10、20 μg/ml 的重组蛋白培养 30 min)。 结果 ①蛋白质印迹分析表明所获重组蛋白为带有组氨酸标签的特异蛋白。②NK-92 细胞与 20 μg/ml 重组蛋白共培养 30 min 后,sHLA-G1 表达阳性率明显高于而 ILT2、KIR2DL4 受体表达阳性率均明显低于对照组(均 P < 0.05)。③以终浓度 0、10、20 μg/ml 的重组蛋白处理的 NK-92 细胞对 K562 细胞的杀伤率分别为 39.79% ± 2.00%、27.79% ± 0.75%、21.36% ± 0.67%(两两比较,均 P < 0.01);单独封闭 ILT2 受体,杀伤率分别为 23.09% ± 1.63%、21.13% ± 0.38%、18.42% ± 0.47%(两两比较,均 P < 0.01);单独封闭 KIR2DL4 受体,杀伤率分别为 30.74% ± 0.44%、26.03% ± 0.38%、21.15% ± 0.35%(两两比较,均 P < 0.01)。 结论 sHLA-G1 通过与 NK-92 细胞表面 ILT2 和 KIR2DL4 受体直接结合而抑制 NK-92 细胞的杀伤活性。 相似文献
73.
将人组织型纤溶酶原激活剂cDNA与逆转录病毒载体LNSX重组后转染病毒包装细胞PA317,形成完整的重组病毒颗粒,电镜下重组病毒呈散在分布,球形,直径90~180nm,由囊膜、外壳和核心三部分组成。重组病毒颗粒感染NIH3T3细胞,在含G418培养基中筛选培养2周后计数阳性细胞克隆数,结果达6×108CFU/L;被感染的受体细胞NIH3T3高效表达具有纤溶活性的重组人组织型纤溶酶原激活剂。 相似文献
74.
Philippe Normand Pascal Simonet Luc Giasson Patrick Ravel-Chapius J. -André Fortin Maurice Lalonde 《Current genetics》1987,11(4):335-338
Summary A plasmid-like molecule was detected in a strain of the ascomycete Ceratocystis fimbriata Ell. & Halst., a pathogenic fungus of Populus spp. The DNA replicon, designated pFQ501, was found to have a linear structure with a length of 6.0 kb (3.9 × 106 daltons) and a density of 1.685 g/cc. This molecule was found to be associated with the mitochondria and was isolated from the gel; its restriction map was deduced from single and double digestions. 相似文献
75.
Summary We have cloned the Cephalosporium acremonium pyr4 gene by cross-hybridization with the equivalent gene from Neurospora crassa, the closest relative from which this gene is available. The C. acremonium pyr4 gene complements an E. coli pyrF mutant lacking orotidine-5-phosphate decarboxylase (OMPdecase), and most probably does not contain introns. Maxicell analysis in E. coli shows that it encodes a 46 kDa polypeptide. The C. acremonium OMPdecase contains a highly conserved pentadecapeptide characteristic for this category of enzyme. Extensive sequence comparison suggests an important role of this region in enzymatic activity. 相似文献
76.
77.
The gene structure and expression of the linear mitochondrial plasmids of the white-rot fungus Pleurotus ostreatus, pMLP1 and pMLP2, were analyzed. Cleavage by proteinase K and exonucleases indicated that the 5′ ends of pMLP1 and pMLP2
DNAs were associated with terminal proteins. Nucleotide sequencing of the entire pMLP1 DNA revealed that it consists of 9,879 bp
with terminal inverted repeat (TIR) sequences of 381 bp. The end sequence of TIR in pMLP1 is 3′-CCCCC-5′, similar to those
of Escherichia coli phage PRD1. The pMLP1 plasmid harbors two long open reading frames (ORF1 and ORF2) and at least one minor ORF (mORF1). The
deduced product of ORF1 is homologous to RNA polymerases of yeast mitochondria and several bacteriophages, whereas that of
ORF2 is homologous to the protein-primed DNA polymerases of family B type. The mORF1 encodes a highly basic protein, most
likely a TIR-binding protein, with no apparent sequence homology in the database. Expression of the predicted gene products
from pMLP1 in mitochondria was demonstrated by Western blot analysis using antibodies against various expressed regions of
pMLP1 ORFs. A plasmid-free strain, generated by curing with ethidium bromide, did not express any of these gene products.
Terminal proteins of 70 kDa (TP1) and 73 kDa (TP2) were identified from pMLP1 and pMLP2, respectively. Western blot analysis
indicated that TP1 was generated from the N-terminal half of the full-length product of ORF2 encoding a putative DNA polymerase.
Received: 9 February 2000 / Accepted: 18 July 2000 相似文献
78.
目的在本室前期工作的基础上构建汉滩病毒M基因G1片段与S基因0.7kb片段嵌合基因的重组腺病毒。方法构建含有汉滩病毒G1S0.7嵌合基因的转移载体pShuttle-G1S0.7,然后通过特异性的酶切将嵌合基因与腺病毒DNA相连,电转化E.coli JM109,获得重组腺病毒Adeno-G1S0.7 DNA,转染HFX293细胞得到重组腺病毒。进一步对重组腺病毒的滴度和表达产物进行鉴定。结果构建的含G1S0.7嵌合基因的重组腺病毒,滴度可达10^13~10^15 PFU/L;该重组腺病毒感染Vero-E6细胞后,表达出可被抗汉滩病毒核蛋白及糖蛋白G1的特异性单抗(mAb)所识别的融合蛋白。结论利用腺病毒表达系统,成功地表达同时具有核蛋白及糖蛋白G1生物学活性的融合蛋白,为进一步研究其免疫学特性奠定了基础。 相似文献
79.
负载CTLA4Ig重组腺病毒的未成熟树突状细胞对大鼠Th细胞增殖的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
目的探讨负载CTLA4Ig重组腺病毒的未成熟树突状细胞对大鼠Th细胞增殖的影响。方法将CTLA4Ig重组腺病毒与Wistar大鼠未成熟树突状细胞于37℃共孵育6h后,经尾静脉注射该大鼠作实验组,另外分别设立Wistar大鼠未成熟树突状细胞、CTLA4Ig重组腺病毒、生理盐水经尾静脉注射为对照。1周后,用0.3%戊巴比妥麻醉各组大鼠后抽血检测CTLA4Ig。取脾脏,经流式细胞术分选出Th1、Th2细胞及CD4 T细胞,行混合淋巴细胞培养检测Th细胞的增殖。用免疫组织化学法检测Th1、Th2细胞的比例。结果实验组血清CTLA4Ig水平(0.654±0.13)显著高于CTLA4Ig重组腺病毒组(0.392±0.10,P<0.01),树突状细胞组及生理盐水组未检出。实验组Th1细胞的增殖指数(742±161)、Th1/Th2(0.16±0.05)均显著低于各对照组(分别与未成熟树突状细胞组、CTLA4Ig重组腺病毒组、生理盐水组相比,P均<0.01);而Th2细胞的增殖指数(9162±598)显著高于各对照组(P均<0.01)。结论负载CTLA4Ig重组腺病毒的未成熟树突状细胞可显著抑制大鼠Th1细胞增殖,促进Th2细胞增殖,使Th细胞由Th1向Th2显著偏移,诱导有效的免疫耐受。 相似文献
80.
Jin-Kyoo Kim May-Fang Tsen Victor Ghetie E. Sally Ward 《European journal of immunology》1994,24(3):542-548
Site-directed mutagenesis has been used to change amino acid residues of a recombinant Fc-hinge fragment derived from the murine immunoglobulin (Ig)G1 molecule, and the effects of these mutations on the pharmacokinetics of the Fc-hinge fragment have been determined. Specifically, Ile-253, His-310 and Gln-311 of the CH2 domain and His-433 and Asn-434 of the CH3 domain have been changed. In the three dimensional structure of an antibody, these amino acids are in close proximity to each other at the CH2-CH3 domain interface. The mutated Fc-hinge fragments have been purified from recombinant Escherichia coli cells and their pharmacokinetic parameters determined in mice and compared with those of the wild-type Fc-hinge fragment. The results show that the site of the IgG1 molecule that controls the catabolic rate (the ‘catabolic site’) is located at the CH2-CH3 domain interface and overlaps with the Staphylococcal protein A binding site. 相似文献