梓醇上调NGF、BDNF及mRNA表达伴随缺血性脑卒中大鼠神经功能恢复

目的:观察梓醇对缺血性脑卒中大鼠恢复早期神经功能恢复及缺血周围区大脑皮质神经生长因子(NGF)和脑源性神经营养因子(BDNF)表达的影响。方法:建立大鼠大脑中动脉永久性局灶性缺血模型,行为学观察各组大鼠姿势反射、横木行走和抓握力量;HE染色观察大脑皮质神经元的病理改变;免疫组织化学染色和Realtime PCR检测缺大脑皮质NGF、BDNF蛋白及其mRNA基因表达。结果:假手术组无明显神经功能障碍;与模型组比较,梓醇30、60mg/kg给药组能明显改善缺血性脑卒中大鼠姿势反射,增强横木行走的能力和抓握力量(P<0.05,P<0.01);明显增加完整神经细胞的数量(P<0.01);且梓醇30、60mg/kg给药组NGF、BDNF及mRNA的表达比模型组明显上调(P<0.05,P<0.01)。结论:梓醇可上调缺血性脑卒中大鼠大脑皮质NGF、BDNF及mRNA基因表达,促进神经元存活、修复再生,加速其神经功能恢复。     

次乌头碱对乳大鼠原代培养心肌细胞的毒性作用

目的探讨次乌头碱(HA)对心肌细胞的毒性作用。方法制备乳大鼠原代心肌细胞,用锥虫蓝染色法检测心肌细胞存活率,用小鼠抗大鼠α横纹肌肌动蛋白和兔抗大鼠纤连蛋白多克隆抗体免疫化学染色法鉴定心肌细胞。制备的原代细胞培养3～4d,分别加入HA0,3,6,30,60和120μmol·L-1培养5,15,30和60min,记录每组细胞搏动频率;以HA体外引起心肌细胞搏动消失的浓度及作用时间为依据,将心肌细胞分为培养基对照,二甲亚砜(DMSO)对照,HA30,60和120μmol·L-1组,分别连续培养5,15,30和60min,比色法检测乳酸脱氢酶(LDH)漏出率,倒置显微镜下观察细胞形态的变化。结果与HA0μmol·L-1组比较,HA30μmol·L-1与心肌细胞作用5,15,30和60min时细胞搏动频率增加,由40±26,42±27,38±19和(20±10)min-1分别增加到114±27,98±32,100±32和(49±13)min-1(n=12,P<0.01);HA120μmol·L-1立即导致心肌细胞停搏。不同浓度的HA随着作用时间的延长,导致LDH漏出率不同程度的增加,其中HA30,60和120μmol·L-1作用60min时细胞LDH漏出率分别为(29±8)%,(42±10)%和(57±9)%与同一时间点DMSO组比较有明显差异(P<0.01)。倒置显微镜观察发现,随着HA浓度的增加和作用时间的延长,心肌细胞有死亡现象。结论 HA对心肌细胞有毒性作用,主要表现为细胞搏动频率加快,细胞膜稳定性破坏;HA120μmol·L-1与心肌细胞作用超过120min会引起少量心肌细胞死亡。     

Non-serine-phosphorylated tyrosine hydroxylase expressing neurons are present in mouse striatum,accumbens and cortex that increase in number following dopaminergic denervation

Neurons partially expressing individual enzymes of dopamine (DA) biosynthesis, e.g. tyrosine hydroxylase (TH) or aromatic acid decarboxylase, are found in different areas of the central nervous system, continuously or transiently in normal and pathological conditions. This current study analyzed if TH neurons exist in target areas of ventral midbrain dopaminergic neurons and how they react to dopaminergic denervation.High power analysis of brain tissue sections revealed that TH-immunopositive neurons were present in striatum, accumbens and cortex - and several other brain areas - of healthy adult mice. DAergic denervation induced by stereotaxic injection of 6-hydroxydopamine into the medial forebrain bundle increased the number of TH expressing neurons in the striatum, accumbens and the cortex, up 40 d later. These TH neurons were not stained by specific antibodies recognizing TH phosphorylated at serine residues 19, 31 and 40, dopamine transporter and vesicular monoamine transporter type 2, but most of them expressed dopamine and cyclic AMP-regulated phosphoprotein 32 kDa.Thus, mouse striatum, accumbens and cortex contain neurons which express TH with low activity, and their number increases following dopamine depletion.     

Acute and sub-chronic toxicity studies of the extract of Thunberg Fritillary Bulb

The aim of this study was to investigate the acute and sub-chronic toxicity of extract of Thunberg Fritillary Bulb. For the acute toxicity tests, graded doses of the extract were administered orally to mice. The animals were observed for toxic symptoms and mortality daily for 14 days. In the sub-chronic toxicity study, rats were orally administered the extract at doses of 1 and 3 mg/kg body weight (BW) for 26 weeks. After 26 weeks, the rats were sacrificed for hematological, biochemical and histological examination. In the acute toxicity tests, the estimated median lethal dosage (LD₅₀) was 52.2 mg/kg body weight in the mice. In the sub-chronic toxicity tests, a dose of 1 mg/kg body weight presented no toxicity. Above the 1 mg/kg dose, the main adverse signs observed in male rats were body or head tremor and spontaneous motor activity reduction. There were no other significant changes observed in hematology, blood biochemistry, organ weight and organ histology. The overall findings of this study indicate that the extract of Thunberg Fritillary Bulb is non-toxic up to 1 mg/kg body weight, which can be considered a safe application dose.     

小儿止咳颗粒对哮喘大鼠气道高反应性和炎症的抑制作用

目的:探讨小儿止咳颗粒对哮喘大鼠气道高反应性的改善作用及其机制。方法:大鼠第0,8天sc及ip给予1mL含卵蛋白(OVA)100 mg的氢氧化铝凝胶和1 mL含卡介苗3 mg的生理盐水致敏,第15天开始以OVA攻击制备哮喘模型,同时ig给予小儿止咳颗粒高、中、低剂量(15.7,7.85,3.925 g·kg-1)。第22天测定大鼠气道阻力、血清中高迁移率族蛋白B-1(HMGB-1),肺匀浆中免疫球蛋白E(IgE),白介素-4(IL-4),白介素-13(IL-13)的含量。结果:小儿止咳颗粒高、中、低剂量均可明显抑制引喘后20,30,40,60 s大鼠气道所需正压力的上升(与模型组相比较P<0.01);小儿止咳颗粒各剂量组可明显抑制血清HMGB-1及肺匀浆IgE含量的增高(P<0.05,P<0.01);小儿止咳颗粒高、中剂量可以明显抑制肺匀浆IL-13,IL-4含量的增高(P<0.01)。结论:小儿止咳颗粒可以通过抑制炎症介质、细胞因子含量的增高降低哮喘大鼠的气道高反应性,从而治疗小儿上呼吸道感染后咳嗽。     

大鼠脑缺血不同时间脑能量代谢的变化研究

目的:研究大鼠脑缺血不同时间脑能量代谢的变化。方法:复制大鼠永久性局灶性大脑中动脉缺血模型,测定缺血6,24,72,168,336 h脑组织乳酸(Lac)和丙酮酸(Pyru)的含量,Na+,K+-ATPase和Ca2+,Mg2+-ATPase活性。结果:在各个不同时间点,各检测指标与假手术组比较均具有显著性,P<0.05,P<0.01。结论:在缺血336 h内观测脑组织中能量代谢相关指标,可以用于评价药物对脑缺血的保护作用。     

溃疡性结肠炎患者血清及结肠组织α1-抗胰蛋白酶水平与肺功能损害相关性研究

目的观察溃疡性结肠炎（ulcerativecolitis,UC）患者血清及结肠组织α1-胰蛋白酶（仅1-anti-trypsin,A1AT）水平与肺损害的相关性,探讨UC肺损害的发生机制。方法将90例确诊为UC的患者,按病变范围、活动度、病情分期及病程进行分组,比较不同病变范围、活动度、病情分期及病程的UC患者血清A1AT水平;选择30名健康志愿者作为对照组,检测UC组及对照组血清肝、肾功能水平及肺功能,并比较两组间肝、肾功能,肺功能及血清A1AT水平的差异。分析UC患者各肺功能指标与血清A1AT的相关性。采用免疫组化法检测20例UC患者及10名健康志愿者结肠组织A1AT含量。结果90例UC患者中,伴有肺功能异常者54例（60．0％）,伴有其他UC肠外表现者24例（26．7％）。与对照组比较,UC组血清A1AT水平明显下降（P〈0．05）;病变范围为远端结肠及广泛结肠者血清A1AT水平较病变范围局限在直肠者明显下降（P〈0．05）;病程〉15年者血清A1AT水平较病程〈5年者明显下降（P〈0．05）;病变范围为远端结肠及广泛结肠者肺功能通气指标中肺活量（vitalcapacity,VC）;用力肺活量（forcedvitalcapacity,FVC）;一秒量（forcedexpiratoryvolumeinonesecond,FEVll0）,肺容量指标中肺总量（totallungcapacity,TLC）、功能残气量（functionresidualvolume,FRV）及肺弥散指标中一氧化碳弥散量（diffusioncapacityforcarbonmonox．ideoflung,DLCO）较病变范围局限在直肠患者均明显下降（P〈0．05）;UC患者病程与用力肺活量FVC呈直线负相关（r=-0．23,P=0．018）;UC患者血清A1AT水平与峰流速峰流速（peakexpiratoryflow,PEF）呈正相关（r=0．22,P=0．03）。UC患者结肠A1AT水平明显低于对照组（P〈0．05）。重度UC患者结肠A1AT水平较轻中度患者下降（P〈0．05）。UC患者结肠A1AT水平高于远端结肠炎及广泛结肠炎患者（P〈O．05）。结论UC患者肺功能异常的发病率高于UC其他肠外表现,肺功能检测有助于提前筛查UC肺损害。UC患者血清及结肠组织中A1AT水平均明显下降,提示UC患者的肺功能损害主要表现为与A1AT水平下降相关的慢性气道炎症、气道重塑及阻塞性改变。     

浙贝母总生物碱对人肺腺癌A549/顺铂细胞耐药性的逆转作用(英文)

目的研究浙贝母总生物碱(TAF)对人肺腺癌A549/顺铂(DDP)细胞DDP耐药性的逆转作用。方法①离体实验:采用MTT法观察TAF(12.5～200mg·L-1)对A549和A549/DDP细胞的毒性作用;采用MTT法检测TAF 9mg·L-1对A549/DDP细胞耐药的逆转作用,同时设环孢菌素A(Cys A)1mg·L-1和汉防己甲素(Tet)1mg·L-1为阳性对照;实时荧光定量PCR检测A549/DDP细胞多药耐药基因1(MDR1)mRNA相对表达;Western蛋白免疫印迹法检测A549/DDP细胞P-糖蛋白(P-gp)相对表达。②在体实验:制备BALB/c裸鼠A549/DDP移植瘤模型,随机分为模型对照、DDP 5mg·kg-1、TAF2 mg·kg-1、DDP 5 mg·kg-1+TAF 0.5,1和2 mg·kg-1联用组,每两天ip给予DDP,每天ig给予TAF,持续13d,检测移植瘤体积和质量的变化。结果 TAF作用72 h抑制A549和A549/DDP细胞存活的IC50值分别为141±5和(298±22)mg·L-1;IC10值分别为15.3±1.9和(9.0±1.2)mg·L-1。DDP 0.01～100mg·L-1与TAF 9 mg·L-1合用后,DDP抑制A549/DDP细胞存活的IC50值由(14.06±3.72)mg·L-1降至(0.79±0.14)mg·L-1,抑制A549细胞存活的IC50值无明显变化;TAF对A549/DDP细胞DDP耐药性的逆转倍数为17.80倍,高于Cys A(10.16倍)和Tet(14.05倍)。TAF可明显降低A549/DDP细胞MDR1 mRNA及P-gp相对表达(P<0.01)。DDP 5mg·kg-1体内抑瘤率为49.9%,与TAF 2mg·kg-1合用后抑瘤率增至67.4%(P<0.01)。结论 TAF在体内外均可逆转A549/DDP细胞对DDP的耐药性,可降低MDR1 mRNA和P-gp蛋白表达。     

气滞血瘀证大鼠舌部基因表达谱变化初探

目的采用基因芯片技术研究气滞血瘀证模型大鼠舌部全基因表达谱的变化以及差异基因涉及的生物过程和通路,以期为研究血瘀证相关理论和药物治疗提供科学依据。方法采用高脂饲料复合慢性不可预知刺激复制气滞血瘀动物模型,利用基因芯片技术分析正常大鼠与模型大鼠舌中全基因表达谱的变化以及所涉及通路。结果气滞血瘀证大鼠与正常大鼠比较,结果显示差异表达基因有277个,其中上调基因68个,下调基因209个。GO和Pathway分析结果显示气滞血瘀证分别与炎症、脂代谢、免疫反应等生物过程以及补体与凝血级联通路、PPAR信号通路、细胞色素P450异物代谢通路等7条通路的改变有关。结论 CYP450以及补体与凝血级联通路、PPAR信号通路中的差异基因可能涉及血瘀证的发病机制,为血瘀证以及相关药物的研究提供依据。     

补肾活血方对沙鼠增龄过程中腰椎软骨终板钙化干预作用的初步研究

目的:探讨补肾活血方对腰椎软骨终板钙化的干预作用。方法:选取30只2月龄和7月龄健康雄性长爪沙鼠,分别喂养至2月龄(50~60 g)和12月龄(60~80 g)建立老龄沙鼠模型,采用随机数字表方法分为5组:正常组(n=6),模型组(n=6,给予生理盐水4 ml/kg,灌胃30 d),补肾活血方低剂量组(n=6,给予补肾活血方1.9×10-3 ml/g灌胃30 d),补肾活血方中剂量组(n=6,给予补肾活血方3.8×10-3 ml/g灌胃30 d),补肾活血方高剂量组(n=6,给予补肾活血方7.6×10-3ml/g灌胃30 d),干预组从7月龄开始连续给药1.36 g,30 d。正常组2月龄及其他组12个月龄时处死动物,取腰椎间盘组织,HE染色体视法分析腰椎体软骨终板组织形态学、血管芽面积、非钙化/钙化层比值,兔单克隆抗体免疫组化染色方法测定软骨终板X型胶原、BMPs的表达。结果:软骨终板血管芽相对面积测量显示,与模型组相比,补肾活血方中剂量组,正常组增高(P0.05),大、小剂量组虽各有不同程度的增加,但差异均无统计学意义(P0.05);软骨终板非钙化层/钙化层厚度比值测量显示,与模型组相比,补肾活血方中剂量、正常组增加,差异具有统计学意义(P0.05),而补肾活血方大、小剂量组虽各有不同程度的增加,但差异均无统计学意义(P0.05)。免疫组化染色软骨终板X型胶原的表达与模型组相比,正常组、补肾活血方低、中、高剂量组均降低,差异具有统计学意义(P0.01);BMPs的表达,与模型组相比,正常组、补肾活血方中剂量组升高,差异具有统计学意义(P0.01),大、小剂量组虽各有不同程度的升高,但差异均无统计学意义(P0.05)。结论:补肾活血方中剂量可延缓增龄过程中椎间盘软骨终板钙化,提示可作为早期椎间盘退变的预防用药。