大鼠血浆中的新藤黄酸HPLC测定及其药代动力学研究

目的建立测定大鼠血浆中新藤黄酸浓度的HPLC方法,并用于新藤黄酸在大鼠体内的药代动力学研究。方法以藤黄酸为内标,建立大鼠血浆中新藤黄酸的HPLC测定方法。采用该方法测定大鼠单剂量静脉注射1、2、4 mg.kg-1新藤黄酸后不同时间点大鼠血浆中的新藤黄酸的浓度,对其血药浓度-时间采用BABP 3.0软件拟合,计算药动学参数。结果血浆中新藤黄酸在0.07～18.0 mg.L-1浓度范围,其线性关系良好(r=0.999),定量下限为0.07 mg.L-1,提取回收率分别为大于70%,其日内、日间RSD均小于10%。新藤黄酸以1、2和4 mg.kg-1静脉给药后,在大鼠体内的T12分别为(43.61±0.61)、(46.07±2.11)和(46.73±1.14)min,AUC0-t分别为(158.52±6.27)、(211.13±9.33)和(361.37±14.97)min.mg.L-1。结论所建立的HPLC法样品前处理简便、操作简便、能满足新藤黄酸在大鼠体内的药代动力学研究。     

天麻素通过抑制细胞凋亡保护谷氨酸诱导的PC12细胞损伤

目的：研究天麻素（Gastrodin）对谷氨酸诱导的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞损伤的影响及可能机制。方法：以谷氨酸建立体外培养PC12细胞损伤模型并采用MTT比色法测定细胞存活率;AO/EB双染法经荧光显微镜观察细胞凋亡形态;采用流式细胞术检测细胞内活性氧含量以及Annexin V/PI染色后的细胞凋亡率;Western blot法检测细胞内Caspase-3蛋白表达。结果：天麻素可明显抑制谷氨酸诱导的PC12细胞凋亡,在0.1～10μmol/L剂量呈一定的量效关系;同时,天麻素可明显抑制谷氨酸引起的活性氧（ROS）的累积,降低谷氨酸诱导的活性Caspase-3蛋白的表达,降低PC12细胞的凋亡率,在0.1～10μmol/L剂量呈量效相关性。结论：在一定剂量范围内,天麻素对谷氨酸损伤的PC12细胞具有保护作用,其机制可能与减少ROS的生成,阻止氧化损伤的发生,抑制Caspase-3途径依赖的细胞凋亡相关。     

脑络欣通胶囊的质量控制研究

目的建立脑络欣通胶囊的质量控制方法。方法采用TLC法对制剂中主要药材当归、红花进行定性鉴别;采用HPLC法对黄芪中的黄芪甲苷,三七中的三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1进行定量测定。结果薄层色谱斑点清晰,在与对照品或对照药材相应的位置上显相同颜色的斑点,阴性对照无干扰;黄芪甲苷在4.0²0.0μg呈良好的线性关系,r=0.999 2;三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1分别在0.420.0μg呈良好的线性关系,r=0.999 2;三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1分别在0.4².0、0.082.0、0.08⁸.0、0.088.0、0.08⁸.0μg范围内线性关系良好,r分别为0.993 0、0.992 0、0.998 7。结论所建立的方法简单准确、专属性强、重现性好,能够更有效地控制该制剂的质量。     

补肾生髓方对脑缺血再灌注大鼠神经—内分泌功能的影响

目的探讨补肾生髓方治疗缺血性中风的可能机制。方法雄性SD大鼠采用惊恐加房劳的复合伤肾法制造肾精亏虚模型,联合大脑中动脉线栓法改良制作左侧局灶性脑缺血再灌注大鼠模型。将造模成功的24只大鼠随机分为模型组、脑络欣通组和补肾生髓方组,每组8只。另随机取正常大鼠8只为正常组。脑络欣通组和补肾生髓方组分别按每天8.54g/kg、10.25g/kg灌胃相应药物,造模后每天灌胃2次;模型组予以等量的生理盐水灌胃,各组均持续2周。正常组不做处理。检测各组大鼠促肾上腺皮质激素(ACTH)、促甲状腺素(TSH)、红细胞生成素(EPO)、血钙及血磷值。结果与正常组比较,模型组大鼠血浆ACTH和血清TSH、EPO、血钙值显著降低,而血磷值升高(P0.05或P0.01)。与模型组比较,脑络欣通组血磷值降低,补肾生髓方组血清TSH值升高、血磷值降低(P0.05)。结论补肾生髓方药能升高肾精不足型脑缺血再灌注大鼠血清TSH值、降低血磷,具有调节神经—内分泌的作用。     

牡丹籽油降血脂、降血糖作用的实验研究

目的研究牡丹籽油对高脂血症大鼠的作用,并观察对糖尿病小鼠及小鼠糖耐量的影响。方法高脂饲料喂养SD雄性大鼠建立高脂血症模型,造模同时连续灌胃给药30 d,检测各组大鼠血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的水平;尾静脉注射四氧嘧啶诱导高血糖小鼠模型,连续灌胃给药30 d,检测小鼠血糖值;正常小鼠连续给药30 d后,灌胃葡萄糖溶液(2.5 g·kg-1),于给糖前及给糖后30、60、120 min分别检测血糖含量变化。结果高脂血症大鼠在灌胃给予牡丹籽油30 d后,低剂量组TC水平显著降低,高剂量组TG水平明显降低,且HDL-C值显著升高;牡丹籽油各剂量组均显著降低糖尿病小鼠的血糖值,且呈现一定的剂量依赖性;糖耐量实验发现,牡丹籽油可降低正常小鼠的血糖水平,在给糖30 min时的降糖作用最为明显。结论牡丹籽油可降低高脂血症大鼠的血脂水平,同时具有降低糖尿病小鼠血糖、改善正常小鼠糖耐量的作用。     

孟河医家费伯雄对中风病因病机的认识

孟河医家是中国一大地方区域性医学流派，历时三百余年，名扬海内外，以费、马、巢、丁四家为代表，均主张和法缓治，用药轻灵。其中费家为孟河医家的开创和形成起到重要的作用，尤以费伯雄为最。《清史稿》有云：“清末江南诸医，以伯雄最著”。费伯雄主张和缓醇正，师古不泥，白创新方，擅治虚劳等慢性病。查阅文献中各家论述多从费伯雄学术思想、临床医案、治法方药、学术传承、流派影响等各方面来阐述，而在病因病机上少有精辟而系统的研究。孟河医派费伯雄对各种病证的病因病机多有独到见解，对中医病因病机理论的发展也有重要的贡献。     

滋阴潜阳方对肾性高血压大鼠外周血淋巴细胞AT1受体介导的IP3,DAG的影响

目的:探讨高血压神经-内分泌-免疫调节的内在机制和滋阴潜阳方作用的可能环节。方法:SD大鼠120只,复制二肾一夹高血压大鼠模型(2K1C-RHR),假手术组大鼠右肾动脉只分离不狭窄;取模型成功大鼠分为模型组、滋阴潜阳方高、中、低剂量组(32,16,8g·kg-1)、氯沙坦钾组(0.005g·kg-1)及天麻钩藤颗粒组(1.5g·kg-1),连续ig给药4周。采用无创血压测量仪观察其对血压的影响,放射性免疫法检测血浆血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)含量变化,Westernbloting法测定各组大鼠外周血淋巴细胞血管紧张素1型受体(AT1R)和兔抗磷酸化蛋白激酶C(p-PKC)的表达水平变化,ELISA法测定各组大鼠外周血淋巴细胞内三磷酸肌醇(IP3),二酰甘油(DAG)以及血清中白细胞介素-4(IL-4),白细胞介素-6(IL-6)含量变化。结果:与假手术组比较,模型组大鼠血压明显升高,大鼠血浆AngⅡ水平明显升高,大鼠外周血淋巴细胞AT1R,p-PKC蛋白的表达明显升高,外周血淋巴细胞内IP3,DAG含量明显升高,血清中IL-4,IL-6的含量明显升高,均具有统计学差异(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,滋阴潜阳方高、中、低剂量组均能显著降低模型大鼠血压水平(P<0.01),滋阴潜阳方中、低剂量组能够降低大鼠血浆AngⅡ水平(P<0.05),高剂量组能够降低肾性高血压大鼠外周血淋巴细胞AT1R,p-PKC蛋白的表达水平(P<0.01,P<0.05),同时高剂量组能够明显降低外周血淋巴细胞内IP3,DAG(P<0.01,P<0.01)以及血清中IL-4,IL-6的含量(P<0.05,P<0.01)。结论:肾性高血压病的发病机制可能与外周血淋巴细胞AT1R的过度表达,以及胞内磷脂酰肌醇信号通路的激活有关;滋阴潜阳方可以从多环节抑制信号通路的激活,对高血压的神经、内分泌、免疫功能发挥整体调节作用。     

两种中药复方对局灶性脑缺血再灌注大鼠额顶叶皮质LRP5和β—Catenin表达的影响

目的：观察补肾生髓方和益气活血方对局灶性脑缺血再灌注大鼠额顸叶皮质LRP5和β-Catenin蛋白表达的影响。方法：大鼠随机分为假手术组、模型组、补肾生髓方组、益气活血方组。线栓法阻塞大鼠左侧大脑中动脉,制作局灶性脑缺血再灌注大鼠模型,脑缺血2h再灌注2周。治疗组连续给药2周,采用免疫组化EnVision两步法检测额顶叶皮质LRP5和β-Catenin表达的阳性面积和平均吸收光密度值。结果：皮质LRP5的平均吸收光密度值（A值）,模型组与假手术组之间无明显差异,模型组与补肾组差异显著（P〈0．05）,模型组与益气组差异不明显,补肾组与益气组之间有明显差异（P〈0．01）;皮质LRP5的阳性面积值（Area值）,模型组与假手术组差异不显著,与各治疗组之间有明显差异（P〈0．05）,补肾组与益气组之间无明显差异。皮质β-Catenin的A值,模型组与假手术组之间有明显差异（P〈0．05）,益气组、补肾组与模型组之间无明显差异,补肾组与益气组之间无明显差异;皮质β-Catenin的Area值,模型组与假手术组之间无明显差异,与各治疗组之间差异具有显著性（P〈0．05）,补肾组与益气组之间无明显差异。结论：益气活血方和补肾生髓方能通过降低额顶叶皮质LRP5和升高β-Catenin蛋白表达,调节Wnt信号转导通路,促进脑缺血再灌注后内源性神经干细胞的增殖分化。     

两种中药复方对局灶性脑缺血再灌注大鼠额顶叶皮质LRP5和β-Catenin表达的影响

目的:观察补肾生髓方和益气活血方对局灶性脑缺血再灌注大鼠额顶叶皮质LRP5和β-Catenin蛋白表达的影响。方法:大鼠随机分为假手术组、模型组、补肾生髓方组、益气活血方组。线栓法阻塞大鼠左侧大脑中动脉,制作局灶性脑缺血再灌注大鼠模型,脑缺血2?h再灌注2周。治疗组连续给药2周,采用免疫组化EnVision两步法检测额顶叶皮质LRP5和β-Catenin表达的阳性面积和平均吸收光密度值。结果:皮质LRP5的平均吸收光密度值(A值),模型组与假手术组之间无明显差异,模型组与补肾组差异显著(P0.05),模型组与益气组差异不明显,补肾组与益气组之间有明显差异(P0.01);皮质LRP5的阳性面积值(Area值),模型组与假手术组差异不显著,与各治疗组之间有明显差异(P0.05),补肾组与益气组之间无明显差异。皮质β-Catenin的A值,模型组与假手术组之间有明显差异(P0.05),益气组、补肾组与模型组之间无明显差异,补肾组与益气组之间无明显差异;皮质β-Catenin的Area值,模型组与假手术组之间无明显差异,与各治疗组之间差异具有显著性(P0.05),补肾组与益气组之间无明显差异。结论:益气活血方和补肾生髓方能通过降低额顶叶皮质LRP5和升高β-Catenin蛋白表达,调节Wnt信号转导通路,促进脑缺血再灌注后内源性神经干细胞的增殖分化。     

新藤黄酸通过内质网应激诱导人结肠癌HCT116细胞凋亡的研究

目的研究新藤黄酸(gambogenic acid,GNA)诱导人结肠癌HCT116细胞凋亡的机制。方法采用不同浓度的GNA作用细胞24h,对照组是相同浓度GNA加内质网应激抑制剂4-苯基丁酸(4-phenylbutyric acid,4-PBA)共同作用HCT116细胞24h。采用甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)染色测定两组细胞增殖抑制率的差异,采用吖啶橙(acridine orange,AO)和溴化乙锭(ethidium bromide,EB)染色观察细胞的形态学变化,采用膜联蛋白Ⅴ(AnnexinⅤ,AV)-异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)/碘化丙碇(propidium iodide,PI)双重染色检测细胞凋亡率。结果内质网应激抑制剂4-PBA可以缓解GNA对HCT116细胞增殖的抑制作用;AO/EB染色后荧光显微镜观察发现GNA作用的细胞具有凋亡特征;流式细胞仪检测显示4-PBA可降低HCT116细胞的凋亡率。结论 GNA能抑制人结肠癌细胞HCT116增殖,诱导细胞凋亡,其诱导细胞凋亡的作用可能与内质网应激途径有关。