伤风净喷鼻液体外抗病毒作用的实验研究

目的　观察伤风净喷鼻液在体外的抗病毒作用。方法　先测定药物对细胞的毒性 ,观察细胞病变Cy topathceffect(CPE) ,找出最大无毒浓度 ;再测定流感病毒FM1株、合胞病毒Long株的病毒滴度。最后测定伤风净喷鼻液抑制各病毒对细胞产生细胞病变 (CPE)的作用。结果　实验表明伤风净喷鼻液抗流感病毒FM1株的最低有效浓度为1∶10 2 4,相当于伤风净喷鼻液原药浓度 1.0 5 5mg/ml ,抗合胞病毒Long株的最低有效浓度为 1∶40 96,相当于伤风净喷鼻液原药浓度 0 .2 64mg/ml。 结论　根据实验结果证明伤风净喷鼻液具有明显的抗流感病毒FM1株、合胞病毒Long株作用     

短发夹状RNA对PC-3M细胞端粒酶逆转录酶基因表达和端粒酶活性的影响

目的:研究短发夹状RNA(shRNA)对PC 3M细胞中端粒酶逆转录酶(hTRT)基因表达及端粒酶活 性的影响。方法:构建针对hTRT基因的shRNA表达质粒psilencer TRT,在质脂体介导下转染人前列腺癌PC 3M细胞,应用RT PCR及免疫组织化学检测hTRTmRNA及蛋白表达水平,应用SYBR Green染色法检测端粒 酶活性的变化。结果:重组体psilencer TRT转染细胞24h和48h后显著下调hTRTmRNA及蛋白水平,作用 48h后,其抑制率分别为85.39%和79.17%,较空白对照组差异有统计学意义(P<0.01)。同时,随着时间的延 长,端粒酶活性亦有明显下降(P<0.01)。结论:利用短发夹状RNA干扰技术能有效抑制靶基因的表达,为前 列腺癌的基因治疗提供新思路。     

核糖核酸的酶消化方法直接顺序分析

应用硷基特异性核酸内切酶进行RNA的顺序分析。以~(32)P标记RNA分子的5′或3′末端的四种硷基能被酶试剂部分裂解。放射性的水解产物经胶电泳按其大小而分离。放射自显影后它的核苷酸顺序从带谱上可以直接读出。核糖核酸酶(RNasc)T_1(G特异性)、U_2(A特异性)、Phy M(U+A特异性)和B.cereus(C+U特异性)是最常用于顺序RNA的四种酶。     

可膨胀自锁髓内钉治疗四肢长干骨骨折29例

目的 介绍可膨脓髓内钉在治疗四肢长骨骨折中的应用体会。方法 自2004年11月～2006年2月，采用可膨胀髓内钉治疗了四肢长千骨骨折29例。结果 肱骨骨折的平均手术时间为50min；胫骨骨折的平均手术时间为45min；股骨骨折的平均手术时间为76min。术后骨折平均临床愈合时间肱骨为13周，胫骨为10．5周，股骨为10周。在肱骨骨折的病人中有2例发生骨折延迟愈合。所有病人均未发现术中及术后并发症。结论 可膨胀髓内钉因其能够顺应髓腔的结构膨胀，在髓腔内壁产生均匀的压力，起到良好的固定作用，而且能够节省扩髓和锁钉等步骤，明显减少创伤及术中X线透视和手术时间。是一种操作简单、创伤小的新型髓内钉。     

靶向表皮生长因子受体的shRNA抑制U251胶质瘤生长的实验研究

目的探讨靶向表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)的RNA干涉(RNAi)技术抑制恶性胶质瘤体外细胞系U251的EGFR表达后,在体内外对U251细胞生长抑制作用。方法在人EGFR开放阅读框的细胞内区酪氨酸激酶结构域选择1个siRNA靶序列、进行短发夹RNA(shRNA)表达载体psiRNA-2400的构建,并以含有随机序列的psiRNA-scr表达质粒为对照进行了脂质体介导的U251人脑恶性胶质瘤细胞系表达。应用RT-PCR检测EGFR表达水平,应用MTT法、流式细胞术和Matrigel基质生长实验评价肿瘤细胞转染前后的生物学行为。进一步应用裸鼠皮下荷瘤模型观察脂质体介导shRNA基因治疗对U251细胞生长抑制作用。对肿瘤组织应用免疫组化的方法进行EGFR、PCNA和GFAP表达比较。结果脂质体介导、靶向EGFR的shRNA可显著抑制U251细胞ECFR表达,MTT法分析显示psiRNA-2400转染组细胞生长抑制率为68%;与对照组和psiRNA-scr转染组比较,细胞周期分析结果表明psiRNA-2400转染组G_0～G_1期细胞数没有明显变化,进入S期的细胞数较对照组减少了12.7%～13%,而进入G_2期细胞则增加了10.5%～11.7%。Matrigel基质生长实验显示对照组和psiRNA-scr转染组细胞呈正常形态贴壁生长,而psiRNA-2400转染组细胞不能贴壁生长,呈团块状簇集生长。裸鼠皮下荷瘤模型实验显示psiRNA-2400显著抑制皮下肿瘤生长,组织病理学分析显示治疗组EGFR表达下降、PCNA标记指数降低而GFAP表达上调。结论靶向EGFR的RNAi技术可以显著抑制U251细胞的EGFR表达,在体内外对U251细胞生长均产生明显抑制作用。因此,shRNA表达质粒介导的基因治疗可以成为胶质瘤靶向性EGFR治疗的新策略。     

siRNA联合顺铂抑制骨肉瘤细胞增殖的研究

目的构建人Survivin基因的siRNA真核表达载体,探讨其对骨肉瘤细胞MG63凋亡及顺铂化疗的增敏作用。方法应用pSilencer 3.0-H1 neo,构建Survivin特异性的RNA干涉载体,转染MG63细胞,G418筛选稳定转染的细胞系。半定量PCR和免疫荧光染色分别检测Survivin mRNA与蛋白的水平变化。Annexin V法检测细胞凋亡。MTT法检测顺铂对细胞的杀伤作用。结果构建Survivin基因siRNA真核表达载体PsiS。获得了稳定转染的细胞系。与MG63、阴性对照细胞比较,MG63/PsiS生长曲线则十分平缓。MG63/PsiS细胞中Survivin的mRNA及蛋白表达明显减少。MG63/PsiS凋亡率增加为17.8%(P<0.01)。1 mg/L顺铂作用下,MG63/PsiS死亡率是其他各组的2.3倍(P<0.01)。结论特异性siRNA能够明显阻断Survivin基因的表达促进MG63细胞凋亡,提高细胞对顺铂的敏感性。     

导航在长骨干骨折髓内钉固定中的应用

目的阐述透视导航技术在长骨干(股骨和胫骨)骨折,特别是在术中远端交锁髓内钉固定中的应用。探索在导航条件下术中应用髓内钉图像库开展远端交锁固定的可行性。此外,医用机器人的开发旨在被进一步用来改善手术程序的精确性。方法导航手术下,55例行股骨远端交锁钉固定和36例行胫骨远端交锁钉固定。其中13例术中应用图像库开展远端交锁固定。结果远端交锁固定成功率为97%。结论透视导航在长骨干骨折术中,使远端髓内交锁钉固定成功率增高。图像库的应用可以进一步减少患者和手术人员的X线辐射剂量。