凉血通瘀方干预高血压大鼠急性脑出血模型对脑组织中差异miRNA表达的影响＊

目的 研究凉血通瘀方对高血压大鼠急性脑出血模型脑组织miRNA表达的影响，对差异表达的miRNA靶基因进行分析，探索凉血通瘀方可能的药效机制。方法 将自发性高血压大鼠随机分成对照组（B）和实验组（C）。适应性饲养一周后，C组灌胃凉血通瘀方，B组灌胃等体积生理盐水，连续5天，每天1次。构建脑出血模型后收集脑组织，借助全转录组测序技术获得miRNA表达量，与miRBase数据库比对获取已知miRNA，使用miRDeep2预测新miRNA。差异分析软件为DESeq2，筛选阈值为|log₂FC| ≥1 并且P <0.05。对显著差异表达的miRNA进行靶基因预测，对靶基因进行GO功能、KEGG通路富集和PPI网络分析。结果 实验组和对照组对比，共发现21个显著差异表达的miRNA，上调有9个，下调有12个，共预测得到1243个有统计学意义的靶基因。GO富集分析发现，生物过程中突触囊泡分泌的调节、神经递质分泌的调节和神经递质运输的调节占前三位，神经元投射终点、全膜、质膜区域和细胞投射则是主要的细胞成分。分子功能分别为小GTPase绑定、底物特异性跨膜转运蛋白活性和离子跨膜转运体活性。通路分析结果显示，靶基因在癌证通路、pI3K-Akt信号通路、人类乳头瘤病毒感染、神经活性配体-受体相互作用和MAPK通路等分布广泛。采用STRING网站和Cytoscape软件，根据MCC算法筛选出ADRA2C、CASR、CCL28、CCR1、DRD2、GNAT3、GRM2、DYNC1LI1、GABBR1、GNAI1等核心靶基因。结论 凉血通瘀方对脑出血急性期鼠脑组织内miRNA的表达有重要影响；显著差异表达miRNAs可能通过靶向核心基因调控凉血通瘀方干预急性脑出血的病理过程及预后。     

淫羊藿总黄酮改善自然衰老大鼠睾丸支持细胞分泌功能衰退的作用

目的研究淫羊藿总黄酮(TFE)对衰老睾丸支持细胞(Sertoli细胞)分泌功能衰退的影响,并从肌醇需酶1α(IRE1α)/X盒结合蛋白1(XBP1)信号通路探讨其分子机制。方法将36只SPF级18月龄SD雄性大鼠随机分为自然衰老组和TFE 10及40 mg·kg~(-1)组,每组12只;另取10只2月龄大鼠作为壮龄对照组。每天定时ig给TFE 1次,每5 d间隔2 d再继续ig给药,给药共计4个月。计算睾丸指数;HE染色观察睾丸组织形态;实时定量PCR和Western印迹法检测睾丸组织中胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)、骨形态形成蛋白4(BMP4)及干细胞因子(SCF)mRNA和蛋白表达水平;检测睾丸组织中磷酸化IRE1α(p-IRE1α)和XBP1蛋白表达水平;免疫荧光法检测睾丸组织内Sertoli细胞数量和p-IRE1α定位。结果与壮龄对照组比较,自然衰老组大鼠睾丸指数显著降低(P<0.01);与自然衰老组相比,TFE 40 mg·kg~(-1)组睾丸指数显著升高(P<0.05)。HE结果显示,自然衰老组睾丸曲细精管的形态结构紊乱,部分生精细胞发生脱落;TFE给药组能改善睾丸曲细精管的形态结构。实时定量PCR结果显示,与壮龄对照组比较,自然衰老组Sertoli细胞分泌因子GDNF和SCF mRNA表达水平均显著下调(P<0.01);Western印迹结果显示,GDNF,BMP4和SCF蛋白显著下调(P<0.01)。与自然衰老组相比,TFE给药组分泌因子mRNA和蛋白表达水平均显著上调(P<0.05,P<0.01)。Western印迹结果显示,与壮龄对照组比较,自然衰老组睾丸组织中p-IRE1α和XBP1蛋白表达均显著下调(P<0.01);与自然衰老组相比,TFE给药组p-IRE1α和XBP1蛋白表达显著上调(P<0.01)。免疫荧光结果显示,壮龄对照组、自然衰老组和TFE给药组Sertoli细胞数量无显著差异。不仅在生精细胞胞质广泛表达,在Sertoli细胞胞质亦有表达。结论 TFE可显著改善自然衰老所致大鼠睾丸Sertoli细胞分泌功能衰退,其机制可能与调节IRE1α/XBP1信号通路有关。     

线粒体钙单向转运体在β淀粉样蛋白诱导小胶质细胞凋亡中的作用机制

目的探讨线粒体钙离子单向转运体在β淀粉样蛋白诱导小胶质细胞凋亡中的作用机制。方法将体外原代培养小胶质细胞随机分为对照组、Aβ_(25-35)组、Ru360组、Spermine组,并进一步采用线粒体特异性抗氧化剂MitoQ进行干预;采用流式细胞术、荧光探针及Western blotting等技术检测细胞凋亡、线粒体钙离子浓度、ROS生成及相关蛋白表达。结果 (1)与对照组相比,Aβ_(25-35)显著增加小胶质细胞凋亡,Ru360显著减少Aβ_(25-35)诱导的小胶质细胞凋亡,而Spermine发挥相反作用;(2)与对照组相比,Aβ_(25-35)显著增加低线粒体钙离子浓度及线粒体ROS生成水平,Ru360显著降低Aβ_(25-35)诱导的线粒体钙离子浓度及线粒体ROS生成水平的升高,而Spermine发挥相反作用;(3)与对照组相比,Aβ_(25-35)组GRP78、CHOP和caspase-12的表达显著增加,Ru360显著减少Aβ_(25-35)诱导的GRP78、CHOP和caspase-12表达的增加,而Spermine发挥相反作用;(4)与Aβ_(25-35)组相比,MitoQ组显著减少线粒体ROS产物水平,并减少GRP78、CHOP和caspase-12表达。结论 (1) MCU在Aβ_(25-35)诱导的小胶质细胞凋亡发挥重要作用,抑制MCU可减少细胞凋亡,而激活MCU增强细胞凋亡;(2)氧化应激介导的内质网应激反应可能在MCU参与Aβ_(25-35)诱导的小胶质细胞凋亡中发挥重要作用。     

p150glued缺失对神经元中Rab蛋白表达水平的影响

目的探讨家族性运动神经元病致病基因DCTN1编码的p150glued蛋白缺失对于原代培养的皮质神经元细胞活性及Rab蛋白表达的影响。方法以野生型(WT)和p150glued缺失(p150glued KO)新生小鼠为细胞来源,体外培养皮质神经元7d和14d后,分别利用MTT法和Western blot法检测皮质神经元存活率以及Rab蛋白家族成分表达水平。结果与WT小鼠皮质神经元相比,p150glued KO小鼠皮质神经元在体外培养7d和14d时,细胞活力无明显差异,14d时Rab4、Rab5、Rab9、Rab11、Rab24蛋白表达水平未发生显著变化,而Rab7蛋白表达水平显著降低(P0.001)。结论 p150glued缺失对原代皮质神经元存活以及调控囊泡运输的Rab蛋白家族中Rab4、Rab5、Rab9、Rab11、Rab24的表达水平无明显影响,但特异性减弱晚期内体标志物Rab7蛋白的表达,可阻碍胞内溶酶体降解通路。     

ICP-MS法同时测定小牛血去蛋白提取物注射液中14种元素的含量

目的:建立同时测定小牛血去蛋白提取物注射液中14种元素含量的方法。方法:采用电感耦合等离子体质谱法。射频功率为1 350 W,载气(氩气)流量为1.1 L/min,碰撞气(氦气)流量为4.5 L/min,积分时间为1.5 s,等离子体气流量为18 L/min,采样深度为65 mm,进样蠕动泵转速为24.0 r/min,数据采样模式为跳峰模式,重复次数为3次。结果:镉、铅、砷、汞、钴、钒、镍、铊、银、钼、铜、铬、钡、铝的检测质量浓度线性范围分别为0.05～50μg/L(r=0.999 7)、0.05～50μg/L(r=0.999 7)、0.05～50μg/L(r=0.999 8)、0.05～50μg/L(r=0.999 5)、0.05～50μg/L(r=0.999 5)、0.05～50μg/L(r=0.999 8)、0.05～50μg/L(r=0.999 6)、0.05～50μg/L(r=0.999 5)、0.05～50μg/L(r=0.999 5)、0.05～50μg/L(r=0.999 8)、0.05～50μg/L(r=0.999 6)、0.05～50μg/L(r=0.999 6)、0.05～50μg/L(r=0.999 7)、0.5～70μg/L(r=0.999 8);定量限分别为0.003 1、0.008 9、0.016 0、0.025 0、0.002 1、0.006 9、0.038 1、0.002 1、0.005 5、0.002 0、0.023 1、0.005 0、0.002 0、0.324 9μg/L;检测限分别为0.000 9、0.002 7、0.004 8、0.007 5、0.000 6、0.002 1、0.011 4、0.000 6、0.016 5、0.000 6、0.006 9、0.001 5、0.000 6、0.097 5μg/L;精密度、稳定性、重复性试验的RSD均小于8%;加样回收率分别为87.4%～94.3%(RSD=2.6%,n=9)、110.3%～118.2%(RSD=1.8%,n=9)、89.8%～99.7%(RSD=3.1%,n=9)、77.7%～84.4%(RSD=2.5%,n=9)、105.6%～113.4%(RSD=2.3%,n=9)、106.7%～116.5%(RSD=2.7%,n=9)、89.1%～104.5%(RSD=4.5%,n=9)、105.6%～118.6%(RSD=3.6%,n=9)、77.8%～88.0%(RSD=4.0%,n=9)、106.7%～116.1%(RSD=2.8%,n=9)、88.5%～97.1%(RSD=3.1%,n=9)、80.5%～88.6%(RSD=2.9%,n=9)、85.2%～99.4%(RSD=4.2%,n=9)、97.6%～109.3%(RSD=3.2%,n=9)。结论:该方法操作简便、准确,精密度、稳定性、重复性均较好,可用于同时测定小牛血去蛋白提取物注射液中14种元素的含量。     

血清窖蛋白-1在慢性阻塞性肺疾病相关肺动脉高压患者中的表达及意义

目的 研究血清窖蛋白-1 （Cav-1） 在慢性阻塞性肺疾病 （COPD） 相关肺动脉高压 （PAH） 患者中的表达及其意义。方法 选取稳定期COPD患者65例， 根据是否合并PAH分成COPD组 ［肺动脉收缩压 （PASP） ＜40 mmHg， 35例］ 及COPD-PAH组 （PASP ≥40 mmHg， 30例）。另选取在本院健康体检的志愿者30例作为对照组。对比各组基线资料、 动脉血气分析、 肺功能指标， 以及血清Cav-1、 白细胞介素 （IL） -6和肿瘤坏死因子-α （TNF-α） 的表达水平。绘制受试者工作特征 （ROC） 曲线， 评价Cav-1对COPD合并PAH的诊断价值。结果 COPD-PAH组与COPD组第一秒用力呼吸容积 （FEV1） /用力肺活量 （FVC）、 FEV1占预计值百分比 （FEV1%） 及氧分压 ［p （O2 ）］ 低于对照组， 而二氧化碳分压 ［p （CO2 ）］、 PASP均高于对照组 （P＜0.01）。COPD-PAH组p （O2 ） 低于COPD组， p （CO2 ）、 PASP均高于COPD 组 （P＜0.01）。对照组、 COPD组及COPD-PAH组Cav-1表达水平呈逐渐降低趋势， 而IL-6、 TNF-α表达水平呈逐渐升高趋势 （P＜0.01）。血清Cav-1诊断COPD合并PAH的ROC曲线下面积为0.902 （0.821～0.955）， 最佳截断值为 6.66 μg/L， 此时诊断敏感度为76.7%， 特异度为85.7%， 与多普勒超声诊断仪测量PASP结果比较一致性较好 （Kappa 值=0.627）。结论 血清Cav-1在COPD相关PAH患者表达明显下调， 可以作为预测COPD相关PAH的新型血清标志物。     

调经汤对肾阴虚型卵巢储备功能下降患者血清性激素及GDF-9、BMP-10水平的影响

目的：探讨调经汤在肾阴虚型卵巢储备功能下降（DOR）患者中的治疗效果。方法：选择2019年10月~2021年3月接受治疗的86例肾阴虚型DOR患者，采用随机数字表法分为对照组和研究组，各43例。对照组口服地屈孕酮片，研究组在对照组基础上加用调经汤，两组均连续用药28 d。对比两组临床疗效、性激素水平[促卵泡生成素（FSH）、促黄体生成素（LH）、雌二醇（E2）]及生长分化因子-9（GDF-9）、骨形态生成蛋白-10（BMP-10）。结果：研究组治疗总有效率高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）；研究组治疗后FSH、LH水平均低于对照组，E2、GDF-9及BMP-10水平均高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：调经汤在肾阴虚型DOR患者治疗中获得确切效果，能够有效改善性激素水平，提升GDF-9及BMP-10水平，有助于卵巢储备功能的恢复。     

高迁移率族蛋白B1在糖尿病足患者外周血中的表达及意义

目的:探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)在糖尿病足患者外周血中的表达及临床意义。方法:收集92例2型糖尿病足患者静脉血标本作为试验组(糖尿病足组),另外取98例非糖尿病足2型糖尿病患者作为对照(糖尿病组),101例健康人作为正常对照组,采用酶联免疫吸附测定法检测受检对象外周静脉血中HMGB1、MMP9和AGE的表达量。结果:与正常对照组相比,糖尿病足组患者和糖尿病组患者血清中HMGB1、MMP9和AGE的表达量显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);与糖尿病组患者相比,糖尿病足组患者HMGB1、MMP9和AGE表达量显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);糖尿病足组患者血清中HMGB1的表达量与AGE(r~2=0.31)和MMP9(r~2=0.77)的表达量呈现正相关(P<0.05)。结论:糖尿病足患者外周血中HMGB1的表达量明显升高,其可能是糖尿病足发病机制中的重要参与者。