乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体杂交癌细胞系的建立及抗体的鉴定

对乙肝病毒(HBV)各抗原成分的单克隆抗体(McAb)已经研制和应用,其中以对表面抗原(HBsAg)特异的McAb建株较多。单克隆抗HBs是对HBsAg复杂的抗原性进行精细分析的有力工具,并有助于对HBsAg的免疫检测。     

抗-HBs单克隆抗体细胞系与酶联免疫吸附试验“一步法”检测HBsAg

本文利用杂交瘤技术,经脾内直接注射免疫BALB/c小鼠,与骨髓瘤细胞(Sp 2/0)进行融合,建立了6株抗HEsMcAb,其中5株已能稳定地分泌单克隆抗体,并已得到腹水;5据中4株为抗a,1株为抗d,利用其中2株分别作为包被、酶标抗体,建立了酶联免疫吸附试验(ELISA)“一步法”检测HBsAg技术,经验证,该方法简便、快速、灵敏、特异、稳定。     

丙型肝炎病毒HCV E1区基因的真核表达载体构建及序列分析

目的:建立丙型肝炎病毒包膜区基因的真核表达载体,并通过对其序列分析阐明其作为基因接种的可能性.方法:经常规RT-PCR法从HCV RNA阳性病人的血清中扩增出HCV E1区的基因片段,经EcoR Ⅰ和Xba Ⅰ双酶切后将其克隆到真核表达载体P cDNA3中,阳性克隆经Sma Ⅰ和Xba Ⅰ双酶切鉴定;用双脱氧终止法测序,同时利用计算机软件对其推定的氨基酸序列进行分析.结果:RT-PCR扩增产物经酶切过夜后与经过同样双酶切的真核表达载体PcDNA3连接,阳性克隆经Sma Ⅰ和Xba Ⅰ酶切后产生了预期大小的144bp的片段 .测序后其核苷酸序列与已经报道的HCV Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型的同源性分别为72.8%、93.25% 、61.96%和56.44%;其推定的氨基酸序列的同源性分别为77.3%、95.7%、54.6%和51.35%;与已经报道的中国株的同源性为95.06%和93.25%;属HCV Ⅱ型; 经计算机辅助分析表明该片段内含有4个可能的糖基化位点,1个跨膜区,其氨基端为信号肽序列,在跨膜区的两端分别含有2个和1个抗原决定簇, 而每一个抗原决定簇内均含有1个糖基化位点,该片段内还含有2个T细胞识别位点.结论:本实验克隆的HCV E1基因属Ⅱ型,为我国流行的基因型,其基因的一级结构具备进行有关HCV核酸免疫的研究条件,其真核表达载体的构建,为进一步研究HCV E1基因的功能及HCV基因免疫的研究创造了条件.     

卡介苗治疗HBsAg携带者无效

卡介苗治疗ＨＢｓＡｇ携带者无效李岱，兰晓青，王宇（新疆哈密红星医院８３９０００）自Ｍｃｇｉｙｎｎ等１９８２～１９８４年在美国费城的东南亚难民营的研究中发现，纯蛋白衍化物试验法（ＰＰＤ）和ＨＢｅＡｇ的反相关关系，并提出宿主对结核杆菌的反应可能抑制ＨＢＶ...     

正常人血清中乙型肝炎病毒相关抗体与其DNA间关系的研究

近几年人们对ＨＢＶ相关抗体 ,尤其是抗 ＨＢｓ的意义有了新的认识 ,发现抗 ＨＢｓ( )慢性肝病患者体内有ＨＢＶ存在和复制。正常人ＨＢＶ相关抗体阳性血清中是否也有ＨＢＶ存在和复制仍不十分清楚 ,探讨它对进一步控制ＨＢＶ的传播、理解输血后乙型肝炎的发生以及器官移植等方面可能有重要意义。另外 ,本研究采用ＥＬＩＳＡ对基因扩增产物进行了量化研究。一、资料与方法1.血清标本选择 :入选血清要求ＨＢｓＡｇ(- )、ＨＢｅＡｇ(- )、肝功能正常、无肝炎病史、ＨＢＶ抗体阳性的自然感染者和ＨＢＶ疫苗接种者 ,分组见表 1。ＨＢＶ血清学…     

急性病毒性肝炎患者中庚型肝炎病毒RNA检测研究

为观察庚型肝炎病毒在急性病毒性肝炎中感染情况,对239例急性肝炎患者的血清,采用两步法筛选进行HGV RNA的检测,并经HGV RNA确证试验,结果显示:HGV RNA阳性者9例,其中合并乙肝1例,合并丙肝3例,合并戊肝1例,非甲-戊型肝炎中占4例。提示:①HGV与其它型肝炎病毒重叠感染较多。②6例患者无输血史,而HGV RNA仍为阳性,提示HGV的输血外传播。③NA-E急性肝炎患者中,HGV的阳性率为23.5％,证实HGV为其病原之一,同时提示还可能存在其它的致病因子。     

乙型肝炎病毒pX相关蛋白研究进展

目前已知在乙型肝炎病毒(HBV)的致癌过程中,HBV X基因及其产物X蛋白(pX)具有重要意义.虽然X基因的转基因小鼠可诱发肝癌(HCC)的发生[1],pX对多种癌基因均具反式激活作用[2],且pX有与p53蛋白结合的作用,在蛋白水平使靶细胞中抑癌基因及其产物的功能发生改变,但迄今为止pX的确切致癌机制仍不清楚.由于DNA的复制与转录、蛋白质的翻译和信号的传导等诸多代谢过程都是各种蛋白相互作用的结果,因此,寻找鉴定细胞内能与HBV pX相互作用的X相关蛋白(X-associated protein XAP,或X-interacting protein XIP)成为目前探讨HCC与pX关系研究的热点之一,并已取得初步结果.     

聚合酶链反应杂交ELISA对肝炎患者血清HCV RNA的测定和分析

目的 应用丙型肝炎病毒（HCV）聚合酶链反应杂交酶联法（HCV－PCR－H ELISA）152份各型肝炎血清进行HCV RNA测定和分析。方法 利用标记生物素的寡核苷酸引物对患者血清进行PCR扩增，扩增产物与结合在微孔反应板的HCV特异探针快速杂交，通过抗生物素－酶联反应判定结果。结果 152份肝炎患者中，HCV RNA的检出率为57．9％（88／152），其中抗－HCV阳性组的检出率为81．8％（72／88）。抗－HCV与HCV RNA的总符合率为78．9％（120／152）。对5例丙型肝炎患者应用α干扰素治疗者追访显示，HCVRNA的消长与抗病毒药物疗效一致。结论 HCV－PCR－H ELISA方法简便、稳定、敏感、特异，为半定量指标，可应用于HCV感染的临床诊断和抗病毒药物疗效判定。