等位基因特异荧光PCR法检测CYP2C19基因型

目的了解人群CYP2C19基因型的分布,评价等位基因特异荧光PCR法检测CYP2C19基因型。方法等位基因特异荧光PCR法和金标准Sanger DNA直接测序法检测356名供者外周血CYP2C19基因型,实验采用同步盲法。结果 CYP2C19*1/*1型、CYP2C19*1/*2型、CYP2C19*2/*3型、CYP2C19*3/*3型、CYP2C19*2/*2型及CYP2C19*1/*3型的频率分布:使用PCR荧光法检测时分别为46.6%(166/356)、33.2%(118/356)、2.0%(7/356)、0.8%(3/356)、10.7%(38/356)及6.7%(24/356);采用DNA测序法时分别为46.3%(165/356)、33.4%(119/356)、2.0%(7/356)、0.8%(3/356)、11.0%(39/356)及6.5%(23/356)。两种方法检测CYP2C19基因型具有一致性(P=0.392),且一致性较好(Kappa=0.987);两种方法基因型检测结果一致率为99.2%。结论为保障医疗安全,临床需开展CYP2C19基因型检测;等位基因特异荧光PCR法检测CYP2C19基因型简便可靠。     

b型流感嗜血杆菌D蛋白原核可溶性表达研究

目的 通过原核表达系统可溶性表达重组D蛋白,为多糖结合疫苗的制备提供蛋白载体.方法 将Hib CMCC株基因组DNA中去除信号肽的hpd基因片段插入pET43.1a表达质粒,转化入感受态大肠埃希菌BL21 (DE3),IPTG诱导表达.表达的重组蛋白,经过硫酸铵沉淀和DEAE阴离子交换柱层析纯化后,用Western Blot的方法鉴定其免疫反应原性.结果 表达的重组蛋白以可溶性形式存在,表达量约占菌株总蛋白的44％,经过初步纯化后的重组蛋白可以和Hib抗血清发生特异性反应.结论 成功构建了D蛋白重组表达质粒,并在原核细胞中以可溶性形式表达出具有良好免疫反应原性的D蛋白.     

诺如病毒深圳株SZ2010422全基因组序列测定及分析

目的 分析GⅡ-4型诺如病毒深圳分离株SZ2010422全基因组序列,了解其分子结构特点及进化特性.方法 根据New Orleans参考株全序列设计引物,用RT-PCR分段扩增诺如病毒全基因组,经分子克隆、测序后进行系统进化分析及衣壳区氨基酸位点分析.结果 GⅡ-4型诺如病毒深圳SZ2010422株病毒基因组全长7559 bp,病毒基因组分三个开放阅读框(ORFs),ORF1、ORF2及ORF3长度分别为5100 bp、1623 bp和807 bp,ORF1与ORF2之间有19个核苷酸重叠.深圳株SZ2010422基因组核苷酸序列与参考株GⅡ-4型New Orleans变异株同源性最高,全长同源性为99.3％,ORFI、ORF2、ORF3同源性分别为99.5％、99.2％和98.6％.根据系统进化分析,深圳SZ2010422株属于GⅡ-4 New Orleans变异株.通过对衣壳区氨基酸比对,New Orleans变异株位点变化情况为:aa310N或K→S,aa341D→N,aa359T→S,aa396H→P,aa460H→Y.结论 诺如病毒深圳株SZ2010422属于GⅡ-4型New Orleans变异株.     

MLPA联合遗传连锁分析在假肥大型肌营养不良症产前诊断中的价值

目的 探讨多重连接依赖探针扩增技术(multiplex ligation-dependent probe amplification,MLPA)联合短串联重复序列(short tandem repeat,STR)基因连锁分析用于Duchenne型假肥大型肌营养不良症(Duchenne muscular dystrophy,DMD)产前诊断的价值.方法 通过检测Y染色体性别决定基因(Y chromosome sex-determining gene,SR Y)判断胎儿性别;MLPA检测45个DMD家系中先证者、孕妇以及胎儿Dystrophin基因突变情况,并对家系成员和胎儿进行第45、49、50内含子以及5′和3 ′端STR的连锁分析.结果 45个进行产前诊断的家系中,SRY阳性31例,其中6例为DMD患病胎儿;阴性14例,其中4例为携带者,余未见异常.结论 MLPA能检测胎儿Dystrophin基因外显子突变情况,STR连锁能分析胎儿是否继承母源性风险X染色体,因此,STR连锁分析能发现MLPA技术检测不到的外显子突变胎儿.将两种方法结合起来用于DMD的产前诊断准确性更高.     

合肥首例恙虫病病人血中东方体56kDa外膜蛋白部分基因的扩增及进化分析

采用恙虫病胶体金快速诊断试剂对安徽省合肥市一例不明原因发热病人血清进行检测,从该病人血块中提取DNA为模板,用恙虫病东方体特异性引物,PCR扩增出56 kDa外膜蛋白部分基因,将扩增目的片段克隆至T载体进行测序并进行基因进化分析.结果显示,该病人血清中抗恙虫病东方体总抗体、抗东方体IgG及抗东方体IgM阳性;患者给予强力霉素治疗后迅速退热.采用PCR从病人血标本中扩增出1 320 bp东方体56 kDa外膜蛋白基因片段,将基因片段测序结果在NCBI上做BLAST比对,显示该基因序列与昆明株和内蒙古株同源基因序列完全一致;进化树分析显示该序列与标准株Kuroki位于同一个分支.研究确认该发热病例为合肥市报告的首例恙虫病,其感染的恙虫病东方体为Kuroki型,推测合肥市可能为恙虫病新疫区.     

唐山高职生职业成熟度状况

目的 探讨高职生职业成熟度及其影响因素.方法 采用中国大学生职业成熟度量表对598名唐山理工类高职生进行问卷调查.结果 ①高职生职业成熟度总分均分超出理论中值;②男生职业目标得分高于女生、职业价值得分低于女生(t=3.854,-2.712;P＜0.01);不同年级学生职业目标、职业价值、亲友依赖和职业参照得分存在差异(F=16.202,5.691,2.572,3.161;P＜0.05);不同专业学生职业目标、职业价值、亲友依赖存在差异(F=14.550,5.870,4.474;P＜0.05);独生子女职业自主低于非独生子女(t--3.539,P＜0.001);不同家庭收入学生职业自信存在差异(F=3.194,P＜0.05).结论 唐山高职生职业成熟度水平较高,职业教育有利于提高其职业成熟度水平.     

唐山医学生职业成熟度状况调查

目的 调查唐山医学生职业成熟度水平并分析其影响因素.方法 采用中国大学生职业成熟度量表对276名医学生进行问卷调查,对数据进行独立样本t检验和方差分析.结果 ①唐山医学生职业成熟度平均分超出理论中值;②医学生职业成熟度总分在性别、是否独生、生源地、父母文化程度、家庭收入等方面差异不显著,但在年级(F=3.65,P＜0.05)、是否担任学生干部(t=2.48,P＜0.05)方面的差异显著.结论 唐山医学生职业成熟度水平较高;年级、是否担任学生干部影响其职业成熟度水平.     

无创性产前基因测序技术在染色体非整倍体中的应用

目的探讨高通量并行测序技术在胎儿染色体非整倍体检测中的应用价值。方法2012年10月至2013年4月,生化血清学筛查唐氏高危或高龄孕妇,采用高通量测序技术对胎儿染色体非整倍体进行无创性产前检测,评估患病风险率,提示高危孕妇进行核型分析确诊。结果813例无创检测高危孕妇,13例提示异常高危,异常率为1．59％,其中4例21三体,3例18三体,6例性染色体。核型确诊4例均为21三体,准确度100％;2例18三体;1例47,XXY和1例47,XXX。结论基于高通量测序技术的方法能快速、准确、无创检测唐氏综合征,相对18三体和性染色体检测准确度和稳定性有待优化与提高。     

甲状旁腺素相关蛋白核定位序列及C-末端缺失对幼年小鼠下颌切牙发育影响及机制研究

目的:研究甲状旁腺素相关蛋白(PTHrP)对2周龄小鼠下颌切牙发育的影响及作用机制。方法:分别选取2周龄PTHrP KI小鼠及同窝WT小鼠各20只,对下颌切牙行影像学、组织学、细胞凋亡、RT-PCR检测。结果:PTHrP KI组小鼠下颌切牙长度、切缘厚度、髓腔壁牙本质厚度、I型胶原阳性面积、ALP、OCN、SOD1、SOD2、CAT、GSH-Px的mRNA表达水平均明显低于WT组小鼠(P<0.01),前期牙本质比例、凋亡细胞比例均明显高于WT小鼠(P<0.01)。结论:PTHrP核定位序列和C-末端的缺失导致幼年小鼠下颌切牙细胞凋亡增加、胞外基质生成和矿化减少,导致了小鼠下颌切牙的发育异常。     

基于可视化治疗目标预测正畸软组织变化的研究进展

正畸临床上,改善颜面美观已成为越来越多的患者寻求正畸治疗的主诉,而软组织的形态变化较牙组织和骨组织而言却恰恰又是最不确定、最难以预测的。可视化治疗目标（Visual Treatment Objective, VTO）的实施将使患者对治疗目标有更直观的认识,同时提高治疗过程的可预测性和科学性。本文将从可视化治疗目标出发,从理想目标、实现原理、准确性几个方面对正畸后软组织预测的研究进展做一综述。