高分辨率熔解曲线分析技术检测苯丙酮尿症患者的苯丙氨酸羟化酶基因突变

目的 应用高分辨率熔解曲线（HRM）分析技术检测苯丙酮尿症患者苯丙氨酸羟化酶基因突变.方法 利用PCR扩增13例苯丙酮尿症（PKU）患者的苯丙氨酸羟化酶（PAH）基因第6、7、11及12外显子,然后对PCR产物进行HRM分析,通过DNA测序对HRM结果进行验证.结果 在13例PKU患者的26个PAH等位基因中共检测出5种不同突变基因,总检出率为38.5％.常见的突变类型是R243Q和A434D.检测出两种多态性位点为Q232Q和V245V.HRM分析结果与测序结果完全一致.结论 HRM技术具有简单、快速、易操作、准确等优点,可用于PKU患者PAH基因突变筛查.     

唐山市苯丙酮尿症患儿筛查及PAH基因突变情况分析

摘要：目的　分析唐山市苯丙酮尿症（PKU）患儿筛查结果及苯丙氨酸羟化酶（PAH）基因突变的情况。方法　选取2015年1月—2018年12月唐山市新生儿303 777例,通过茚三酮免疫荧光法检测新生儿足跟血中苯丙氨酸（PA）含量。再利用聚合酶链反应（PCR）和基因测序的方法对筛查出的PKU患儿PAH基因进行检测。结果　303 777例新生儿初步筛查共发现609例可疑阳性,召回其中411例（67.49%）进行复查,确诊42例（13.8/10万）。42例PKU患者的PAH基因测序显示,在84条染色体上共检测到62个（73.81%）12种突变,其中错义突变8种,无义突变2种,缺失突变1种,剪接突变1种。患者PAH基因突变分布在第2、3、6、7、9外显子上,其中第7外显子最多（35个,56.45%）,其次为第3外显子（14个,22.58%）。最常见的突变基因为Exon7-R243Q（18个,29.03%）和Exon3-R111X（10个,16.13%）、Exon7-R261Q（10个,16.13%）。筛查中发现1例典型PKU患儿,该患儿在PAH基因外显子区域同时发现2处杂合突变：c.208-210delTCT（缺失突变）和c.964G＞A（鸟嘌呤＞腺嘌呤）。结论　唐山市新生儿PKU发病率略高于全国,PAH基因突变以错义突变为主,第7外显子是唐山市患儿PAH基因高频突变位点。     

脯氨酸羟化酶研究进展

在氧气受限的情况下,脯氨酸羟化酶（PHD）的活性受到抑制,通过各种机理调节细胞内的氧适应水平,参与多种疾病的发生、发展。本文对PHD的各种调节机理及信号通路作一综述,以期为PHD相关疾病的治疗提供新的治疗思路及靶点。     

精神分裂症患者及超高危人群血浆多巴胺β羟化酶活性研究

目的 探讨精神分裂症患者以及临床超高危人群血浆多巴胺 β 羟化酶（DβH）活性的变 化及其与精神症状的关系。方法 采用横断面成组设计研究方法,选取 2015 年 1 月至 2017 年 12 月在 首都医科大学附属北京安定医院就诊的 61 例首发精神分裂症患者、35 例临床超高危人群以及性别匹配 的 86 名健康对照者作为研究对象。为了分析长期服用抗精神病药对血浆 DβH 的影响,本研究同时纳 入 39 例慢性精神分裂症患者。采用阳性和阴性精神症状评定量表（PANSS）评估患者的精神病性症状, 采用高效液相相色谱 - 电化学的方法检测受试者的血浆 DβH 活性,分析各组血浆 DβH 活性以及与精 神病性症状的关系,并进一步比较首发未用药精神分裂症以及慢性用药患者的血浆 DβH 活性差异,分 析抗精神病药对患者血浆 DβH 活性的影响。结果 首发精神分裂症组、临床超高危组以及健康对照 组的血浆 DβH 活性分别为（12.35±8.55）、（19.59±13.95）、（17.51±11.04）nmol/（ml·min）,组间比较差异有 统计学意义（F=6.591,P=0.002）;首发精神分裂症组的血浆 DβH 活性低于健康对照组和临床超高危组, 差异有统计学意义（P＜ 0.05）,但临床超高危组和健康对照组比较,差异无统计学意义（P＞ 0.05）。首发 精神分裂症患者的血浆 DβH 活性与病程、阳性症状、阴性症状及一般精神病性症状间均无相关性（P＞ 0.05）。首发未用药患者的血浆 DβH 活性低于首发已用药患者,差异有统计学意义（t=2.023,P=0.048）。 慢性用药患者的血浆 DβH 活性为（18.52±7.00）nmol/（ml·min）,高于首发未用药患者,差异有统计学意 义（F=7.053,P=0.010）。结论 首发未用药精神分裂症患者的血浆 DβH 活性降低,而短期或长期服用 抗精神病药能够增加患者的血浆 DβH 活性。     

槲皮素通过影响吲哚胺-2,3-双加氧酶活性抑制HeLa细胞增殖的研究

目的研究槲皮素抑制人宫颈癌HeLa细胞增殖的机制。方法采用CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期的变化;运用紫外可见分光光度计测定OD₄₈₀值,反映色氨酸代谢及犬尿氨酸的生成情况;qPCR法检测IDO1的mRNA表达;表达、纯化IDO1蛋白并进行体外酶活性反应,用高效液相色谱法检测色氨酸和犬尿氨酸的含量变化。结果槲皮素抑制HeLa细胞的增殖,引起G0/G1细胞周期阻滞;槲皮素抑制色氨酸的代谢;槲皮素能够明显抑制IDO1的体外酶催化活性,但不影响IDO1的表达;外源性添加色氨酸的代谢产物犬尿氨酸可以逆转槲皮素引起的细胞增殖抑制。结论槲皮素可能通过抑制IDO1的酶催化活性,影响细胞色氨酸的代谢,这可能是槲皮素发挥其抗宫颈癌HeLa细胞增殖作用的机制之一。     

色氨酸分解代谢途径阻断对深海链霉菌ZH66次级代谢及生长的影响

【目的】以深海链霉菌Streptomyces somaliensis SCSIO ZH66为研究对象,通过阻断其色氨酸分解代谢途径,探究代谢产物与生长的变化。【方法】通过Blastp分析寻找S. somaliensis SCSIO ZH66基因组上编码色氨酸双加氧酶基因tdo(ORF0630和ORF6017),在前期阻断ORF0630的基础上采用PCR-targeting的策略阻断ORF6017,通过HPLC检测发酵产物的变化,并观察用不同培养基培养时突变株与野生株生长的差别。【结果】与野生株相比,突变株ZH66Δtdo不产生antimycins,但无其他次级代谢产物的变化。与此同时,ZH66Δtdo在MS平板上开始产生气生菌丝与孢子的时间均提前了12 h,在ISP-2液体培养基中生长对数期开始时间同样提前12 h。【结论】链霉菌S. somaliensis SCSIO ZH66中色氨酸分解代谢途径的阻断未促进其他可能以色氨酸为前体次级代谢产物的合成,而是促进了菌株的生长,为其他链霉菌中色氨酸分解代谢调控提供了借鉴。     

LC-MS/MS法测定小鼠肿瘤中犬尿氨酸和色氨酸的含量

目的 建立同时测定ICR小鼠Lewis皮下移植肿瘤组织中犬尿氨酸和色氨酸的检测方法。方法 以稳定同位素标记的氨基酸为内标,肿瘤组织匀浆后再以甲醇蛋白沉淀后取上清液进行液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）分析,色谱柱为C₁₈分析柱(2.1 mm×100 mm,3.5 µm),流动相为甲醇-水(均含0.1%甲酸)。正离子模式,采用多反应监测(MRM)进行测定。结果 浓度范围在100~25 000 nmol·L^-1内线性关系良好,精密度、准确性、特异性和稳定性,结果均符合接受标准。结论 该法可准确测定小鼠肿瘤组织中犬尿氨酸和色氨酸的含量。     

双相障碍患者血清5-HT、TPH水平与临床特征的相关性

目的:探讨双相障碍患者血清5-羟色胺(5-HT)、色氨酸羟化酶(TPH)水平与临床特征的相关性。方法:选取2018年9月至2020年2月该院收治的62例双相障碍患者设为观察组,另选取同期50名该院健康检查者为对照组。观察组根据有、无童年创伤分为A组(n=30)和B组(n=32)。比较观察组和对照组血清5-HT、TPH水平;比较A组和B组抑郁、躁狂发作次数和发作时间以及社会功能评定量(SSPI)评分;采用Pearson相关性分析双相障碍患者血清5-HT、TPH水平与抑郁、躁狂发作次数、发作时间及SSPI评分的相关性。结果:观察组血清5-HT、TPH水平均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);A组抑郁、躁狂发作次数均多于B组,抑郁、躁狂发作时间长于B组,差异有统计学意义(P<0.05);A组日常生活能力、社会性活动技能和SSPI总分显著低于B组,差异均有统计学意义(P<0.05);血清5-HT、TPH水平与双相障碍患者抑郁发作次数、躁狂发作次数和SSPI评分呈负相关(P<0.05);血清5-HT水平与躁狂发作时间呈负相关(P<0.05)。结论:双相障碍患者血清5-HT和TPH水平低于健康体检者,血清5-HT、TPH水平与双相障碍患者抑郁发作次数、躁狂发作次数和SSPI评分呈负相关。     

口腔微生物及宿主细胞氨基酸代谢与口腔疾病相关性研究进展

氨基酸作为蛋白质的合成底物,是细胞内仅次于葡萄糖的重要能量和营养来源。微生物和宿主细胞均能进行氨基酸代谢,其代谢产物广泛参与炎症、免疫反应等生物学过程。探究疾病发生发展过程中微生物与宿主氨基酸代谢变化成为新的研究热点。本文将对色氨酸、精氨酸等氨基酸代谢途径及其产物与龋病、牙周病、舍格伦综合征,甚至口腔肿瘤等常见口腔疾病发生发展相关研究进展做一综述,以期为深入理解口腔疾病致病机制和指导临床治疗提供理论依据。     

46XX-17α-羟化酶缺乏症助孕成功1例

先天性肾上腺皮质增生症(congenital adrenal hyperplasia,CAH)是一类常染色体隐性遗传病,其中17α-羟化酶缺乏症(17α-hydroxylase deficiency,17α-OHD)为CAH少见类型。17α-OHD为CYP17基因突变所致,导致17α-羟化酶部分或完全缺乏,体内不能生成足够的皮质醇及性激素,表现为促肾上腺皮质激素(adrenocorticotropic hormone,ACTH)分泌过多,雌二醇(estradiol,E2)和雄激素降低,孕酮(progesterone,P)、促卵泡生成素(follicle stimulating hormone,FSH)和黄体生成素(luteinizing hormone,LH)升高。患者社会性别多为女性,按照染色体核型可分为46XX和46XY,其中46XX型更少见。临床表现为低血钾和高血压,46XX型患者可出现月经不规律、闭经和不孕。患者症状轻重可因17α-羟化酶缺乏程度不同而异,部分性17α-OHD患者因症状不典型,易漏诊或误诊。染色体核型为46XX的部分性17α-OHD患者可有不同程度内外生殖器官的发育和月经来潮,具备潜在排卵和生育机会,但由于体内高P水平对子宫内膜的不良影响,患者存在不孕的问题。目前关于46XX-17α-OHD助孕治疗的报道国外仅见4例,国内曾有文献报道2例,但未提及其助孕过程。北京大学第三医院生殖医学中心1例46XX-17α-羟化酶缺乏症患者经过体外受精-胚胎移植技术(in vitro fertilization-embryo transfer,IVF-ET)治疗后成功受孕并分娩。首先给予患者糖皮质激素治疗降低P水平,随后采用超长方案促排卵,获卵10枚,冻存胚胎6枚。促性腺激素释放激素激动剂(gonadotropin releasing hormone agonist,GnRH-a)降调节人工周期解冻移植后,患者成功妊娠并于妊娠37周剖宫产分娩1名健康男婴。本例患者的诊治过程提示,46XX-17α-OHD患者可以有良好的卵母细胞和胚胎,IVF联合人工周期解冻移植可以是此类患者助孕的有效方法。