变形链球菌葡聚糖结合蛋白B基因在大肠杆菌中的表达及纯化

目的 :在大肠杆菌中表达变形链球菌葡聚糖结合蛋白B基因 (glucanbindingproteinB ,gbpB) ,并对重组蛋白进行初步纯化 ,为下一步制备多抗和进行相关的研究奠定基础。方法 :将克隆到的gbpB全长编码区基因克隆到表达载体 pPROEXTMHTb ,构建表达质粒 pPROEXTMHTb - gbpB ,以大肠杆菌E .coliBL2 1(DE3)为宿主菌进行诱导表达 ,表达产物经镍 -次氮基三乙酸 (Ni-NTA)柱进行亲和层析纯化。结果 :工程菌经IPTG诱导 3h后 ,在SDS -PAGE上出现一条新的蛋白条带 ,相对分子量 (Mr)为 4 .5～ 5 .0× 10 3 ,以可溶形式存在 ,经Ni-NTA柱纯化后获得纯度较高的重组葡聚糖结合蛋白B。结论 :获得Mr为 4 .5～ 5 .0× 10 3 的重组葡聚糖结合蛋白B     

变形链球菌UA159上葡聚糖结合蛋白C的定位探讨

目的探索C端结构变异为亮氨酸-脯氨酸-任意氨基酸-丙氨酸-甘氨酸（LPXAG）的葡聚糖结合蛋白C（glucan binding proteinC，GbpC）是否在变形链球菌UA159的细胞壁上。方法用PCR法扩增变形链球菌UA159GbpCC端的编码基因片段，推测和分析C端氨基酸序列组成；分别提取上清蛋白、胞内蛋白和胞壁蛋白，用Western blot法在变形链球菌UA159各成分中检测GbpC；用免疫金标直接观察GbpC的表达位置；应激条件下进行多聚糖依赖黏附实验。结果变形链球菌UA159GbpCC端亮氨酸-脯氨酸-任意氨基酸-苏氨酸-甘氨酸（LPXTG）的结构变异为LPXAG；免疫印迹叮以在细菌的壁蛋白中检测到GbpC；电镜下可以观察到金颗粒围绕细菌细胞壁聚集；变形链球菌UA159在应激条件下表现为多糖依赖黏附实验阳性。结论C端为LPXAG的GbpC仍然锚定在细菌的细胞壁上。     

变形链球菌gbpA的葡聚糖结合区GBD的分子克隆及其在大肠杆菌中的表达

目的：克隆变形链gbpA的葡聚糖结合区GBD的基因片段，并使其在大肠杆菌中获得表达。方法：PCR技术克隆GBD片段及蛋白重组融合表达技术获得其在大肠杆菌中的表达。结果：成功克隆变形链球菌gbpA的葡聚糖结合区GBD的基因片段，并在大肠杆菌中得到表达。结论：利用分子生物学技术能够成功克隆目的基因并获得融合蛋白的表达。     

变形链球菌表面蛋白可变区与葡聚糖合成的关系

目的:探讨变形链球菌表面蛋白可变区与葡聚糖合成的关系。方法:取本课题组前期工作所获得的变链c型临床株,分成水溶性葡聚糖(W SG)组和水不溶性葡聚糖(W IG)组;每组又按葡聚糖合成能力分为合成量高(ABS>0.3)与合成量低(ABS<0.15)组。以所选细菌DNA为模板,PCR扩增表面蛋白V区编码基因SrV ,经DdeI酶切分型,比较各基因型在两组细菌中的分布情况。结果:1)两组均有4种基因型(A、B、C、D)并且在构成比上都以A、B型占多数,C、D型所占比例较少且存在明显差异;2)在W SG组主要基因型的分布出现差异:合成量高的以A型为主占50%,B型占33.33%,C型占11.11%;合成量低的以B型为主占50%,A型占30.77%,C型19.15%。3)在W IG组A、B型的分配基本相似,均在40~48%之间。结论:变形链球菌表面蛋白可变区的基因型分布与水溶性葡聚糖的合成存在一定的相关性而与水不溶性葡聚糖的合成未见明显关联。     

变形链球菌葡糖基转移酶缺陷突变株合成葡聚糖的扫描电镜观察

采用扫描电子显微镜观察在蔗糖存在下变链ＭＴ８１４８及其葡糖基转移酶缺陷突变株Ｂ２９、Ｂ５８和Ｂ３２合成葡聚糖的超微结构。结果在蔗糖存在下，变链ＭＴ８１４８及其ＧＴＦＳＩ缺陷株菌体表面和菌体间有大量丝状、不定形物质，而ＧＴＦＩ缺陷株Ｂ２９、ＧＴＦＩ和ＧＴＦＳＩ缺陷株Ｂ３２菌体表面光滑，菌体间无不定形物质，表明在变链ＭＴ８１４８、Ｂ５８菌体表面和菌体间的不定形物质为ＧＴＦ１酶产物－非水溶性葡聚糖。     

蜂房粗提物对致龋菌影响的实验研究

目的 研究蜂房粗提物对致龋菌生长，产酸及产胞外多糖的影响。探讨蜂房粗提物是否能有效调节口腔菌群的生态平衡。方法 测定蜂房粗提物对3种口腔内变形链球菌，粘性放线菌和血链球菌的最低抑菌浓度（MIC）。再测定低于MIC的4个浓度的蜂房粗提物对上述3种细菌产酸及产生水溶性和水下溶性多糖能力的影响。结果 蜂房粗提物对3种细菌的生长，产酸均有一定的抑制作用。能够有效抑制变形链球菌和血链球菌产生水不溶性葡聚糖，但对糖性放线菌合成水不溶性葡聚糖无明显抑制作用。结论 蜂房粗提物能有效抑制变形链球菌，粘性放线菌和血链球菌的生长，产酸及变形链球菌和血链球菌产生水不溶性葡聚糖。     

口腔链球菌右旋糖酐酶分子结构和功能的研究进展

右旋糖酐酶是一种葡聚糖酶,主要降解α-1,6葡聚糖,能够水解水溶性多糖,广泛存在于自然界中。很多细菌包括口腔链球菌在内都能够合成右旋糖酐酶。口腔链球菌合成的右旋糖酐酶与胞外多糖的修饰以及细菌的黏附有关。本文主要对近年来口腔链球菌右旋糖酐酶的分子结构及其功能的研究进行综述。     

非水溶性葡聚糖水解酶在控制人牙菌斑形成中的作用

本研究通过实验观察,证实非水溶性葡聚糖水解酶(insoluble glucan hydrolase)能降解非水溶性葡聚糖粘附物中多糖成分,松散牙菌斑结构,且对口腔粘膜无刺激作用及不良影响,能显著抑制人体口腔内牙菌斑形成。     

深部真菌感染的通用实验诊断技术进展

一、增光剂用于深部真菌病的诊断 可作为检查真菌感染时增光剂的物质有Cellufluor、Uvitex和Blankophor,已成功地从皮屑、甲屑、组织、细胞涂片和体液中检出真菌细胞。 1.原理:增光剂Cellufluor、Uvitex和Blankophor均为二苯乙烯类化合物,其化学成分是:Cellufluor为4,4’-bis[Z-di(2-hydroxyethyl)amino-4-phenylamino-1,3,5-triazine-6-ylamino]-stilbene-2,2’-disulphonic acid,sodium salt, Uvitex为4,4’-bis-[z-di(2-hydroxyethyl)amino -4-(3-sulphophenylamino)-1,3,5-triazine-6-ylamino]     

黄芪多糖的研究

从中药黄芪Aslragalus mongholicus Bunge.的水提液中分离得到两种葡聚糖AG-1、AG-2和两种杂多糖AH-1、AH-2。该四种多糖经电泳、凝胶柱层析等证实均为单一组分。AG-1为水溶性,经水解、过碘酸氧化、甲酸生成、Smith降解、乙酰解、红外、C-13核磁共振等确定为α(1→4)(1→6)葡聚糖、α(1→4)与口(1→6)甙键糖基的组成比例约为5:2。AG-2不溶于水,为α(1→4)葡聚糖。AH-1为水溶性酸性多糖,水解后纸层析检出含己糖醛酸(半乳糖醛酸和葡萄糖醛酸)、葡萄糖、鼠李糖、阿拉伯糖,其分子比值为1:0.04:0.02:0.01。AH-2为水溶性、水解后用纸层析和气相层析检出葡萄糖和阿拉伯糖,其分子比值为1:0.15。AG-1、AH-1具有某些免疫促进作用。