基于双能X线吸收测量法的三种胫骨软骨下骨骨密度测量方法的信度与效度分析

目的 观察基于双能X线吸收测量法(DXA)的三种胫骨近端软骨下骨骨密度检测方法的信度与效度。方法 招募28名健康女性,利用双能X线骨密度仪扫描膝关节;由2名研究者分别应用三种不同测量方法选取ROI进行测量分析,通过计算组内相关系数值(ICC),评价各方法的复测信度与测量者间信度,利用t检验评价区分效度。结果 三种方法均具有较好的复测信度(ICC 0.833~0.998)与测量者间信度(ICC 0.905~0.997),且对低年龄者和高年龄者具有较好的区分效度(P<0.05)。结论 利用双能X线骨密度仪研究膝关节软骨下骨具有可行性;本研究分析的三种测量方法可有选择地用于临床研究。     

体外IL-β诱导股骨头建立软骨退变模型

目的:IL-1β诱导体外培养大鼠的股骨头致其快速退变,为药物筛选和治疗提供可靠的软骨退变模型。方法:取2周龄SD幼鼠的股骨头,左右股骨头对应为对照组和实验组,分别培养于正常培养基和诱导培养基中(其中含50 ng/ml的IL-1β),每2 d换液1次,至第3天取出股骨头,固定于4%多聚甲醛,经过脱钙和脱水、石蜡包埋、切片后经甲苯胺蓝和臧红-固绿染色及细胞免疫荧光检测软骨标志基因Ⅱ型胶原和Sox9以及软骨退变相关基因MMP13和ADAMTS5等基因的原位表达。结果:实验组的股骨头外缘,在培养3 d后甲苯胺蓝染色明显淡染,臧红-固绿染色阳性,提示软骨退变。免疫荧光显示Ⅱ型胶原和Sox9表达减弱,MMP13和ADAMTS5表达增强。结论:IL-1β培养大鼠股骨头3 d 即诱导其退变,建立软骨组织体外培养诱导其退变的模型。     

不同胶原酶消化对原代成骨细胞获得率及活性的比较

目的:比较Ⅰ、Ⅱ型胶原酶对新生大鼠颅盖骨的消化效果,选择效率较高的胶原酶,为日后从细胞水平研究中药治疗骨质疏松症的机制提供大量种子细胞.方法:新生24 h SD大鼠10只,雌雄不限,脱颈处死后取出颅盖骨,剪成约1 mm×1 mm的碎片,采用胰酶预消化15 min后将骨片按重量平分成两等份,随机分为Ⅰ型组、Ⅱ型组,分别用0.1％Ⅰ型、0.1％Ⅱ型胶原酶37℃消化1h×2次,所得细胞置于5％CO2培养箱中37 ℃恒温培养.原代细胞分别于培养0h、72 h时采用血球计数板进行计数,第2代细胞于培养48 h后采用NBT/BCIP染色液进行染色,并通过对硝基苯磷酸盐法(PNPP)进行ALP定量检测.结果:镜下观察所获得的细胞形态不规则,细胞计数显示Ⅰ型组细胞数量大于Ⅱ型组;ALP染色为阳性;PNPP法测得两组吸光度均值分别为0.427和0.262,Ⅰ型组显著高于Ⅱ型组,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:两种胶原酶均适用于成骨细胞的原代消化,但采用Ⅰ型胶原酶获得的细胞数量更多、活性更好,可为日后骨质疏松症的机制研究提供优质的种子细胞.