补肾益髓方及其拆方对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠脑和脊髓中p-Tau和Beta-tubulin表达的影响

目的:观察补肾益髓(Bu Shen Yi Sui,BSYS)方及其拆方补肾(Bu Shen,BS)和化痰活血(Hua Tan Huo Xue,HTHX)方对实验性自身免疫性脑脊髓炎(Experimental Autoimmune Encephalomyelitis,EAE)小鼠脑和脊髓中p-Tau和Beta-tubulin的作用。方法:C57BL/6小鼠雌性随机分为正常对照(NC)、模型(MO)、醋酸泼尼松(PA)、梓醇(CA)、BSYS、BS和HTHX组。造模当天与造模后第7天于小鼠背部两侧皮下注射抗原,即50μg髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG)35-55、完全弗氏佐剂(CFA)与结核分支杆菌(TB)混合,并在免疫当天和2 d后腹腔注射500 ng的百日咳毒素(PTX)。每天对小鼠进行灌胃,观察其体重及神经功能评分,并于造模第20 d和第40 d分别取脑和脊髓进行病理检测。采用免疫组化法检测p-Tau和beta-tubulin的表达。结果:与MO组比较,BSYS、BS和HTHX组体重与神经功能评分均出现明显上升,HE染色可观察到炎细胞显著减少,核固缩减轻,同时,BSYS、BS和HTHX方均可明显下调p-Tau表达(P0.05,P0.01),上调beta-tubulin蛋白表达(P0.05,P0.01)。结论:BSYS方及其拆方BS和HTHX均对EAE小鼠有神经保护作用,表现在减少体重丢失,降低神经功能评分,减轻炎炎性细胞浸润,减轻轴突损伤及促进其修复,尤以BSYS全方更为显著。     

糖肾宁对自发性2型糖尿病KK-Ay小鼠肾组织HGF表达的影响

目的 探讨糖肾宁对自发性2型糖尿病KK-Ay小鼠肾组织肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)表达的影响。方法 采用自发性2型糖尿病KK-Ay小鼠建立糖尿病肾病模型,根据小鼠随机血糖,采用分层随机法分为模型组、缬沙坦组和糖肾宁组,以C57BL/6J小鼠作为空白组,每组均为20只。药物连续干预12周,测定糖化血红蛋白(hemoglobin A1c, HbA1c)、血清尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、血清肌酐(serum creatinine, SCr),采用Western blotting法检测肾组织HGF蛋白表达水平。结果 与空白组比较,模型组HbA1c、BUN、SCr明显升高(P<0.05),肾组织HGF表达明显降低;与模型组比较,缬沙坦和糖肾宁组HbA1c无明显变化(P>0.05),肾组织HGF表达明显升高,BUN、SCr均有不同程度的降低(P<0.05),缬沙坦和糖肾宁组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 糖肾宁可降低糖尿病小鼠BUN、SCr,升高肾组织HGF蛋白表达量,抑制肾脏纤维化,具有防治糖尿病肾病的作用。     

补肾益髓方促进实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠小胶质细胞向M2极化的作用

目的 观察补肾益髓方（Bu Shen Yi Sui Formula, BSYS）促进实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE）小鼠小胶质细胞向M2极化的作用。方法 80只C57BL/6小鼠采用数字表法随机分为正常对照组、模型、醋酸泼尼松及BSYS组。各造模组小鼠以髓鞘少突胶质细胞糖蛋白（myelin oligodendroglia glycoprotein,MOG）_35-55诱导EAE模型。给予BSYS 方干预后,观察小鼠的神经功能评分。于造模第23天和第40天分别取材,HE染色观察小鼠脑和脊髓病理变化,免疫荧光法测定小胶质细胞M1、M2型标志物CD86、Arg-1表达,Western blotting 法检测过氧化物酶体增生物激活受体-γ（peroxisome proliferator activated receptor-γ, PPAR-γ）的表达,酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）法测定抗炎因子干扰素-β（interferon-β,INF-β）和转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）的含量。结果 与模型组相比,BSYS组小鼠神经功能评分和炎性细胞浸润评分显著降低（P<0.05）;脑及脊髓组织中CD86表达下降（P<0.05）,Arg-1表达升高（P<0.05）,抗炎因子INF-β、TGF-β1的表达显著升高（P<0.05）,PPAR-γ蛋白表达显著升高（P<0.001）。结论 BSYS对EAE小鼠有神经保护作用,其作用可能与上调PPAR-γ表达,促进小胶质细胞向M2极化有关。     

淡豆豉发酵制备过程异黄酮变化规律研究

目的 基于淡豆豉的发酵过程,研究其中大豆异黄酮（SIF）类物质的变化规律。方法 采用紫外-可见分光光度法测定发酵原料中SIF类物质含量。采用高效液相色谱法同时定量原料及不同发酵阶段样品中9个SIF,以乙腈和0.1%醋酸溶液为流动相,检测波长为254 nm。结果 发酵原料马料豆中异黄酮质量分数为（3 244.41±925.57）μg·g^–1,9个SIF中苷类占99.10%,苷元占0.90%,SIF主要以丙二酰基葡萄糖苷、葡萄糖苷形式存在。经过前处理（泡、蒸）,样品中苷类占95.71%,苷元占4.29%,SIF主要以葡萄糖苷形式存在。前酵结束时,样品中苷类占52.11%,苷元占47.89%,SIF主要以葡萄糖苷和苷元形式存在。后酵阶段苷类持续减少,苷元持续增多,后酵第七天时,样品中苷类全部转化为苷元,SIF总量为（1 940.20±29.12）μg·g^–1,相较于紫外-可见分光光度法测定所得马料豆中SIF含量损失了约38%。若继续发酵,则苷元含量减少,且以染料木素减少最为明显。结论 相较于雄黑豆,马料豆更适宜用于发酵淡豆豉。发酵过程中,异黄酮苷类转化为苷元,同时伴随着苷元的破坏分解,故苷元含量表现为先升高后降低,苷类最大程度转化为苷元时,淡豆豉达到“发透”水平。《中华人民共和国药典》2020年版中淡豆豉的含量测定项标准不足以评价优劣,建议结合原料种类及发酵原理进一步优化。     

糖肾宁对高糖诱导的足细胞损伤模型Rho/ROCK通路的影响

目的：基于Rho/ROCK信号通路研究中药糖肾宁对高糖诱导足细胞损伤模型的影响。方法：高糖培养足细胞,以不同药物分组干预足细胞24 h,用罗丹明染色的鬼笔环肽法检测足细胞骨架,细胞免疫荧光检测足细胞标志蛋白Nephrin,Western Blotting检测RhoA、ROCK1、Nephrin蛋白的表达。比较不同药物或药物浓度对高糖诱导足细胞损伤模型的影响。结果：糖肾宁可改善足细胞骨架结构,下调高糖诱导的足细胞损伤模型中异常升高的RhoA和ROCK1蛋白表达,上调Nephrin表达。结论：中药糖肾宁可抑制高糖诱导的足细胞损伤模型RhoA/ROCK1信号通路,减轻足细胞骨架重构,改善足细胞损伤。     

芪卫颗粒对糖尿病肾病大鼠足细胞nephrin表达影响的实验研究

目的探讨芪卫颗粒对糖尿病肾病大鼠肾组织足细胞裂孔隔膜蛋白nephrin表达的影响。方法随机选取10只健康雄性SD大鼠为正常组,其余30只采用腹腔注射大剂量链脲佐菌素(60 mg/kg)诱导糖尿病大鼠模型,将成模大鼠随机分为模型组、西药组以及芪卫颗粒组,将西药组按缬沙坦10 mg/(kg·d)灌胃、芪卫颗粒组按生药10 g/(kg·d)灌胃,连续给药。于给药第24周检测大鼠血肌酐、血尿素氮及内生肌酐清除率;24周后将大鼠处死,采用PAS染色法将肾组织染色,在光镜下观察大鼠肾组织病理改变;采用western blot法检测肾组织足细胞裂孔隔膜蛋白nephrin表达情况。结果与正常组相比,模型组大鼠血肌酐、血尿素氮水平显著升高,内生肌酐清除率及足细胞nephrin表达水平显著下降(P0.05);与模型组相比,各给药组大鼠血肌酐、血尿素氮水平明显下降,内生肌酐清除率及nephrin表达水平明显上调(P0.05)。结论芪卫颗粒能够上调糖尿病肾病大鼠肾组织足细胞nephrin的表达,减轻足细胞损伤,保护肾功能,延缓糖尿病肾病的发生发展。     

补肾益髓方及其拆方对自身免疫性脑脊髓炎小鼠脑和脊髓中BDNF/TrkB的影响

目的:观察补肾益髓(Bu Shen Yi Sui,BSYS)方及其拆方补肾(Bu Shen,BS)和化痰活血(Hua Tan Huo Xue,HTHX)方对实验性自身免疫性脑脊髓炎(Experimental Autoimmune Encephalomyelitis,EAE)小鼠脑和脊髓中脑源性神经营养因子(Brain-derived Neurotrophic Factor,BDNF)与受体Trk B的影响。方法:将EAE造模小鼠于当天和第7天背部皮下注射髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein,MOG)35-55抗原,并在免疫当天和第2天后腹腔注射百日咳毒素(Pertussis toxin,PTX)。每日对小鼠进行不同药物的灌胃,并于造模第20和40天分别取脑和脊髓,采用实时荧光定量RTPCR(qRT-PCR)与Western Blot法检测BDNF和Trk B的表达。结果:BSYS及其拆方BS方与HTHX方均可明显上调EAE小鼠脑和脊髓BDNF和Trk B mRNA与蛋白的表达,与模型组比较,差异均有统计学意义(P0.05或P0.01)。BSYS方作用优于其BS与HTHX方,但差异无统计学意义(P0.05)。结论:BSYS及其拆方促进轴突修复的作用可能与增强BDNF/Trk B表达有关,BSYS全方更有显著趋势。     

糖络宁减轻大鼠背根神经节细胞炎症反应的作用机制研究

目的：以施万细胞外泌体为切入点,观察糖络宁含药血清对体外高糖诱导的大鼠背根神经节细胞炎症反应的影响。方法：采用糖络宁含药血清干预高糖培养的施万细胞,分为正常组、高糖组、糖络宁组,干预48 h后,提取各组细胞上清液中外泌体,将各组外泌体分别干预正常糖和高糖条件培养的大鼠背根神经节细胞,分为无外泌体-正常糖组,正常外泌体-正常糖组、高糖外泌体-正常糖组、糖络宁外泌体-正常糖组、无外泌体-高糖组、正常外泌体高糖组、高糖外泌体-高糖组、糖络宁外泌体-高糖组8个组,48 h后,收集各组细胞并进行相关检测。CCK-8法检测各组细胞活力,酶联免疫法检测各组细胞上清液中炎症介质（TNF-α、IL-6、IL-1β）的蛋白表达情况,实时荧光定量PCR检测各组细胞炎症介质的表达情况。结果：与正常外泌体-正常糖组比较,高糖外泌体-正常糖组细胞活力下降（P<0.05）,炎症介质的基因和蛋白表达均增加（P<0.05）;而与高糖外泌体-正常糖组比较,糖络宁外泌体-正常糖组细胞活力有所升高（P<0.05）,各炎症介质的基因和蛋白表达均有所下调（P<0.05）。高糖条件培养的背根神经节细胞中,不同组外泌体干预表现出类似的作用效果;结论：糖络宁能通过调控施万细胞外泌体减轻大鼠背根神经节细胞炎症反应。     

通心络对早期糖尿病肾病大鼠肾功能及肾组织NO/eNOS表达的影响

目的 观察通心络对高脂饲料联合小剂量链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导的早期糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠血清一氧化氮(nitric oxid,NO)含量及内皮型一氧化氮合酶(e NOS)蛋白表达的影响,探讨通心络防治早期DN大鼠肾小球高滤过的作用机制。方法采用高脂饲料联合小剂量STZ建立DN大鼠模型,将DN大鼠随机分为模型组、缬沙坦组、通心络组各10只,设立10只正常SD大鼠为空白组,通心络组给予通心络超微粉0.4 g/(kg·d),缬沙坦组给予缬沙坦10 mg/(kg·d)干预8周,于治疗4周、8周监测空腹血糖(fasting blood glucose,FBG),尿微量白蛋白排泄率(urinary albumin excretion,UAER)、血肌酐(serum creatinine,SCr)及尿素氮(blood urea nitrogen,BUN),并计算内生肌酐清除率(creatinine clearance rate,Ccr)。于8周末处死大鼠,称量肾重,计算肾重指数,检测肾组织NO含量及e NOS蛋白表达。多组组间差异比较采用单因素方差分析。结果 与空白组比较,模型组大鼠FBG、UAER、肾重及肾重指数、Scr、BUN、Ccr、NO含量显著升高、e NOS蛋白表达显著增强(P<0.05)。与模型组比较,通心络组及缬沙坦组FBG无明显变化(P>0.05),UAER、Scr、BUN、Ccr、肾重及肾重指数显著下降(P<0.05)。通心络组及缬沙坦组肾组织NO含量较模型组显著降低,e NOS蛋白表达较模型组减弱(P<0.05)。结论 通心络可降低早期DN大鼠UAER、Scr、BUN、Ccr、肾重及肾重指数,保护肾功能。通心络抑制肾组织e NOS蛋白表达,减少肾组织NO的含量,从而降低早期DN大鼠肾小球率过滤,可能是通心络改善肾小球早期高滤过的作用机制之一。     

通心络对早期糖尿病肾病大鼠血管内皮生长因子表达的影响

目的观察通心络对早期糖尿病肾病大鼠血管内皮生长因子表达的影响。方法采用高脂饲料+小剂量链脲佐菌素建立2型糖尿病大鼠模型,随机分为空白组10只、模型组10只、缬沙坦组10只(10mg/kg/d)和通心络组10只(0.4mg/kg/d);治疗8周后,比较各组大鼠的空腹血糖、尿白蛋白排泄率、内生肌酐清除率及肾重指数,采用酶联免疫吸附试验测定血浆血管内皮生长因子含量,western blot及RT-PCR测定肾组织中血管内皮生长因子及其受体Flt1的表达。结果模型组大鼠空腹血糖、尿白蛋白排泄率、内生肌酐清除率、肾重指数、血浆血管内皮生长因子含量、肾组织血管内皮生长因子及Flt1表达较空白组有不同程度的升高(P0.05),通心络组除空腹血糖外各指标水平较模型组均显著降低(P0.05)。结论通心络可以有效改善早期糖尿病肾病大鼠的高滤过状态,抑制尿蛋白的排出,其作用机制与抑制血管内皮生长因子及其受体Flt1的过度表达有关。