云南省澜沧江下游地区虫媒病毒研究状况

澜沧江下游地区位于我省南部，包括思茅和西双版纳两个地州。根据我国气候带划分，该地区属边缘热带和南亚热带，具有海拔低、气温高、湿度大、雨量多以及众多生物群落和虫媒传染病复杂的特点。由于澜沧江-湄公河次区域开发已列为我国与东南亚各国合作项目。掌握该地区虫媒病毒的分布情况和宿主媒介特点，为疾病防治提供科学依据，对搞好大湄公河次区域开发有重要意义。近10多年来，我们在该地区采集到节肢动物、患者和健康人血清，以及动物内脏组织、血清标本共59988份（只），其中雌性成蚊8属44种54211只，蠓类950只、蜱类402只，虱子402只，鼠肺881份，蝙蝠脑453份，壁虎375只。患脑炎的乳猪脑组织1份，发热和脑炎患者血清143份，健康人血清1250份，蝙蝠血清291份，猴血清204份，猪血清197份，鼠血清535份。现将这些标本的病毒学检测和流行病学调查分析结果综述如下。     

人KLK1和EGFP双顺反子重组腺病毒构建及其在血管平滑肌细胞中的表达

目的：构建携EGFP为报告基因和人组织激肽释放酶1(hKLK1)基因双顺反子的重组腺病毒（Ad-hKLK1-IRES-EGFP）,并观察在自发性高血压大鼠（SHR）血管平滑肌细胞（VSMCs）中的表达变化。方法:通过双酶切质粒pBluescritII KS-hKLK1，将hKLK1基因定向克隆至带有IRES-EGFP的腺病毒穿梭质粒pDC316中，构建成重组穿梭质粒 ，将其与腺病毒骨架质粒BHGloxE1，3Cre共转染293A细胞，经包装并获得重组腺病毒，用PCR、酶切及测序方法对其进行鉴定，测定病毒滴度；用重组腺病毒感染VSMCs，用荧光显微镜下观察到的绿色荧光来测定感染率，用RT－PCR和Western blotting法测定hKLK1基因在VSMCs中的表达。结果:PCR、酶切和测序表明携EGFP的重组穿梭质粒pDC316-hKLK1-IRES-EGFP构建正确，并与骨架质粒在293A细胞中成功包装出重组腺病毒Ad-hKLK1-IRES-EGFP，其滴度为4.5×10¹¹/L。重组腺病毒感染VSMCs后，在荧光显微镜下观察到明亮绿色荧光蛋白表达，感染率高达90％以上，可检测到hKLK1基因的mRNA及蛋白表达，并与感染时间(1 d-7 d) 有显著依赖关系，峰值感染复数为100 MOI。结论:成功构建并包装了携EGFP和hKLK1基因的双顺反子重组腺病毒载体系统Ad-hKLK1-IRES-EGFP；感染VSMCs可检测到基因hKLK1和EGFP的独立共同高表达，该系统为一直观、安全、高效的基因转移系统。     

NK细胞受体(Ⅱ):免疫球蛋白超家族分子

免疫球蛋白超家族NK细胞受体(Ig-SF NKR)是一大类结构和功能均具一定异质性的分子,迄今已克隆了32个全长cDNA,已确定一级结构的分子有20个。Ig-SF NKR属于Ⅰ型跨膜蛋白。本文还对Ig-SF NKR的配体识别特异性、信号转导机制及其生物学意义进行了综述。     

宫颈细胞学ASCUS/LSIL的临床意义及处理

目的探讨宫颈不典型鳞状上皮，低度鳞状上皮内病变（ASCUS／LSIL）的临床意义及处理方法。方法对中国医学科学院肿瘤医院2004～2006年妇科门诊用TCT（宫颈液基细胞学）的方法检出的254例ASCUS／LSIL以病理结果为金标准进行回顾性分析，其中136例进行了阴道镜检查。结果在140例ASCUS中，宫颈上皮内瘤变（CIN）病变占51．5％，其中高度病变占22．9％，114例LSIL中CIN病变占59．6％，其中高度病变占30．7％，两组资料比较差异无统计学意义，P〉0．05。其中136例中阴道镜诊断炎症47例，低度宫颈上皮内病变53例，高度宫颈上皮内病变36例及病理检查结果炎症55例，低度宫颈上皮内病变41例，高度宫颈上皮内病变40例，阴道镜与病理对照进行了～致性检验，Kappa=0．314，U=0．064，P〈0．05，一致性好。病理证实人乳头状瘤病毒（HPV）阳性的妇女中CIN发生率79％（67／84），而HPV阴性者中CIN发生率43．5％％（74／170），结果显示两组资料比较差异有统计学意义，X^2=29．88，P〈0．05。本组资料中年龄在35～55岁的妇女占83．5％与HPV阳性的妇女年龄高峰一致。结论对ASCUS的患者应与LSIL同样重视，立即进行阴道镜检查以避免22．9％的高度病变的患者漏诊或失访，对35～55岁的HPV感染的妇女应更加重视。     

PBX1基因对系统性红斑狼疮易感基因IFI16表达的影响

探讨PBX1基因转染人单核细胞系THP1后,对IFI16基因表达的影响。以携带人PBX1基因表达序列的复制缺陷型5型腺病毒载体(pDC315-PBX1-EGFP)转染THP1细胞后,采用实时定量PCR(RT-PCR)和Western blot技术分别在mRNA水平和蛋白水平检测PBX1和IFI16表达的变化。结果,pDC315-PBX1-EGFP转染THP1细胞后,PBX1基因的表达水平都增高,同时发现IFI16基因的表达水平降低。PBX1作为一种转录因子,能调节干扰素诱导蛋白IFI16的表达。     

基因打靶技术在构建人源体细胞基因敲除或敲入细胞系中的应用

基因打靶技术能够帮助人们认识某些动物个体或细胞表型异常的遗传基础，利用该技术构建的模式生物（例如基因敲除小鼠）已经广泛地应用于人类基因的研究，截至1999年就已经报道了800多个模式小鼠种系。同源重组介导的基因打靶技术（基因敲除或敲入）是判定基因功能的强有力工具。与基因敲除小鼠相比，人类体细胞基因敲除或敲入细胞系构建的报道相对较少，但该项技术在细胞水平上对某些人源基因参与的生化或生理途径的分析是不可替代的。基因打靶技术最常见的应用是通过使所有等位基因连续失活建立基因敲除细胞系；     

细胞周期蛋白D1基因多态与人结直肠癌遗传易感性

目的探讨细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)基因第870位点单核苷酸多态(G870A)与结直肠癌(colorectal cancer,CRC)遗传易感性的关系。方法采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法,检测345例CRC与670名对照的G870A基因型分布及差异。结果CRC和对照两组人群的Cyclin D1 G870A基因型分布差异无统计学意义(P>0.05)。与GG基因型相比,GA、AA基因型及A等位基因携带者(GA及AA基因型)的CRC风险分别为1.08倍(95%CI=0.75～1.54)、1.01倍(95%CI=0.68～1.51)及1.06倍(95%CI=0.75～1.49)。经性别、年龄、肿瘤位置、组织学分化程度和Dukes分期等因素分层分析,结果均显示G870A与CRC发病风险无显著性相关。结论Cyclin D1 G870A多态与宁波地区人群的CRC发病风险无相关性。     

支气管哮喘患者血清IL-10与IgE水平变化的研究

分别用ELISA、IRMA法对50例支气管哮喘急性发作患者和48名对照者血清IL-10、IgE进行测定.结果是: 支气管哮喘患者IL-10含量明显低于对照组(P＜0.01), 而IgE含量则明显高于对照组(P＜0.01), 两者之间呈明显负相关(r=-0.18,P＜0.01).结论是: 支气管哮喘患者IL-10不足、IgE水平增高可能成为其发病的重要原因之一.     

骨髓瘤细胞免疫球蛋白重链基因可变区的研究

为分析多发性骨髓瘤 (multiplemyeloma,MM )细胞对免疫球蛋白重链基因可变区 (VH)基因家族的取用 ;根据VH 基因突变特点 ,揭示MM细胞的起源。以重链基因可变区 (VH1 VH6 )基因家族特异性引物 ,用PCR法扩增骨髓瘤细胞系CZ 1细胞和 98例MM患者外周血单个核细胞VH 基因片段 ,纯化后的PCR产物和pMD18 T载体连接并转化JM10 9细菌 ,经克隆鉴定后 ,目的DNA片段用末端双脱氧法测定DNA序列 ,和其对应的胚系基因序列比较。结果表明MM细胞对各VH 基因家族的取用顺序为VH3>VH1>VH4 >VH2 >VH5 >VH6 ;MM细胞VH 基因互补决定区 (CDR )氨基酸替换性突变 (R突变 ) /氨基酸静寂性突变 (S突变 )等于 9 6 7,而骨架区 (FR )R/S等于 0 87,而且随着疾病的进展 ,IgVH 基因并不发生进一步的突变。结论是MM前体细胞在进行VDJ基因重排时 ,对VH 基因家族的取用和基因家族相对大小有关 ;MM细胞可能起源于已经发生抗原选择和体细胞突变的B记忆细胞或前浆细胞。     

人血清免疫球蛋白工作标准的制备与标定

本文报导混合浓缩人血清工作标准(89-1)的制备和用WHO相应参考标准血清标定出其中五类免疫球蛋白(Igs)及IgG4亚类含量。该制剂主要用于体外测定IgG、IgA、IgM的工作标准,也可供作体外测定IgD、IgE、IgG4的工作标准。混合前每份血清均无乙型肝炎表面抗原、转氨酶正常。定量分装为每安瓿0.5ml,经冷冻干燥后,4℃保存。参照国际参考标准血清67/97及67/37,分别以免疫单扩散法标定89-1中IgG、IgA、ISM含量;以酶联免疫吸附试验(ELISA)标定IgD、IgG4和IgE含量。其中IgG、IgG4、IgA、IgM含量,应用本室制备的相应单克隆抗体(McAb)标定,而IgD和IgE应用多克隆抗体(PcAb)进行标定。并用五剂量法及四剂量法分别计算Igs含量。