Cpn0425重组蛋白诱导细胞凋亡和产生前炎症因子的研究

目的研究Cpn0425重组蛋白在体外诱导人单核细胞产生前炎症细胞因子IL-8和IL-1β的水平及诱导细胞凋亡的作用,为进一步探索Cpn感染致病的分子机制提供试验依据。方法 PCR扩增肺炎嗜衣原体Cpn0425蛋白编码基因,构建pGEX6p-2/Cpn0425重组质粒,在E.coli BL21中诱导表达,超声裂解后用谷胱甘肽S-转移酶（glutathione S-transferase,GST）纯化树脂纯化重组蛋白,ToxinEraser纯化柱去除内毒素后用不同浓度的GST-Cpn0425刺激THP-1细胞;ELISA法检测经刺激后的THP-1细胞产生的IL-8和IL-1β水平;以WST-1法检测经GST-Cpn0425处理后THP-1细胞的增生或抑制作用;用AnnexinV-FITC-PI染色法检测细胞凋亡情况。结果GST-Cpn0425能诱导THP-1细胞表达IL-8和IL-1β,当浓度增加到6μg/m（l8μg/ml）时,所产生的IL-8和IL-1β量最大,浓度分别为（716.11±41.26）pg/ml和（32.91±5.49）pg/ml。当6μg/ml GST-Cpn0425分别刺激细胞6h后即可从培养基中检测到IL-8和IL-1β,而刺激24h产生的量则达到高峰。GST-Cpn0425以剂量依赖方式抑制THP-1细胞增殖;GST-Cpn0425处理THP-1细胞24h后能诱导其发生凋亡,其细胞凋亡率最高为（17.76±4.2）%。结论Cpn0425蛋白能诱导THP-1细胞表达并分泌前炎症细胞因子IL-8和IL-1β;既能抑制THP-1细胞增殖,又能诱导其凋亡;因而可能是一个重要的致病因素。     

循环应用低剂量环磷酰胺联合白细胞介素-2对乳腺癌荷瘤小鼠调节性T细胞及生存期影响

目的了解循环应用小剂量环磷酰胺(CTX)联合白细胞介素-2(IL-2)对4T1Balb/c乳腺癌荷瘤小鼠调节性T细胞(Treg)及其生存期影响。方法通过皮下接种4T1乳腺癌细胞建立乳腺癌Balb/c荷瘤小鼠模型;荷瘤小鼠随机分为IL-2组、CTX组、IL-2+CTX组及对照组,在种瘤第10天开始对荷瘤小鼠分别经腹腔按方案给药,部分小鼠在末次给药后4天处死,流式细胞术检测小鼠脾脏中CD4+CD25+/CD4+调节性T细胞数量;余小鼠观察生存期。结果 IL-2组、CTX组、IL-2+CTX组及对照组调节性T细胞比例分别为26.00%±0.98%、11.30%±0.85%、20.15%±1.11%、17.50%±1.13%,组别之间差异均有显著性(P<0.05)。IL-2+CTX组小鼠最长存活57天,对照组小鼠最长存活46天,差异具有显著性(P<0.05)。结论 IL-2联合循环应用CTX将调节性T细胞持续维持在较低水平,从而延长小鼠生存期。     

番茄红素改善缺血再灌注模型大鼠认知功能损伤

目的 检测番茄红素（LP）对大脑中动脉栓塞（MCAO）所致缺血再灌注模型大鼠认知功能的影响.方法 制备MCAO模型大鼠,使用Morris水迷宫及Y迷宫实验检测LP对模型大鼠认知功能的影响.结果 MCAO术后大鼠水迷宫平均游泳速度显著下降,Y迷宫学会逃避电击所需训练次数显著增加.LP低剂量及高剂量大鼠与模型组大鼠比较,水迷宫平均游泳速度显著增加,Y迷宫学会逃避电击所需训练次数显著减少.结论 番茄红素改善缺血再灌注模型大鼠的认知功能损伤.     

体外诱导的骨髓源肝细胞样细胞移植治疗肝功能衰竭的实验研究

目的 探讨骨髓源肝细胞样细胞移植对急性肝功能衰竭的治疗作用.方法 体外诱导大鼠骨髓间质干细胞(BMSCs)分化,以BST-1、清蛋白(ALB)为分子标志,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和流式细胞技术(FCM)检测其分化状态.构建大鼠急性肝功能衰竭模型,随机分为两组:实验组(骨髓源肝细胞样细胞移植)和对照组,结合...     

GSH 耗竭介导5, 7- 二甲氧基黄酮诱导肺癌A 549 细胞凋亡

目的探讨5,7-二甲氧基黄酮（5,7-dimethoxyflavone,DMF）诱导人肺癌A549细胞凋亡作用是否涉及细胞内谷胱甘肽（glutathione,GSH）耗竭。方法体外培养A549细胞,分光光度法测定细胞内GSH含量;流式细胞术检测细胞凋亡率;琼脂糖凝胶电泳观察细胞DNA断裂。结果 DMF以浓度依赖方式诱导A549细胞凋亡率增高（P〈0.05）,并导致细胞DNA断裂。DMF显著降低A549细胞内GSH水平（P〈0.05）,呈浓度依赖性。500μmol·L-1GSH预孵育1h,能有效阻断DMF诱导细胞内GSH耗竭,并减弱DMF触发细胞凋亡作用（P〈0.05）。结论细胞内GSH耗竭是DMF诱导人肺癌A549细胞凋亡作用机制之一。     

肝X受体在乳腺癌组织中的表达及其对MCF-7细胞增殖的影响

目的 研究肝X受体(liver X receptors,LXRs)在乳腺癌中的表达及其对乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响.方法 采用免疫组化法检测LXRs在人乳腺癌组织中的蛋白表达;采用LXR激动剂T0901317处理人乳腺癌MCF-7细胞,流式细胞术检测BrdU标记MCF-7细胞的增殖情况.结果 ①LXRα和LXRβ在乳腺正常组织基本不表达,但LXRα在不同乳腺癌病变(导管原位癌和浸润性导管癌)中表达增高(P＜0.05),在浸润性导管癌尤为明显;LXRβ在不同乳腺癌病变中不表达.②T0901317(10μM)处理明显抑制MCF-7细胞的增殖率(P＜0.05).结论 乳腺癌组织LXRα蛋白表达明显增高,激活LXRα能够显著抑制MCF-7细胞的增殖.     

非小细胞肺癌中VEGF-C，VEGF-D及MMP-12的表达

目的 对非小细胞肺癌(NSCLC)组织中血管内皮细胞生长因子C(VEGF-C)、VEGF-D及基质金属蛋白酶-12(MMP-12)的表达进行检测,探讨这3个因子与NSCLC纵隔淋巴结转移的相关性.方法 采集60例NSCLC组织和癌旁组织,应用免疫组织化学方法检测其VEGF-C,VEGF-D及MMP-12的表达,并分析其与临床病理因素之间的相关性.结果 VEGF-C,VEGF-D及MMP-12蛋白在NSCLC组织中呈高表达(96.7%、93.3%及91.7%),显著高于癌旁组织(P<0.01).VEGF-C,VEGF-D及MMP-12蛋白的表达在有淋巴结转移的病例显著高于没有转移的病例(χ2=13.237,χ2=6.960,χ2=9.870;P=0.000,P=0.008,P=0.002).VEGF-C,VEGF-D及MMP-12蛋白表达与性别、年龄、分化程度以及组织学类型无关(χ2=0.472;P=0.244),但与病理TNM分期(PTNM)有关(P=0.01).在有纵隔淋巴结转移的组织中,VEGF-C,VEGF-D与MMP-12蛋白表达均呈正相关(r＝0.850,P＝0.000;r＝0.787,P＝0.000;r＝0.914,P＝0.000).结论 VEGF-C,VEGF-D及MMP-12蛋白在有纵隔淋巴结转移NSCLC的高表达与其淋巴结转移密切相关,VEGF-C,VEGF-D及MMP-12蛋白有成为NSCLC治疗中新靶位点的潜在可能.     

脂多糖对小鼠巨噬细胞ABCA1表达和胆固醇流出的影响

目的观察脂多糖（LPS）对小鼠腹腔巨噬细胞ATP结合盒转运体A1（ABCA1）表达和胆固醇流出的影响,探讨肝X受体α（LXRα）信号途径的作用。方法60只C57小鼠分成两组,分别注射LPS（1.0 mg/kg）和等量生理盐水。12 h后取腹腔巨噬细胞,实时荧光定量PCR和Western-blot印迹法检测ABCA1和LXRα mRNA和蛋白质表达水平,液体闪烁计数器检测细胞内胆固醇流出。 LXRα激动剂22（R）-羟基胆固醇（22（R）-Hch）预处理小鼠,观察对LPS调节ABCA1表达和胆固醇流出的影响。结果 LPS抑制LXRα和ABCA1的mRNA和蛋白质表达;22（R）-Hch预处理抑制LPS对ABCA1表达和胆固醇流出的下调作用。结论通过抑制TLR4/LXRα信号途径的激活,可以减轻LPS诱导的急性时相反应中的炎症程度,上调ABCA1的表达,促进细胞内胆固醇的流出。     

DADS下调Cathepsin D抑制人胃癌MGC803细胞侵袭转移

目的研究二烯丙基二硫（ DADS ）是否通过下调组织蛋白酶D （ Cathepsin D ）的表达抑制人胃癌MGC803细胞侵袭转移。方法 RT-PCR和Western blot检测DADS及干扰Cath-D对人胃癌MGC803细胞Cath-D mRNA与蛋白表达变化;细胞划痕实验和Transwell实验分别检测DADS及干扰Cath-D对人胃癌MGC803细胞侵袭转移能力的变化。结果 DADS作用人胃癌MGC803细胞24 h后,Cath-D mRNA与蛋白表达水平明显下降（ P〈0.05）,划痕距离明显增宽（P〈0.05）,穿膜细胞数明显减少（P〈0.05）;siRNA干扰Cath-D后,Cath-D mRNA与蛋白的表达水平明显下降（P〈0.05）,划痕距离明显增宽（P〈0.05）,穿膜细胞数明显减少（P〈0.05）。结论DADS能抑制人胃癌MGC803细胞的侵袭转移能力,其机制可能与下调Cath-D 的表达有关。     

鼻咽癌组织EGFR、HSP90A和组织蛋白酶D表达水平及其与肿瘤侵袭转移的关系分析

目的 探讨鼻咽癌组织表皮生长因子受体(EGFR)、热休克蛋白90A(HSP90A)和组织蛋白酶D(cathepsin D)表达水平及其与肿瘤侵袭转移的关系.方法 选取2014年1月至2015年12月南华大学附属第一医院收治的58例鼻咽癌患者(A组),采用免疫组织化学法检测其活检鼻咽癌组织的EGFR、HSP90A和cathepsin D阳性表达率,并检测同期30例鼻中隔偏曲手术患者(B组)正常鼻甲黏膜组织的EGFR、HSP90A和cathepsin D阳性表达率.统计A组患者的肿瘤T分期、N分期及淋巴管密度(LVD).比较A组鼻咽癌组织EGFR、HSP90A和cathepsin D表达阳性与阴性患者的T分期、N分期及LVD,并分析鼻咽癌组织EGFR、HSP90A和cathepsin D表达与T分期、N分期及LVD的关系.结果 A组EGFR、HSP90A和cathepsin D阳性表达率分别86.21％、82.76％和87.93％,均高于B组的30.00％、26.67％和33.33％ (P＜0.05).A组EGFR、HSP90A、cathepsin D蛋白表达阳性患者T3～T4分期患者百分比、N2～N3分期患者百分比及LVD均高于相应蛋白表达阴性患者,差异均有统计学意义(P＜0.05).Spearman相关分析结果显示,鼻咽癌组织EG-FR、HSP90A和cathepsin D阳性表达率与其T分期、N分期及LVD均呈正相关(EGFR:r=0.844、0.795、0.785;HSP90A:r=0.862、0.825、0.822;cathepsin D:r=0.842、0.815、0.863,P＜0.05).结论 鼻咽癌组织EGFR、HSP90A和cathepsin D表达与肿瘤侵袭转移均密切相关,可能作为评估鼻咽癌侵袭转移的参考指标.