人类染色体病实验室诊断技术

目的检测人类染色体数目异常和结构异常导致的染色体病或遗传病.方法人类染色体诊断技术的G显带.外周血肝素抗凝2mL.37℃恒温培养72h,加入浓度为20μg/mL的秋水仙素,常规收获制片显带众数分析.结果发现大Y(大于或等于18号染色体)和女性易性癖为正常核型.结论人类染色体病实验室诊断技术在临床上具备诊断和排除染色体数目异常和结构异常导致的遗传病,并且可作为产前诊断和提高人口素质的重要诊断技术.     

基因芯片检测肝炎肝硬化患者肝组织中HBVDNA

目的研究病毒性肝炎基因芯片的制备，用肝炎基因诊断芯片，免疫组织化学法和原位分子杂交法，检测99例乙型肝炎后肝硬化肝组织，比较各种方法的优缺点。方法将PCR扩增的HBVDNA探针用点样仪点于玻片介质上，并经过点样处理后制备成基因芯片；收集肝炎后肝硬化肝组织标本99份，分别用基因芯片、原位分子杂交法、免疫组织化学法检测HBVDNA和HBcAg。结果53例HBcAg、HBVDNA阳性组织中基因芯片检测阳性40例：22例HBcAg阳性组织中基因芯片检测阳性6例；32例HBcAg、HBVDNA阴性组织中基因芯片检测均阴性。结论肝炎基因诊断芯片可以检测肝组织中HBVDNA，准确率可达75％，假阳性率低。     

应用不同方法在婚检中进行地中海贫血初筛及确诊的研究

目的 通过比较平均红细胞容积（MCV）、平均红细胞血红蛋白含量（MCH）的检测及与基因诊断相结合的检测方法，探讨对地中海贫血筛查的选择性和诊断的准确性。方法 以MCV与MCH的检测作初筛试验，以基因诊断试验作确诊试验，同时用MCV与MCH的检测和红细胞渗透脆性试验比较，用基因诊断试验和过去血红蛋白电泳比较。结果 对1852例婚检者做MCV与MCH的检测，筛选出237例地中海贫血阳性者，并进行基因诊断分析，发现地中海贫血145例，占7．83％，其中α-地中海贫血杂合子67例，占3．6％；β-地中海贫血携带者78例，占4．2％。而在红细胞脆性试验及血红蛋白电泳法中均出现不同程度的漏检。结论 在地中海贫血初筛中MCV与MCH的检测优于红细胞脆性试验，在确诊方法中基因诊断试验优于血红蛋白电泳。做好婚前和产前对地中海贫血的筛查、基因诊断，对预防和降低重型地中海贫血患儿出生具有重要意义。     

2004年中华医学科技奖一等奖项目集萃（下）

戊型肝炎病毒基因4型及其分子生物学和家畜感染研究；三氧化二砷单用或联合全反式维甲酸治疗急性早幼粒细胞白血病临床及作用机制研究；耳廓复合组织瓣修复鼻畸形；山东首例肝肾同期联合移植获得成功；Alport综合征从临床到基因诊断的系列研罗……     

多重PCR反应检测三种常见缺失型α地中海贫血的意义

目的:探讨单管多重PCR体系,检测东南亚缺失(-S-EA)、右侧缺失(3-.7)和左侧缺失(4.-2)地中海贫血的意义。方法:采用单管多重PCR技术对166例考虑α地中海贫血和2例羊水进行检测。结果:166例考虑α地中海贫血中检测出60例右缺失血红蛋白H病(3.-7/-S-EA/)占37.5%,48例左缺失血红蛋白H病(4-.2/-S-EA)占30%,32例东南亚缺失(-S-EA)占20%,右侧缺失(3.-7)18例占11.25%,左侧缺失(4.-2)12例占7.5%,正常(αα/αα)18例占11.25%.2例羊水中1例为Hb B art’s胎儿水肿(--/--),另1例为东南亚缺失。结论:该体系能同时快速检测三种常见缺失型α地中海贫血,可作为临床疑诊病例的基因诊断和产前诊断。     

胎儿先天性泌尿系统畸形的诊治

国外报道胎儿先天性泌尿系畸形的发生率为 0 5 % ,国内北京报道发生率为 1 9%。因此胎儿先天性泌尿系统畸形的早期诊断、早期治疗十分重要。1　胎儿先天性泌尿系统畸形的诊断1.1　临床上正确理解遗传疾病、先天性疾病、出生缺陷及家族性疾病等概念的内涵和外延　　明确先天性、遗传性疾病的分类、病因、发病规律 ,了解泌尿系胚胎发育机制是诊断和处理此类疾病的基础。1.2　泌尿系一般疾病的诊断原则及方式亦适用于胎儿先天性泌尿系统畸形的诊断强调重视一般病史中的近亲婚育史、孕期中微生物感染、放射、药物等因素的影响。这是临床诊断最…     

扩增人肝型磷酸果糖激酶基因对唐氏综合征进行定量基因诊断的研究

目的　扩增位于唐氏综合征关键区域的人肝型磷酸果糖激酶基因 (PFKL基因 ) ,对唐氏综合征进行定量基因诊断。方法　采用定量PCR—微孔板杂交检测PCR产物量的方法 ,对 2 6例唐氏综合征患者及 2 78例正常人外周血DNA标本 ,扩增PFKL基因 ,扩增片段长度为 185bp ;另外 ,将人肌型磷酸果糖激酶基因 (PFKM基因 )作为内参照同时扩增 ,扩增片段长度为 36 5bp ,定量PCR产物用微孔板杂交检测。 结果　 2 6例患者 (包括 1例易位型 )PFKM与PFKL扩增产物的OD值比值介于 0 4 0～ 0 6 0之间 ,平均值为 0 5 1;正常人扩增产物的OD值比值介于 0 80～ 1 2 0之间 ,平均值为 1 12 ,两者比较差异显著 (P <0 0 0 1)。对 2 78例正常人进行同样基因扩增和检测无一例假阳性 ,所得结果与染色体核型分析结果完全符合。结论　定量PCR—微孔板杂交检测PFKL基因拷贝数的方法 ,简便、快速、特异 ,可用于唐氏综合征基因诊断     

164例地中海贫血基因诊断的分析与研究

目的 了解北海市育龄人群地中海贫血基因的携带率,预防地中海贫血重症患儿的出生,减少出生缺陷.方法 对3 028例育龄人群采用地中海贫血定量法进行筛查,夫妻筛查均为携带者用单管多重PCR(mPCR)及DNA芯片反向点杂交(ASO/RBD-PCR)检测技术,分别进行α、β地中海贫血基因检测.结果 3 028例受检者中筛查阳性479例,其中164例接受α、β地中海贫血基因诊断,基因携带率α地贫为9.45%、β地贫为4.24%.结论 选择适当的检测方法对孕龄人群进行地贫诊断,对优生优育、干预地贫儿出生有着重要作用.     

SYBR-Green I实时荧光聚合酶链反应结合融解曲线分析技术在α-珠蛋白生成障碍性贫血基因诊断中的应用

目的 探讨SYBR-Green I实时荧光PCR(SYBR-PCR)结合融解曲线分析(D.C)技术进行α-珠蛋白生成障碍性贫血(α-地贫)基因诊断的价值.方法 对22个家系中的37份样品采用4管SYBR-PCR结合D.C进行--SEA、-a3.7、-α4.2及非缺失型(αα)4个等位基因型的检测,进而作出基因诊断.同时运用单管多重PCR(mPCR)结合凝胶电泳技术进行基因检测加以对照确认.结果 22个家系中6个家系检出有--SEA或-α3.7携带者,其中东南亚型缺失携带者(--SEA/αα)7例,右侧缺失携带者(-α3.7/αα)3例,东南亚型缺失与右侧缺失双重杂合子(--SEA/-α3.7)1例.2例为胎儿产前诊断.其中1例为Bart's水肿胎儿(--SEA/--SEA),另1例为东南亚型缺失携带者(--SEA/αα).用mPCR凝胶电泳技术得出的基因诊断结果与上述结果一致.结论 SYBR-PCR结合D.C技术在α-地贫的基因诊断、携带者检出及产前诊断方面具有实用价值.     

荧光PCR方法检测孕妇血浆股儿DNA的β地中海贫血基因突变

目的:利用孕妇血浆中的胎儿DNA进行无创伤性β地中海贫血产前基因诊断.方法:从需要进行β地中海贫血产前基因诊断的高危夫妇中筛选出丈夫为β珠蛋白基因密码子(CD)17、CD43、IVS-II-654、-28突变的杂合子,而孕妇携带与丈夫不同的β地中海贫血基因突变杂合子的家系.从孕妇血浆中提取胎儿DNA;应用荧光聚合酶链反应(PCR)扩增p珠蛋白基因,以基因扫描方法分析血浆胎儿DNA的父源性β珠蛋白基因CDl7、CD43、IVS-II-654和-28突变;与绒毛、羊水或脐血胎儿DNA的p地贫基因诊断结果作对照.结果:12个家系中,5例血浆胎儿DNA检出父源性β珠蛋白基因CDl7、CD43、IVS-II-654、-28突变及相应的正常序列;7例血浆胎儿DNA未检出父源性β珠蛋白基因突变,排除重型β地中海贫血,与绒毛、羊水胎儿DNA的p地中海贫血产前基因诊断结果一致.结论:荧光PCR及基因扫描方法可快速、灵敏地检测孕妇血浆胎儿DNA的父源性β珠蛋白基因突变,排除重型β地中海贫血胎儿.